含锚蛋白重复和IBR结构域蛋白1(ankyrin repeat and IBR domain-containing protein 1,ANKIB1)属于RING-IBR-RING(RBR)蛋白家族,也是该家族中唯一含有泛素结合模体的成员,能促进某些蛋白的泛素化.几乎所有的RBR蛋白都具有泛素连接酶(E3)活性.ANKIB1也被推测为一种E3,但迄今尚未证实.RBR型E3能够与多种泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme,Ubc,统称E2)互作并发挥催化作用,其中最常见的是UbcH7,UbcH8和UbcH5B次之.为了筛选ANKIB1相关的E2,本研究在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达了UbcH5B、UbcH7和UbcH8蛋白,并采用GST沉降(GST pull-down)实验验证3种E2与ANKIB1的相互作用.实验结果表明,内源性及过表达的ANKIB1均能与UbcH5B、UbcH7或UbcH8相互作用,同时ANKIB1也是唯一能与这3种E2互作的RBR蛋白.本研究为ANKIB1可能是1种E3的假说提供了支持,并为后续研究ANKIB1的E3活性和催化机制提供了线索.
钙调神经磷酸酶(calcineurin,CN)是唯一依赖于Ca2+和钙调蛋白(calmodulin,Ca M)的丝氨酸/苏氨酸型蛋白磷酸酶,由1个催化亚基CNA和1个调节亚基CNB组成.CNA有3种亚型,最常见的是由CNA1基因编码的α亚型(CNAα).在克隆CNA1基因c DNA的过程中,发现了1种新的人CNA1转录本—CNAα4.与CNA1基因的其它转录本相比,CNAα4缺失第2外显子,其编码蛋白质由454个氨基酸组成,具有比其它3种CNAα亚型更短的磷酸酶催化结构域.CNAα4具有与CNAα1相似的Ca M亲和力,但是其激活活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)的活性明显强于CNAα1,提示CNAα4所缺失的氨基酸序列(Ala20-Thr86)并非CNA催化结构域所必需,相反,Ala20-Thr86缺失可能有助于其酶活性中心与NFAT的结合并发挥作用.
