侯利华
- 作品数：87 被引量：128H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原单克隆抗体轻、重链可变区基因及其应用
- 本发明涉及抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)单克隆抗体轻、重链可变区基因和基因编码的多肽，以及所述基因和多肽在制备炭疽的新型诊断试剂和治疗药物中的应用。本发明人制备了抗PA特异性单克隆抗体4B2、5E1和2A8杂交瘤细胞株...
- 陈薇李冰徐俊杰李建民刘树玲侯利华付玲
- 文献传递
- 重组人透明质酸酶促皮下注射扩散研究被引量：1
- 2017年
- 目的:探究重组人透明质酸酶(rHuPH20)促皮下注射药物的扩散能力,解决皮下快速给药和大体量给药难题。方法:以台盼蓝模拟联用药物作为可视化示踪剂,研究rHuPH20对皮下注射药物扩散速率的影响;用生理盐水造新西兰兔水肿模型,研究rHuPH20对皮下注射输液量的影响。结果:rHuPH20可极大地增加皮下注射药物的扩散速率和输液量。结论:rHuPH20作为扩散剂使用,可弥补传统皮下注射微小输液量的缺陷,满足皮下注射不同输液量的需求,在替代药物静脉输液方面具有潜在应用价值。
- 姜廷杨伟张金龙吕鹏侯利华陈薇
- 关键词：透明质酸透明质酸酶
- 一种以人复制缺陷腺病毒为载体的埃博拉病毒病疫苗
- 本发明公开了埃博拉病毒GP蛋白密码子优化的一种核苷酸序列，还公开了能够表达该核苷酸序列的人复制缺陷重组腺病毒及在制备预防埃博拉病毒病疫苗中的应用。所述核苷酸序列以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以整合腺...
- 陈薇吴诗坡侯利华宋小红张金龙付玲
- 构象稳定的破伤风毒素Hc片段突变体(HcM)的制备及其免疫原性分析被引量：1
- 2011年
- 破伤风是由破伤风杆菌侵入人体伤口、生长繁殖、产生毒素而引起的一种急性特异性感染,其死亡率高,严重危害人民生命健康。研究证实破伤风毒素重链C端(Hc)具有与毒素受体结合的活性,完全保留了全分子的免疫原性,有望开发成为新的基因工程破伤风亚单位疫苗以替换传统的甲醛灭活类毒素疫苗。由于野生型Hc蛋白(HcW)易形成分子间及分子内二硫键,且各构象分子之间易发生不稳定的转换,为疫苗的生产工艺带来困难,因此,通过将破伤风HcW蛋白的869位半胱氨酸突变为丙氨酸,构建构象稳定的破伤风亚单位疫苗突变体HcM,对HcM进行表达、发酵和纯化,研究其在不同条件下的稳定性,比较其与受体GT1b亲和力的变化及免疫原性。实验结果表明HcM在大肠杆菌中获得了高效可溶性表达,通过QXL柱、phenyl-Hs柱和source30Q柱三步纯化,可获得纯度95%以上的HcM蛋白。纯化后的HcM蛋白在不同保存条件下构象稳定且保持了与破伤风毒素受体GT1b结合的活性。免疫小鼠后,HcM能够诱导小鼠产生高滴度抗体并能够保护小鼠抵御1×103 LD50剂量的破伤风毒素攻击。以上结果表明构象稳定的HcM有望成为新的破伤风重组亚单位疫苗候选者,其生产工艺简单、稳定且保持了与野生型相似的免疫原性,不论是针对日常破伤风治疗还是对于国家应对突发事件(战争、地震等灾害)的药品储备均具有重大意义。
- 于蕊侯利华刘树玲于长明张晓艳刘颖陈薇
- 关键词：破伤风HCM亚单位疫苗
- 鼠疫抗原LcrV在乳酸乳球菌中的表达与鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)为载体,将鼠疫抗原LcrV基因导入乳酸乳球菌内,构建重组肠道微生态菌株,作为黏膜免疫疫苗的先期探索和尝试。方法采用酸诱导P170启动子,乳酸乳球菌本身的SP310mut2信号肽,将鼠疫杆菌LcrV抗原结构基因克隆到质粒pAM J397上,电转化感受态Lactococcus lactis PSM565。结果经重组子PCR鉴定,SDS-PAGE检测,W estern-b lot鉴定,在Lactococcus lactisPSM565/pAM J397-V培养基上清中获得了38 kD的鼠疫抗原LcrV蛋白。结论在乳酸乳球菌中成功表达了鼠疫V抗原,为下一步鼠疫黏膜疫苗的研制打下基础。
- 曹晓梅张虎成李曼刘树玲侯利华付玲陈薇
- 关键词：乳酸乳球菌黏膜免疫
- hIL-16 cDNA的克隆、测序及在E.coli中的表达与纯化研究被引量：6
- 1999年
- 在国内首次从人的外周血单个核细胞（PBMC）中克隆了人白细胞介素—16（hIL－16）cDNA，并应用一种新型的大肠杆菌表达系统一硫氧还蛋白表达系统，成功地表达了重组hIL-16。hIL-16cDNA的扩增：从人PBMC中提取总RNA，poly（T）8-12反转录cDNA，以半巢式PCR扩增出特异的DNA片段。hIL-16cDNA的克隆、测序与表达：利用E．coli表达载体pTrxFus，构建hIL－16。DNA的重组质粒，转化E．coli后，经色氨酸诱导，表达出相对分子质量（Mr）为30000的可溶性融合蛋白，表达量占菌体蛋白的30％。序列测定证实，此片段长393bp，确为hIL-16cDNA。经一步渗透压休克，即获得了高纯度的表达蛋白。
- 杜勇杜桂鑫侯利华汪涛王海涛
- 关键词：CDNA克隆测序
- 一种新的丙型肝炎病毒单链丝氨酸蛋白酶基因的构建、表达与鉴定
- 2002年
- 根据丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,设计并构建了一种新的单链型丝氨酸蛋白酶分子 .该分子由辅因子NS4A的核心序列、柔性连接子GSGS和NS3丝氨酸蛋白酶结构域组成 .利用设计的 3条引物 ,通过 2轮PCR获得单链丝氨酸蛋白酶基因 ,插入原核表达载体pQE30中 ,转化大肠杆菌M15 ,获得重组克隆 .经低剂量诱导和低温培养 ,目的基因获得高水平可溶表达 .以金属螯合层析法纯化的重组蛋白纯度达 95 %以上 .间接ELISA法检测 98份血清证实 ,该蛋白具有良好的抗原性和特异性 ;以重组蛋白底物NS5ab和单链丝氨酸蛋白酶建立了简便、实用的丝氨酸蛋白酶体外活性检测系统 ;以该系统观察了PMSF和EDTA对蛋白酶活性的影响 .结果表明 ,PMSF能够抑制蛋白酶的酶切活性 ,而EDTA不能抑制酶的活性 .单链型HCV丝氨酸蛋白酶的成功表达以及体外活性检测系统的建立 ,为丝氨酸蛋白酶抑制剂的研制奠定了物质基础 .
- 杜桂鑫侯利华陈万荣刘树玲张永国孙大铭王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒基因表达
- 丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶抗原性分析及特异性抗体制备被引量：1
- 2002年
- 目的 分析丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶的抗原性并制备特异性抗体。方法 构建表达质粒并且在大肠杆菌中可溶性表达单链型丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶 ;以纯化后的重组蛋白包被酶联板对 86份献血员和 12份健康人血清中的特异性抗体进行检测 ;将纯化蛋白偶联到Sepha rose 4B上制备亲和纯化柱 ,对丙肝病毒感染者血清中的特异性抗体进行亲和纯化 ;以纯化蛋白免疫小鼠 ,制备特异性单克隆抗体 ,对纯化后的人多抗和鼠单抗进行鉴定。结果 以纯化的重组单链丝氨酸蛋白酶为抗原检测 98份血清 ,结果阳性率为 73.9%,商品试剂盒漏检的 1份血清中也检测出特异性抗体。用重组蛋白从 2 0 0mlHCV感染者血清中亲和纯化到 4.5 7mg多克隆抗体 ,效价达 10 7,特异性很好。制备的 4株IgG类鼠单抗 ,无交叉反应 ,能够被人血清抗体竞争性抑制。结论 表达的HCV丝氨酸蛋白酶具有良好的抗原性 ,在HCV感染人群中该区域抗体的阳性率较高 ,制备了特异性很好的多克隆抗体和单克隆抗体。
- 杜桂鑫刘树玲侯利华陈万荣王海涛
- 关键词：抗体制备丙型肝炎病毒抗原性丝氨酸蛋白酶HCV丙型肝炎
- 金黄色葡萄球菌截短SasA蛋白在大肠杆菌中的表达及应用
- 本发明涉及在大肠杆菌中高效表达金黄色葡萄球菌截短的SasA(Serine-rich adhesion forplatelets)蛋白的方法。根据GenBank报导的金黄色葡萄球菌SasA基因全长序列(GenBank：BX...
- 陈薇易绍琼于长明徐俊杰侯利华付玲任军于婷
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒RNA聚合酶可溶性和抗原性的研究被引量：1
- 2001年
- 目的在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达ＨＣＶ ＲＮＡ聚合酶，研究其可溶性的条件，进一步研究它的抗原性，为研究其活性打下基础。方法构建表达载体 ｐＱＥ－５Ｂ－ＦＬ和 ｐＱＥ－５Ｂ－△Ｃ２１。在 Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｍ１５）菌株中表达。在不同诱导条件下分析其可溶性，在获得ｐＱＥ－５Ｂ－△Ｃ２１可溶性蛋白后，通过Ｎｉ－ＮＴＡ柱纯化。纯化后得到的目的蛋白进行ＥＬＩＳＡ和 ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果在 Ｅ．ｃｏｌｉ中表达了 ｐＱＥ－５Ｂ－ＦＬ和 ｐＱＥ－５Ｂ－△ Ｃ２１重组蛋白，二者在 ３７℃诱导条件下均以包涵体形式存在，ｐＱＥ－５Ｂ－△２１重组蛋白在１８℃诱导条件下５０％以可溶形式存在，通过ＥＬＩＳＡ和ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，表明该蛋白具有抗原性。结论在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达的ＨＣＶ ＲＮＡ聚合酶有良好的可溶性及抗原性。
- 侯利华杜桂鑫来大志王海涛
- 关键词：肝炎病毒丙型RNA聚合酶ELISA
