刘海防
- 作品数：13 被引量：46H指数：5
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- 抗小鼠 Caspase—12小干扰 RNA 对肝细胞凋亡的抑制作用
- 2005年
- 目的 观察抗小鼠 Caspase-12小干扰 RNA(siRNA)对小鼠原代肝细胞凋亡的抑制作用。方 法 原位二步灌流法分离并培养 Balb/c 小鼠原代肝细胞，化学合成制备三种抗 Caspase-12不同位点(130， 214，521)的 siRNA，脂质体包裹转染小鼠原代肝细胞。毒胡萝卜素4μmol/L 诱导肝细胞凋亡。逆转录聚 合酶链反应、western blot 检测抑制效果；四甲基偶氮唑盐法检测对细胞凋亡的影响。结果 在浓度为 100 nmol/L 时，siRNA(130)对小鼠原代肝细胞 Caspase-12 mRNA 的抑制率为0，siRNA(214)为52．08%， siRNA(521)为30．73%(t=4．30，P＜0．05)；在浓度为200 nmol/L 时，三种 siRNA 的抑制率分别为88．07%、 86．22%，89．41%。200 nmol/L 的 siRNA(214)对凋亡细胞 procaspase-12的抑制率为51．43%(t=4．30， P＜0．01)；MTT 比色实验发现，凋亡细胞活力增高48．76%(t=2．23，P＜0．01)。结论 抗 Caspase-12 siRNA 对小鼠原代肝细胞凋亡有一定的抑制作用。
- 刘海防谢青姜山李光明周霞秋史毅俞红金由辛
- 关键词：肝细胞小鼠CASPASE-12小干扰RNA
- 内质网应激在肝细胞凋亡中的意义被引量：1
- 2010年
- 目的：探讨内质网应激在肝细胞凋亡中的意义。方法：原位二步灌流法分离并培养BALBC小鼠原代肝细胞,化学合成法制备抗半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12小分子干扰RNA（caspase-12 siRNA）,脂质体包裹转染小鼠原代肝细胞。毒胡萝卜内酯4μmol/L诱导肝细胞凋亡。RT-PCR、Western blot检测抑制效果;MTT比色试验检测细胞活力,反映细胞凋亡。结果：siRNA对小鼠原代肝细胞caspase-12 mRNA在浓度200nmol/L时抑制率为86.22%;对凋亡细胞procaspase-12抑制率为50.04%,与单纯诱导凋亡细胞差异有统计学意义（P〈0.01）;MTT比色试验检测发现,与单纯诱导凋亡细胞相比,转染siRNA后细胞活力增高51.65%,两者差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：抑制内质网应激介导细胞凋亡的特异酶caspase-12,能在一定程度上阻抑小鼠原代肝细胞凋亡的发生,内质网应激在肝细胞凋亡中具有重要意义。
- 刘海防谢青
- 关键词：细胞凋亡肝细胞内质网应激小分子干扰RNA近交BALBC
- siRNA阻抑结缔组织生长因子防治大鼠肝纤维化
- 目的探讨是否经门静脉注射抗结缔组织生长因子(CTGF)小分子干扰RNA(siRNA)能在体内抑制肝CTGF基因表达及防治大鼠肝纤维化。方法 siRNA抗肝纤维化活性在CCl4诱导的肝纤维化大鼠中
- 李光明谢青史毅李定国张明均姜山周慧娟刘海防金由辛
- 文献传递
- Caspase-12在D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠急性肝功能衰竭中的表达及作用被引量：15
- 2005年
- 目的探讨Caspase-12在D-氨基半乳糖(D-Gal)/脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肝功能衰竭发生发展过程中表达水平的变化及Caspase-12介导的内质网应激肝细胞凋亡途径在急性肝功能衰竭中的作用。方法以D-Gal/LPS联合腹腔注射诱导小鼠急性肝功能衰竭建立实验模型,在不同时间点动态检测血清氨基转移酶水平和观察肝组织病理变化,评估肝细胞凋亡和肝坏死演变过程;应用琼脂糖凝胶电泳检测肝细胞DNA凋亡条带;用半定量逆转录聚合酶链反应检测肝组织中Caspase-12 mRNA表达水平;west- ern blot检测Caspase-12、Bip/GRP78蛋白表达。结果药物诱导5h时肝组织中典型凋亡细胞增多,血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)开始升高,Caspase-12 mRNA表达明显增加, Caspase-12蛋白量表达反而减少;7h镜下出现大量肝细胞凋亡和坏死,ALT、AST水平达高峰,分别为(2564±1384)U/L和(1198±497)U/L,正常对照组为(59±17)U/L和(135±12)U/L,Caspase- 12 mRNA表达仍增加,Caspase-12蛋白表达量继续降低;9h 肝细胞坏死明显,伴散在凋亡细胞,ALT、AST水平明显下降,Caspase-12 mRNA表达较7 h下降。Bip/GRP78蛋自表达从5 h开始,至7 h逐渐增加。结论D-Gal/LPS诱导小鼠急性肝功能衰竭早期Caspase-12 mRNA表达水平逐渐升高,后期(7-9 h)降低,与肝细胞凋亡发生的时相一致;Caspase-12蛋白酶因内质网应激而被大量活化,提示Caspase-12介导的内质网应激肝细胞凋亡参与炎症性急性肝功能衰竭的发生发展,是急性肝功能衰竭中肝细胞损伤的重要机制之一,提示早期干预Caspase-12表达及活化对急性肝功能衰竭可能具有保护作用。
- 周惠娟谢青姜山李光明周霞秋刘海防俞红郭清
- 关键词：CASPASE-12急性肝功能衰竭D-氨基半乳糖丙氨酸氨基转移酶(ALT)脂多糖诱导小鼠
- 抗小鼠caspase-12小干扰RNA对肝细胞凋亡的阻抑作用
- 目的观察针对小鼠半胱天冬氨酸酶-12(caspase-12)不同位点小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对靶基因的抑制,以及对小鼠原代肝细胞凋亡的影响。方法原位二步灌流法分离并培养Bal...
- 刘海防谢青姜山李光明周霞秋史毅俞红金由辛
- 文献传递
- 抗结缔组织生长因子小干扰RNA对鼠原代肝易状细胞增殖的影响被引量：5
- 2006年
- 细胞外基质（ECM）积聚与活化肝星状细胞（HSC）数量密切相关，增殖是活化HSC的重要生物学特性之一，也是调控活化HSC数量的一种重要方式，结缔组织生长因子（CTGF）主要由活化HSC产生，是HSC增殖的一个重要刺激因子。
- 李光明谢青李定国姜山刘海防徐芹芳金由辛
- 关键词：肝纤维化小分子干扰RNA结缔组织生长因子肝星状细胞
- 小分子干扰RNA沉默结缔组织生长因子对鼠肝星状细胞培养激活的影响被引量：5
- 2005年
- 目的研究化学合成小分子干扰RNA(siRNA)对大鼠原代肝星状细胞(HSC)结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的阻抑作用及对HSC培养激活的影响。方法以胶原酶原位灌注消化加密度梯度离心法分离大鼠原代HSC,将siRNA以脂质体包裹,转染培养72h的原代HSC,设空白对照,收集孵育96h细胞,以Westernblot和免疫细胞化学染色法检测原代HSCCTGF及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达。结果转染siRNA的原代HSCCTGF及α-SMA基因表达显著下调,与对照相比,CTGF蛋白下调(92±5)%(P<0.01);α-SMA蛋白表达分别下调(62±9)%(P<0.01,Westemblot方法)和(58±6)%(P<0.01,免疫细胞化学染色法)。结论siRNA能显著下调大鼠原代HSCCTGF基因表达,明显阻抑原代HSC培养激活,提示针对CTGF基因化学合成的siRNA具有防治肝纤维化的潜力。
- 李光明谢青李定国刘海防徐芹芳金由辛
- 关键词：小分子干扰RNA结缔组织生长因子肝纤维化肝星状细胞
- 慢性乙型肝炎抗病毒新靶位和方法研究进展被引量：1
- 2004年
- 刘海防谢青
- 关键词：慢性乙型肝炎
- Caspase-12活化在小鼠原代肝细胞凋亡中的作用被引量：10
- 2006年
- 目的探讨caspase-12表达变化与内质网应激介导小鼠原代肝细胞凋亡的关系。方法原位消化灌流法分离小鼠原代肝细胞,应用毒胡萝卜素对小鼠原代肝细胞进行凋亡诱导,通过DNA梯带,Hoechst染色和流式细胞仪等对肝细胞凋亡进行定性和定量检测,选出合适的诱导浓度和诱导时间。用Western印迹法检测凋亡过程中caspase-12蛋白酶的表达变化。结果毒胡萝卜素4μmol、诱导30h可引起50%肝细胞发生凋亡,并出现典型的凋亡形态改变。随诱导时间延长procaspase-12蛋白表达逐渐减少。结论毒胡萝卜素4μmol作用30h是建立小鼠原代肝细胞凋亡模型的合适条件,随凋亡细胞数量增加,procaspase-12相应减少,caspase-12活化是毒胡萝卜素引起内质网应激介导肝细胞凋亡的主要机制。
- 姜山谢青张韡周惠娟刘海防俞红
- 关键词：内质网应激凋亡肝细胞CASPASE-12
- 生长抑素联合乳酸菌治疗急性胰腺炎的疗效及对肠道黏膜屏障功能影响探讨被引量：8
- 2021年
- 目的:探讨生长抑素联合乳酸菌治疗急性胰腺炎的疗效及对肠道黏膜屏障功能的影响。方法:选取我院收治的急性胰腺炎患者116例,随机分为研究组(58例,常规治疗+生长抑素治疗)与对照组(58例,常规治疗+生长抑素+乳酸菌治疗)。比较两组患者治疗前后临床症状改善时间、疗效、血清炎性因子水平、肠道黏膜屏障功能指标水平。结果:与对照组比较,研究组腹痛腹胀缓解时间、血清淀粉酶恢复正常时间、排气排便恢复正常时间、住院时间均更短。研究组治疗总有效率为93.10%(54/58),高于对照组的治疗总有效率77.59%(45/58)。与治疗前比较,治疗后两组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均降低,且研究组低于对照组。与治疗前比较,治疗后两组血清D-乳酸、DAO、ET水平均降低,且研究组低于对照组。结论:生长抑素联合乳酸菌治疗急性胰腺炎疗效显著,可有效改善患者临床症状,降低炎症因子水平,改善肠道黏膜屏障功能。
- 刘大铮张仪刘海防
- 关键词：急性胰腺炎生长抑素乳酸菌白细胞介素D-乳酸内毒素
