童桂香 作品数:33 被引量:189 H指数:10 供职机构: 广西大学 更多>> 发文基金: 广西壮族自治区科技攻关计划 广西壮族自治区直属公益性基本科研项目 广西留学回国人员基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 环境科学与工程 更多>>
香港巨牡蛎ISSR-PCR反应体系的建立及优化 被引量:1 2011年 以香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)基因组DNA为模板,采用正交设计及单因素比较试验,分别对Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶和DNA模板浓度的PCR原料进行优化,并通过温度梯度PCR,筛选适宜的退火温度。确立了香港巨牡蛎的最适ISSR-PCR反应体系:25μL反应体系中含PCR 1×Buffer,2.5 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTPs、0.2μmol/L引物、1.2 U Taq DNA聚合酶、20 ng DNA模板。反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,48~54℃(随引物而确定)退火1 min,72℃延伸1.5 min,35个循环;72℃延伸10 min。利用所建立的ISSR-PCR反应体系对香港巨牡蛎基因组DNA进行扩增,获得了清晰、重复性好、多态性高的DNA谱带,为进一步利用ISSR分子标记研究香港巨牡蛎的遗传多样性奠定了基础。 黎小正 童桂香 韦信贤 吴祥庆 陈康黄沙鳖温和气单胞菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:22 2010年 从患病黄沙鳖的肝脏组织中分离到一株菌株(NN090617),经人工感染试验证实其具有较强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性鉴定,该菌的形态和生理生化表现为:革兰氏阴性、两端钝圆的杆菌,葡萄糖产酸,氧化酶、触酶、V-P阳性,鸟氨酸脱羧酶、脲酶、七叶苷阴性。采用BioFosun微生物鉴定系统对该菌进行鉴定,将适当浊度的细菌悬液接种GN48板条培养16~24 h后读出结果,将结果输入BioFosun-Ⅰ软件分析鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria),概率达99%,相似指数和距离指数分别为0.858、2.000,鉴定结果良好,结合形态和生理生化特点将其鉴定为温和气单胞菌。纸片琼脂扩散法药敏试验结果表明,该菌对供试的15种抗菌药物中的头孢拉定、头孢哌酮、氧氟沙星等6种药物敏感,对苯唑青霉素、庆大霉素、克拉霉素等9种药物均存在不同程度的耐药性。 童桂香 韦信贤 黎小正 吴祥庆 叶欣宇关键词:黄沙鳖 温和气单胞菌 药敏试验 鸡传染性贫血病毒荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:8 2009年 根据鸡传染性贫血病毒基因组保守区域设计1对扩增片段为164 bp的特异性引物,应用SYBR GreenⅠ染料建立了鸡传染性贫血病毒(CIAV)荧光定量PCR检测方法。以本室构建的阳性重组质粒作为模板,制定标准曲线,对CIAV阳性样品进行了敏感性、特异性和重复性、稳定性试验,并应用于临床检测。结果表明引物最佳终浓度为0.2μmol/L,制作的标准曲线定量浓度范围宽,最低可检测到每个反应相当于10个拷贝的标准品DNA;与IBDV、ARV、MG都不反应;重复性、稳定性试验的变异系数都较小。对保存的25份疑似CIAV样品进行荧光定量PCR检测,结果检出9份阳性。本研究建立的荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床上鸡感染CIAV的检测。 童桂香 谢芝勋 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基关键词:鸡传染性贫血病毒 SYBR 四重PCR检测致病性嗜水气单胞菌 被引量:4 2013年 目的建立一种能够快速准确地检测致病性嗜水气单胞菌的四重PCR方法。方法根据致病性嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶(ahpA)基因、气溶素(aerA)基因和溶血素(hlyA)基因的保守序列以及嗜水气单胞菌的16SrRNA基因种属特异性序列分别设计4对特异性引物,通过优化各引物浓度、退火温度和Mg2+浓度,确定了四重PCR的最佳反应条件;然后进行特异性和敏感性试验,并比较其与常规微生物学方法对不同菌株和临床样本的检出率。结果该方法特异性好,能特异性检测并鉴别出嗜水气单胞菌致病性菌株;检测灵敏度高,最低可检测到约100fg的嗜水气单胞菌基因组DNA;对9株嗜水气单胞菌的检测结果与常规微生物学方法一致,对56份送检的水产动物样品的检出率为21.4%,高于常规微生物学方法的16.1%,两者检测结果符合率为94.6%。结论成功建立了能同时检测嗜水气单胞菌16SrRNA、aerA、ahpA和hlyA基因的四重PCR方法,能快速、准确地对嗜水气单胞菌进行检测并区分致病性与非致病性菌株。 韦信贤 杨先乐 童桂香 吴祥庆 谢宗升 黄国秋 廖永志 叶欣宇 黎小正关键词:嗜水气单胞菌 RRNA基因 禽呼肠孤病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 禽呼肠孤病毒(ARV)感染在世界范围内存在,感染鸡临床症状表现为关节炎,腱鞘炎,慢性呼吸道疾病,吸收障碍综合征(MAS),心包炎,心肌炎,免疫抑制,导致感染鸡生长缓慢和饲料转化率降低,给养禽业造成巨大经济损失。为建立检测... 谢芝勋 童桂香 谢丽基 刘加波 唐小飞 邓显文 庞耀珊 谢志勤关键词:禽呼肠孤病毒 文献传递 TaqMan-MGB探针法快速检测对虾Taura综合征病毒的研究 被引量:1 2011年 为建立Taura综合征病毒(Taura syndrome virus,简称TSV)的TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PC方法,根据TSV衣壳蛋白基因保守序列设计引物和TaqMan-MGB探针,扩增产物长度为118bp。将PCR产物克隆到pGM-T载体,重组质粒经筛选鉴定、SalⅠ单酶切,得到线性化转录模板DNA,经体外转录获得标准品RNA。以体外转录的RNA作为模板,进行一步法荧光定量RT-PCR反应,根据RNA模板拷贝数与Ct(Cycle threshold,Ct)值制备了标准曲线,制作的标准曲线在2×101拷贝/μL≤TSV RNA≤2×107拷贝/μL的范围内具良好的线性关系,可以用于TSV的定量分析,检测灵敏度为20个拷贝数。特异性、重复性试验结果表明,该方法对SPF对虾组织RNA没有扩增反应,表现出良好的特异性;组内和组间实验变异系数分别为0.32%~1.84%和0.79%~2.71%。利用TaqMan-MGB探针建立检测TSV的一步法荧光定量RT-PCR方法可用于对虾TSV的检测。 韦信贤 童桂香 谢宗升 黎小正 吴祥庆 廖永志 黄国秋关键词:TSV TAQMAN-MGB探针 RT-PCR 黄喉拟水龟一种慢性传染病的病原鉴定与防治 被引量:6 2009年 从发生慢性致死性传染病的黄喉拟水龟肝、肺分离到一革兰氏阴性的菌株,经人工感染实验证实其为该病的病原菌。对该菌进行生理生化指标检验分析,结果与报道的摩根氏菌一致。采用BIOLOG自动微生物鉴定系统对该菌进行鉴定,结果显示为摩氏摩根氏菌摩根氏亚种(Morganella morganii ss morganii),可能性(PROB)为99%,相似性(SIM)和位距(DIS)分别达0.742和3.90。纸片扩散法药敏试验结果表明该菌对先锋必高度敏感,对氧氟沙星、恩诺沙星、阿米卡星中度敏感,对大多数药物存在耐药性。综合对该病病原的形态观察、生理生化特征及微生物鉴定系统鉴定结果,确定该病原是摩根氏菌,并根据药敏试验结果选用先锋必对病龟进行治疗,病情得到控制,病龟一周内康复。 韦信贤 黎小正 童桂香 吴祥庆 庞燕飞关键词:黄喉拟水龟 慢性传染病 病原鉴定 ISSR-PCR技术及其在水产生物遗传多样性研究中的应用 被引量:7 2010年 简单重复序列间扩增(Inter-simple sequence repeat PCR,ISSR-PCR)是基于微卫星序列创建的分子标记方法,具有中性、量大的优点,并以重复性好、操作简单、多态性丰富及适合大样本基因组DNA的检测而被广泛应用于动植物种质资源、种群遗传多样性、标记辅助选择、性状分析与种系发生学等方面的研究。文章对ISSR-PCR技术的原理、方法、特点及其在水产生物遗传多样性研究中的应用现状和前景进行综述,以期为ISSR-PCR技术在水产生物遗传多样性研究中的有效应用提供理论参考。 黎小正 童桂香 韦信贤 吴祥庆关键词:ISSR-PCR 水产生物 北部湾近江牡蛎地理标志产品标准化及产业化技术研究和应用示范 黎小正 韦信贤 吴祥庆 庞燕飞 黄玉柳 廖永志 黄鸾玉 童桂香 秦振发 吴明媛 陈静 谢宗升 项目所属科学技术领域为水产(养殖)学、分子生物学领域。主要技术内容1、针对近江牡蛎的随机扩增多态DNA(RAPD)、微卫星标记(ISSR-PCR)及同工酶电泳分析。2、研究分析钦州湾近江牡蛎区分于其他地区近江牡蛎的相关分...关键词:关键词:牡蛎 分子生物学 水产养殖 鱼类寄生虫病的检测与诊断程序及其应用 被引量:1 2010年 借鉴GB18448-2001和GB14922.1-2001,参考国内外实验动物寄生虫学质量控制的有关文献资料,结合实际检测中积累的大量实验数据和相关经验,对鱼类寄生虫病的检测和诊断技术进行了整理归纳,总结出科学合理、操作性强,检出率高的检测及诊断程序,为防治和控制鱼类寄生虫病提供科学依据。 黄玉柳 黎小正 吴祥庆 庞燕飞 黄国秋 韦信贤 童桂香关键词:鱼类 寄生虫病