沈进
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 供职机构：江苏大学临床医学院更多>>
- 发文基金：江苏省普通高校研究生科研创新计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于hxgprt^-缺陷的弓形虫顶质体荧光突变株的构建被引量：1
- 2012年
- 目的:构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记顶质体的弓形虫突变株,建立检测顶质体的简便方法。方法:扩增顶质体酰基载体蛋白(acyl carrier protein,ACP)基因并构建转染载体pHX-ACP-GFP,转入弓形虫hxgprt-株速殖子,经霉酚酸和黄嘌呤筛选荧光突变株。激光共聚焦显微镜和蛋白质印迹技术检测突变株ACP-GFP融合蛋白的表达。结果:通过霉酚酸和黄嘌呤筛选,可以在1周内获得突变株。激光共聚焦显微镜下观察到ACP-GFP融合蛋白聚集于顶质体,用抗GFP抗体能检测出ACP的转运肽型和成熟型蛋白。结论:顶质体荧光突变株可清晰标记出顶质体的位置,借助GFP标签即可检测融合蛋白的表达。
- 吴亮姜旭淦李礼鞠爱萍沈进傅行礼陈盛霞周红
- 关键词：弓形虫突变株绿色荧光蛋白
- 弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨不同数量弓形虫速殖子感染对HeLa细胞凋亡的影响。方法:24孔板培养HeLa细胞16 h,各孔接种不同数量弓形虫速殖子继续培养4 h,在培养液中加入终质量浓度为0.5μg/mL放线菌素D诱导凋亡,于加放线菌素D后8、12、24、36 h收集细胞,采用Hoechst 33258染色法和Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率。结果:当虫体量/细胞量(MOI)≤1时,弓形虫感染表现为抑制放线菌素D诱导的HeLa细胞凋亡;随着虫体数量增加(MOI>1)和感染时间延长(≥24 h),虫体感染则表现为促进HeLa细胞凋亡。结论:弓形虫感染可影响体外培养的HeLa细胞的凋亡,影响程度与感染虫体数量相关。
- 沈进陈颖婷吴亮吴腊梅王晓陈盛霞曹建平
- 关键词：刚地弓形虫细胞凋亡HELA细胞放线菌素D
- 果糖氨基酸氧化酶的原核表达及在糖化血红蛋白检测中的初步应用
- 2013年
- 目的原核表达果糖氨基酸氧化酶(FAOX),建立检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)的酶法并作初步评价。方法构建重组质粒pET32a(+)/FAOX,转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),获得重组FAOX;以糖基化六肽为底物检测酶活性;初步建立检测HbA1c的酶法并进行方法学评价。结果重组FAOX在Rosetta(DE3)中高效表达,SDS-PAGE电泳分析显示其相对分子质量(Mr)约65 000;酶比活性为22 U/mg;建立的检测HbA1c酶法的批内、批间、日间CV均<5%;低值(5.1%)和高值(15.8%)HbA1c的回收率分别为98.1%和98.9%;总胆红素(<220μmol/L)、三酰甘油(<10.8 mmol/L)和维生素C(<500 mg/L)对酶法检测HbA1c无影响;与HPLC法和HA-8160型全自动糖化血红蛋白仪测定结果进行比较,相关系数分别为0.977和0.993。结论 FAOX可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中高效表达,用其建立的检测HbA1c的酶法可满足临床对HbA1c测定的要求。
- 李礼姜旭淦吴亮鞠爱萍沈进陈盛霞
- 关键词：原核表达糖化血红蛋白
- 弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及鉴定被引量：5
- 2013年
- 目的:原核表达刚地弓形虫RH株棒状体蛋白(rhoptry proteins,ROPs)18,建立检测和定位虫体ROP18蛋白的方法。方法:运用PCR技术扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因,克隆至pET-28a(+)载体,转化至大肠埃希菌Rosetta中诱导表达,经KCl染色切胶纯化重组ROP18蛋白,并制备其兔多克隆抗体。采用蛋白质印迹技术和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测和定位ROP18在弓形虫速殖子体内的表达。结果:成功表达重组ROP18蛋白,并获得其多克隆抗体。经蛋白质印迹技术检测出虫体ROP18特异性条带,IFA技术检测出ROP18分布于虫体棒状体。结论:通过制备多克隆抗体,利用蛋白质印迹技术和IFA技术能检测和定位ROP18蛋白在弓形虫体内表达。
- 鞠爱萍吴亮沈进李礼姜旭淦陈盛霞
- 关键词：弓形虫原核表达
