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重组蓖麻毒素A链拮抗分子的设计: 蓖麻毒素(ricin)是从植物蓖麻子中分离得到的一种Ⅱ型核糖体失活蛋白，其A链(RA)为效应链，具有N-糖苷酶活性，通过催化28SrRNAS/R结构域第4324位脱去一个保守的腺嘌呤，使核糖体60S亚基失活，从而阻断蛋白...; 王顺涛; 关键词：蓖麻毒素拮抗肽单域抗体; 文献传递

重组蓖麻毒素A链的原核表达和单克隆抗体的制备、鉴定及应用被引量：2: 2007年; 目的实现重组蓖麻毒素A链（rRTA）的高效表达,获得rRTA的单克隆抗体,建立基于单抗的蓖麻毒素检测方法.方法用计算机辅助设计的RNA二级结构预测和偏性密码子等手段设计引物用PCR将rRTA基因克隆至载体pE132a（＋）用双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定 IFTG诱导rRTA原核表达载体pET32a（＋）/rRA/BL21,用镍离子亲和层析纯化,ELISA及Western blot鉴定rRTA蛋白 rRTA免疫Balb/c小鼠,建立杂交瘤细胞株,获得抗rRTA的单克隆抗体,用Westem blot鉴定.结果构建了rRTA原核表达载体pET32a（＋）/rRA/BL21,实现了rRTA在大肠杆菌BL21中的高效可溶性表达,获得了高纯度约10～20 mg/L rRTA 获得抗rRTA的单克隆抗体建立的ricin EIJSA检测方法检出ricin的最低浓度为3.125 ng/mL,目视比色对蓖麻毒素的最低检出浓度为6.25 ng/mL.结论本研究表达的rRTA及其单克隆抗体和基于单抗的ricin检测方法,将在肿瘤生物治疗、ricin生物恐怖袭击的侦检、治疗和预防中发挥重要作用.; 郭建巍王顺涛郭黎明冯健男马骢沈倍奋; 关键词：蓖麻毒素蓖麻毒素A链融合蛋白

重组蓖麻毒素A链的融合表达、纯化及活性研究被引量：2: 2005年; 目的: 制备有高生物活性的重组蓖麻毒素A链蛋白(RTA). 方法: 在RTA序列的C末端引入KDEL信号肽, 克隆到含有硫氧还蛋白(Trx)的融合表达载体pET32a中, 转入大肠杆菌BL21, 在低温(20℃)下用低浓度(0.4 mmol/L)IPTG诱导重组质粒进行表达.表达上清用钴离子亲和层析柱进行纯化, 20～100 mmol/L咪唑溶液洗脱目的蛋白.纯化蛋白经SDS-PAGE电泳与Western blot鉴定后, 对pUC19质粒进行超螺旋dsDNA裂解研究. 结果: 每升细菌培养物回收约60 mg 的纯化蛋白, 纯度大于90%, Mr约45 000, 且3 μg纯化蛋白即可以对1 μg超螺旋dsDNA产生明显的裂解活性. 结论: 利用pET32a表达系统可以快速获得大量有高生物活性的可溶性RTA-Trx融合蛋白.; 王顺涛胡美茹郭建巍冯健男沈倍奋

抗蓖麻毒素A链人源化单域抗体的设计、原核表达及生物活性检测: 2008年; 目的运用计算机辅助蛋白质分子设计的方法设计针对蓖麻毒素A链（RTA）的拮抗肽，实现在大肠杆菌BL21中的可溶性表达，并对其生物学活性进行评价。方法根据RTA的晶体结构、RTA-rRNA相互作用复合物模型，在CVFF（consistent-valence force field）、Amber力场下，对RTA的空间构象进行理论模拟，初步确定其生物活性功能域；然后针对该功能域设计小分子拮抗肽，并借助人抗体重链可变区骨架，在CDR3区对拈抗肽进行展示，用重叠延伸PCR全基因合成人源化的单域抗体并克隆至载体pET-32a（＋）；双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定；IPTG诱导人源化的单域抗体表达，用镍离子亲和层析纯化，竞争ELISA和MTr法分别进行结合和中和活性检测。结果从头搭建并设计合成了人源化的单域抗体，实现了其原核表达，并进行了生物活性检测；建立了基于人源化的单域抗体的RTA和蓖麻毒素检测方法。结论研究结果为新型蓖麻毒素小分子拈抗剂的研制奠定了理论和实验基础。; 郭建巍冯健男王顺涛马骢王珍光蒋学兵沈倍奋; 关键词：蓖麻毒素

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王顺涛