边疆
- 作品数：12 被引量：30H指数：3
- 供职机构：第三军医大学基础部全军免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 溶剂诱导固相合成MAGE-2表位多肽异构的LC-MS研究
- 2001年
- 近年来随着黑色素瘤特异性免疫治疗研究的不断深入,其肿瘤特异性抗原的发现及其细胞毒性T细胞(CTL)表位的预测及鉴定成为特异性免疫治疗及其多肽疫苗研制的重要前提.预测黑色素瘤抗原基因-2(MAGE-2)的HLA-A2限制性CTL表位的方法也日显成熟,预测出的表位其组成通常为10个氨基酸左右的多肽,随后进行固相合成.因不同氨基酸活化方式及偶联效率的差异,通常对合成的表位多肽进行梯度反相高压液相色谱(RP-HPLC-UV)分析制备,以确保下一步细胞功能性研究即细胞杀伤验证的特异性;MAGE-2众多表位多肽都表现较强的疏水性,虽然分析制备前可供疏水肽选择的有机溶剂系统较多,乙醇及甲醇溶剂系统可能最具代表性.当用乙醇或甲醇溶解众多MAGE-2疏水性表位多肽样品后进行色谱分析时发现,合成的MAGE-2表位多肽的RP-HPLC分析时,214 nm峰面积积分百分比都偏小,显示其合成时氨基酸偶联率较低,由此色谱分析结果推出的合成的低偶联率与理论上单个氨基酸99.5%的平均偶联率差距太大;随后的表位氨基酸组成分析也未发现有诸如半胱氨酸等可能导致折叠异构的氨基酸存在;如何消除这一困惑?正基于此,本实验随机选用了固相合成MAGE-2表位(161-169),通过不同溶剂处理后,在LC-MS技术平台上对其反相行为作了初步的研究.……
- 周伟吴玉章边疆贾正才唐艳邹丽云
- 人源多克隆抗血清识别的HBsAg模拟表位筛选被引量：7
- 2000年
- 目的 获得与乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)人源抗血清特异结合的噬菌体呈现模拟多肽 ,加深对乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)B细胞表位的了解。方法 基于噬菌体小衣壳蛋白 (gpⅢ )构建 12氨基酸随机肽库。经混合多克隆人源HBsAb阳性血清的三轮筛选 ,阳性噬菌体经ELISA和竞争实验证实 ,并测定其对应呈现多肽的插入序列 ,分析其氨基酸序列与HBsAg的相似性。结果 两个噬菌体颗粒在ELISA实验中呈阳性 ,其中之一被竞争实验证实 ,此模拟多肽序列与HBsAg135～ 14 6相似。结论 采用疾病抗原的人源多克隆抗血清筛选噬菌体随机肽库 ,能获得抗原的模拟表位 。
- 万瑛吴玉章唐艳边疆
- 关键词：乙型肝炎HBSAGB细胞表位
- 噬菌体呈现疫苗诱导乙型肝炎病毒特异性细胞毒性T细胞反应被引量：1
- 2000年
- 目的 研究噬菌体呈现颗粒作为亚单位疫苗是否能在体诱导乙型肝炎特异性细胞毒性T细胞反应。方法 构建呈现MHCI类分子 (H 2 d)限制性表位HBs2 8～ 39的噬菌体颗粒 ,小剂量、无佐剂接种BALB/c(H 2 d)小鼠。结果 重组噬菌体呈现颗粒在体诱导H 2 d 限制的HBs2 8～ 39特异性细胞毒性T细胞反应。结论 丝状噬菌体呈现疫苗有效诱导细胞毒性T细胞反应 。
- 万瑛吴玉章边疆王祥智周伟贾正才唐燕周丽芸
- 关键词：丝状噬菌体CTL表位
- 噬菌体呈现颗粒疫苗诱导抗肿瘤细胞毒性T细胞反应被引量：1
- 2000年
- 目的 构建呈现肿瘤相关抗原P815A的噬菌体颗粒 ,在体诱导针对肥大细胞瘤P815的特异性细胞毒性T细胞 (CTL)反应。方法 构建呈现CTL表位P1A35～ 4 3 的噬菌粒载体 ,大量制备呈现此表位的重组噬菌体颗粒 ,小剂量、无佐剂皮下免疫DBA/2小鼠 (H 2 d) ,采用51Cr释放法、ELISPOT观察针对肥大细胞瘤P815的CTL反应。结果 重组噬菌体呈现颗粒疫苗在体诱导了针对弱抗原P815A的CTL反应。结论 丝状噬菌体呈现疫苗增强肿瘤相关抗原的免疫原性 。
- 万瑛吴玉章边疆赵建平王祥智周伟周丽芸唐燕贾正才
- 关键词：肿瘤丝状噬菌体免疫治疗CTL
- O-乙酰氨基半乳糖基化氨基酸的化学合成被引量：3
- 2000年
- 目的 为获得精确定位糖基化糖肽 ,合成O 乙酰氨基半乳糖基化氨基酸 ,作为糖肽固相合成的原料。方法 利用环状糖结构的半缩醛羟基可与含侧链羟基氨基酸的羟基形成糖苷键 ,用化学方法 ,使过乙酰化GalNAc与氨基被 9 Fluorenylmethoxycarbonyl (N α Fmoc)保护的丝氨酸或苏氨酸连接。结果 反应产物通过反相制备HPLC纯化后 ,可作为O 连接糖肽合成构建单位 (Buildingblocks)在固相多肽合成仪上合成所需的病毒或肿瘤相关糖肽 ,并可进一步研究其生物学活性。结论 本法相对易操作 ,重复性好 ,收益率也较高 ,更重要的是糖基化的均一性好 。
- 周吉军王祥智吴玉章贾正才周伟边疆
- 关键词：糖肽固相合成
- Delta Pak C_(18)填料用于P44纯化制备工艺可行性研究
- 2000年
- 目的 研究DeltaPakC18反相填料用于P44纯化制备工艺可行性 ,为固相合成疏水性肽苗的制备工艺作探索性研究。方法 选用美国Waters公司DeltaPakC18反相色谱填料和高压液相色谱系统Delta6 0 0 ,采用乙腈、三氟乙酸体系为流动相 ,对P44从分析柱、半制备柱、径向加压制备柱 3个水平进行了基线分离载量及放大的研究。结果 目标肽峰面积积分分别为 71.14 %、70 .12 %、6 9.6 8% ,收率放大前后趋一致 ,载量分别为 10 0 μg、<5mg、<10mg ,制备目标肽收峰经SymmetryC18柱分析及PDA纯度鉴定为单一组分。结论 该填料可作为P44的小量精制 。
- 周伟吴玉章王祥智边疆贾正才
- 关键词：DELTAPAK载量
- 技术方法LC/MS鉴定固相合成多肽P14分子异构体存在的方法被引量：1
- 2000年
- 目的 确认固相合成多肽P14分子是否存在异构体。方法 通过HP 110 0与ESI离子源PEAPI2 0 0 0液质联用 (LC/MS)分离P14肽 ,在质谱鉴定合成肽主峰为理论设计分子量前提下 ,应用PESCIEXAn alyst 1.0b3质谱分析软件分析子离子流色谱图。结果 从总离子流色谱图中精确提取P14肽Q1正离子双电荷质量数 ,形成P14肽质量数子离子流色谱图 ,其中有散在的不同保留时间的质量数存在。结论 P14肽有异构体存在 ,与结合理论上分析P14氨基酸组成发现 (P14组成中有 6个胱氨酸 ,其存在无疑增加了分子内二硫键形成的可能性 )
- 周伟吴玉章边疆贾正才
- 关键词：固相合成异构体LC/MS
- 溶剂诱导固相合成MAGE-2表位多肽异构的LC-MS研究
- 近年来随着黑色素瘤特异性免疫治疗研究的不断深入,其肿瘤特异性抗原的发现及其细胞毒性T细胞(CTL)表位的预测及鉴定成为特异性免疫治疗及其多肽疫苗研制的重要前提.预测黑色素瘤抗原基因-2(MAGE-2)的HLA-A2限制性...
- 周伟吴玉章边疆贾正才唐艳邹丽云
- 关键词：多肽疫苗抗原基因异构现象
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒HBcAg免疫优势CTL表位多肽在HBV转基因小鼠体内的免疫学功能研究被引量：12
- 2003年
- 目的 探讨基于乙型肝炎 (Hepatitisbvirus,HBV)核心抗原免疫优势细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlympho cyte,CTL)表位的治疗性多肽抗原组分、结构以及在HBV转基因小鼠体内的免疫学功能。方法 用分子设计的理论和方法 ,设计基于HBV核心抗原免疫优势性CTL表位、Pre S2B细胞表位及破伤风类毒素通用TH 表位的治疗性多肽疫苗候选分子 ,经Merrifield固相多肽合成技术合成 ,经高效液相色谱 (HPLC)纯化、鉴定。以HBV转基因小鼠为试验对象 ,进行体内免疫学功能研究。结果 所设计治疗性多肽分子可在体诱导较强的抗原特异性CD8+ T细胞应答和适度的抗体反应 ,并抑制HBV特异性抗原的分泌和乙型肝炎病毒复制。结论 提示所设计基于HBV核心抗原免疫优势性CTL表位、Pre S2B细胞表位及破伤风类毒素通用TH 表位的多肽分子可作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗候选分子。
- 石统东边疆万瑛贾正才周伟邹丽云吴玉章
- 关键词：乙型肝炎病毒HBCAG免疫CTLHBV转基因小鼠免疫学功能
- 乙型肝炎病毒抗原表位模拟多肽诱导CTL应答的研究(英文)被引量：7
- 2003年
- 目的 应用分子设计技术设计治疗性多肽 ,以探讨基于乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus,HBV)核心抗原优势细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlymphocyts,CTL)表位的多肽设计与启动HLA Ⅰ限制性HBV特异性CD8+ T细胞应答的关系。方法 合成含HBcAg免疫优势CTL表位、Pre S2蛋白优势B细胞表位和破伤风类毒素通用TH 表位的多肽 ,并进行HLA A2 + 人PBMC体外和Balb/c小鼠体内免疫学功能研究。结果 上述多肽可在体内外诱导CD8+ CTL应答。以棕榈酸为分子内佐剂的Palm p4 4可诱导较强的CD8+ CTL应答 ,与单纯多肽比较不需另加佐剂。结论 脂类分子内佐剂可显著提高多肽的免疫原性 ;Palm p4 4可作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗设计较有效的候选分子。
- 石统东吴玉章边疆贾正才周伟邹丽云
- 关键词：乙型肝炎病毒表位模拟多肽CTL应答T淋巴细胞
