武晓丽
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院植物保护研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 简易快速高效制备T载体被引量：2
- 2008年
- [目的]制备成本廉价、使用方便、效率高的T载体。[方法]用PstI充分酶切纯化的质粒pUC19,再用T4DNA聚合酶消化15min,电泳得到T载体,进行质量检测,并与商品化的T载体pMD18-T进行对比。[结果]自制的T载体自连检测只发现2个菌落与PCR扩增片段连接。经转化大肠杆菌JM109,pMD18-T的平均白斑率为99.4%,转化菌落为3.55万个/μg,自制T载体的平均白斑率为99.7%,转化菌落为3.38万个/μg,完全可以与商品出售的T载体媲美。[结论]该研究自制的T载体自连率低,假阳性率低,克隆效率高,可替代商品化的T载体用于TA连接,而且制备时间短,成本低廉,技术简单,值得推广。
- 徐锋武晓丽
- 关键词：T载体PCR克隆载体
- 利用磁珠构建稻瘟菌cDNA文库被引量：2
- 2008年
- 本文以稻瘟菌菌丝体为材料提取RNA,【目的】改进张学敏等人的方法,通过磁珠构建稻瘟菌cDNA文库,并用于下一步研究稻瘟菌与水稻之间的互作关系。【方法】通过共价键连接的寡聚oligo(dT)磁珠纯化mRNA,并以磁珠上的oligo(dT)为引物引导第一链cDNA的合成,再利用末端转移酶加尾法合成第二链cDNA。构建过程中避免使用限制酶和连接接头。【结果】用此方法构建的文库容量为8.9×107cfu,滴度为8.9×106cfu/mL,随机挑取的25个克隆插入片断平均大小达到1380bp。【结论】实验结果表明用改进的方法可构建高质量的cDNA文库,并且方便快捷,所用材料少,构建时间短,利于大规模的功能基因分析。
- 徐锋武晓丽邱德文
- 关键词：稻瘟菌CDNA文库磁珠
