陈卫东
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：中国医学科学院基金国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人GM－CSF基因在昆虫细胞中表达的研究被引量：2
- 1995年
- 本工作构建的昆虫表达重组体ｐＡＣ６１０－ＧＭＴ，是在ＡｃＭＮＰＶ的Ｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ启动子控制下，表达去除了信号肽编码顺序的人ＧＭ－ＣＳＦ基因（ｃＤＮＡ）的转染载体。它与野生ＡｃＭＮＰＶ病毒ＤＮＡ共转染Ｓｆ２１细胞，经过筛选得到纯化的可表达人ＧＭ－ＣＳＦ的重组病毒株ｖＡｃＧＭＴ。其感染细胞总ＲＮＡ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析结果表明，重组病毒在ｍＲＮＡ水平有人ＧＭ－ＣＳＰ特异性表达，其表达水平在感染后４８ｈ时达高峰，７２ｈ未见明显下降。感染细胞裂解物的Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ分析和活性测定也证实其蛋白水平的表达，并有人ＧＭ－ＣＳＦ的生物学活性。
- 李江陈卫东贾佩臣何平陈松森李晓平李元
- 关键词：GM-CSF昆虫杆状病毒
- 人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对DNA结合蛋白的影响被引量：4
- 1998年
- 用凝胶迁移率改变实验 (EMSA)研究了人δ珠蛋白基因启动子区 - 6 4C→T点突变对DNA结合蛋白的影响 .人工合成两条 36bp该基因启动子区 - 83～ - 4 8bp之间的片段WOG和MOG ,WOG含有野生型“CAAT样盒”(CCAAC) ,MOG含有变异型“CAAT样盒”(CCAAT ,- 6 4C→T) .结果表明 :(1)在红系细胞MEL ,k56 2以及经Hemin诱导的k56 2细胞中 ,MOG对CCAAT结合蛋白 (CFB)和GATA 1的亲和力显著增加 ;(2 )经Hemin诱导的k56 2细胞中除上述两种因子外 ,还存在两种新的特异DNA结合蛋白C和D ,前者与WOG和MOG结合 ,可能与k56 2细胞受诱导后基因表达提高有关 ;后者只与MOG结合 ,可能与 - 6 4C→T的点突变有关 ;(3)人胚胎发育不同阶段胎肝细胞核抽提物EMSA结果提示人胚胎发育不同阶段δ基因表达被抑制的机制可能不同 .结果证明δ基因启动子缺陷的CAAT样盒是引起δ基因低水平表达的重要因素 ,缺陷的顺式作用元件CAAT样盒通过影响反式因子CBF及GATA
- 寇海萍陈松森陈卫东张劲秋狄旭梁植权
- 关键词：启动子结合蛋白DNAEMSA
- 人干细胞因子cDNA克隆及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：4
- 1997年
- 以超速离心法提取的HepG2细胞总RNA为模板，应用RT-PCR技术扩增得到编码人干细胞因子（SCF）全长CDNA（约0.8kb）。克隆、序列分析确证编码人SCF膜外活性区的CDNA（约0.5kb）结构正确，构建了含有该基因的表达质粒（PBV-mhSCF）并在大肠杆菌中获得高效表达。
- 陈卫东狄旭李江宋飞陈松森梁植权
- 关键词：人干细胞因子CDNA聚合酶链反应基因重组
- 人干细胞因子在大肠杆菌中的表达研究
- 1998年
- 目的 经过改造重组人干细胞因子(human stem cell factor,hSCF),提高其表达量。方法 应用人工合成寡核苷酸引物及PCR技术,改变人干细胞因子hSCF cDNA起始密码子ATG与SD序列之间的距离及在翻译起始区(即N端氨基酸)部分采用大肠杆菌(E.coli)喜用型密码子的策略,使重组表达质粒pBV220-hSCF在E.coli中获得高效稳定表达。结果 DNA序列测定证明基因的阅读框架完全正确。重组人干细胞因子的表达量从改造前占E.coli总蛋白的12%提高到40%左右。纯化的重组hSCF N端17个氨基酸测序结果表明,除第一个氨基酸为甲硫氨酸外,其余与天然hSCF序列完全一致。纯化的重组hSCF经Western blot证明,与标准hSCF一致。结论 提示hSCF cDNA的5′侧翼区结构对其基因表达有显著的影响。
- 毛华赵峻张劲秋狄旭陈卫东陈松森梁植权
- 关键词：SD序列干细胞因子
