田丽萍
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组活性羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用
- 用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中可以包涵体方式获得高表达,SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35﹪,表达产物融合了表达质...
- 李素霞张育坚田丽萍刘海峰张晓彦夏文超龚毅袁勤生
- 关键词：羧肽酶原B羧肽酶B分离纯化基因工程
- 文献传递
- 重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用被引量：7
- 2004年
- 用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35%,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28.5mg/L),比活为13.5u/mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶+羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。
- 李素霞田丽萍张晓彦夏文超龚毅袁勤生
- 关键词：羧肽酶原B羧肽酶B分离纯化
- 肿瘤细胞靶向性白细胞介素4(IL-4)融合蛋白的研究(英文)被引量：1
- 2004年
- 白细胞介素 4受体 (IL 4R)特异地存在于多种肿瘤细胞表面 ,这为某些肿瘤的治疗提供了一个靶向标记。在以前的研究中 ,人白细胞介素 4 (hIL 4 )与白喉毒素 (DT)的融合蛋白 (DT4H)被构建 ,且它对某些肿瘤细胞系的高毒性得到了证明。但是 ,由于毒素部分的强免疫原性 ,它可以诱导人体的免疫反应。该研究中我们构建了白细胞介素 4与绿脓杆菌外毒素 (PE) 2 5 3～ 6 0 8aa的融合蛋白 ,并在其N端添加了 6×His标记方便纯化 ,在其C端添加了KDEL提高毒性。为了改善与IL 4R的亲和力我们将IL 4进行了环式重组 ,构建的融合毒素 ,H4 0 4K ,经DEAE$CSepharoseFastFlow及Ni NTA纯化后 ,纯度达 90 %。纯化后的H4 0 4K与DT4H相似 ,对U2 5 1高度敏感 ,对MCF 7及HepG2中度敏感 ,且我们首次证实该毒性不会被兔抗白喉毒素的多克隆抗体所抑制。这些研究表明 ,H4 0
- 张育坚胡小波李素霞田丽萍杨胜利龚毅
- 关键词：绿脓杆菌外毒素肿瘤治疗白细胞介素4白细胞介素4受体
