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陈霆: 作品数：34 被引量：54H指数：4; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室更多>>; 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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RT-SHIV rt基因单拷贝PCR扩增方法的建立及初步应用: 目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温...; 鞠斌王卫丛喆姚南陈霆杜文达苏爱华高锡强魏强

RT-SHIV rt基因单拷贝PCR扩增方法的建立及初步应用被引量：2: 2012年; 目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温度和PCR反应最佳循环数等条件,建立rt基因PCR扩增方法;在此基础上将模板进行有限稀释,摸索rt基因单拷贝PCR扩增条件;使用该方法扩增感染猴体内RT-SHIV病毒rt基因,BioEdit软件进行基因序列分析。结果筛选得到一组巢式PCR引物,成功建立了RT-SHIV rt基因PCR扩增方法;当模板浓度为100 copies/μL时,扩增产物为单拷贝序列;测序结果显示RT-SHIV感染猴d266和d294血浆样本分别存在1处和6处氨基酸突变。结论本研究建立的全长rt基因单拷贝PCR扩增方法特异性好、灵敏度高、重复性强,可以应用于各类RT-SHIV病毒的全长rt基因分析。; 鞠斌王卫丛喆姚南陈霆杜文达苏爱华高锡强魏强

HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的比较被引量：3: 2011年; 目的由于检测SIV p27抗原试剂盒来源困难,有时不稳定,鉴于HIV-1 p24与SIVp27有较强的交叉抗原,本研究比较HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原得出的结果是否存在一定的相关性。方法 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒定性和定量检测样品中SIV p27抗原,并对检测结果进行回归和相关分析。结果 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的灵敏度分别是150 pg/mL和62.5 pg/mL。两种试剂盒检测病毒液和血浆中SIV p27抗原的定性结果一致。定量结果的统计分析得出病毒液的直线回归决定系数R2=0.857,直线相关系数r=0.926,P<0.01,直线正相关程度较高;血浆的直线回归决定系数R2=0.512,直线相关系数r=0.716,P<0.05,直线正相关程度较低。结论 HIV-1 p24 ELISA试剂盒能够替代SIVp27 ELISA试剂盒定性检测病毒液和血浆中SIV p27抗原,但只能定量检测病毒液中SIV p27抗原。; 金光王卫丛喆蒋虹陈霆魏强

SHIV-XJ02170感染恒河猴后期的传代特点和env基因变异: 2011年; 目的研究SHIV-XJ02170在中国恒河猴感染后期传代过程中病毒和宿主的变化特点,并分析env基因的序列变异。方法将感染中国恒河猴G0401V后期(5年)的SHIV-XJ02170病毒垂直传代2只猴(G0401V→G0402V→0403V),同时,剔除G0401V猴CD8+T细胞使潜伏的病毒大量复制后传代1只猴(G0401V→G0404V),应用流式细胞术、病毒载量测定、序列分析等方法研究该病毒在猴体内长期适应后的病毒和免疫学指标及序列变异特点。结果 G0401V在感染后期仍能稳定传代,且表现出毒力增强的特点。其传代猴G0402V在传代后41 d死亡,外周血CD4+T淋巴细胞衰竭,仅为43个/mL,符合艾滋病感染猴快速进展型的特征。剔除体内CD8+T细胞之后的传代猴G0404V的表现类似G0401V,即长期低水平的病毒血症水平。env基因序列分析发现SHIV-XJ02170在G0401V体内长期适应后发生了可遗传的序列变异,并引起糖基化位点的改变。结论 SHIV-XJ02170在猴体长期适应后的传代过程中表现出向强毒株过渡的特征,为进行SHIV-XJ02170感染性克隆的构建奠定了良好的实验基础。; 陶真丛喆刘强李悦刘浩王卫金光陈霆姚南蒋虹杨贵波李喆魏强; 关键词：传代 ENV

实验用猴脑脊液采集技术方法的创新被引量：3: 2011年; 脑脊液在艾滋病的研究中有着重要的意义。近年来脑脊液的检测逐步成为SIV/SHIV感染猴模型研究和应用中的重要指标。传统的采集方法不易学习和掌握。针对上述情况我们优化了脑脊液的采集方法,优化后的方法明显缩短穿刺时间,显著提高成功率。; 陈霆丛喆魏强; 关键词：脑脊液

SHIVKU-1感染猴感染晚期血浆病毒分离结果分析: 2014年; 目的分离SHIVKU-1感染猴G1302V血浆中的病毒,以期得到一株具有较强感染力的X4嗜性病毒中国恒河猴适应株。方法用G1302V猴安乐死当天血浆与CEMx174细胞共培养,8周后收集培养上清及细胞,分别做p27蛋白水平及gag、gp120核酸序列测定。同时测定感染猴安乐死时血液样本中p27蛋白水平,并进行核酸序列分析及病毒毒力滴定。结果 G1302V猴血浆病毒分离阴性。血浆p27蛋白水平阴性,TZM-bl细胞测定病毒毒力阴性。血浆病毒及血细胞前病毒DNA核酸序列检测阳性,病毒嗜性未发生改变。结论 SHIVKU-1感染猴G1302V安乐死当天血浆中的病毒嗜性未发生变化,病毒的完整性较差及病毒的毒力较低是病毒分离阴性的主要原因。; 丛喆徐珮董志会陈霆蒋虹魏强; 关键词：CXCR4 病毒分离

健康中国恒河猴各淋巴组织中T淋巴细胞表型及分布被引量：4: 2012年; 试验旨在明确T淋巴细胞在中国恒河猴各组织中的表型与分布,为疾病模型研究提供基础数据。取外周血、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结及肠道组织,从中分离出淋巴细胞。使用流式细胞术检测分析各种表型的淋巴细胞在组织间的分布。结果表明,淋巴结中CD4+/CD8+T细胞比值高于外周血,肠道固有层中最低,三者差异显著。记忆性T细胞在外周血和肠道固有层T细胞中比重较大,而淋巴结中主要为幼稚T细胞。CD4+T细胞中中心记忆T细胞Tcm为主要亚群,而CD8+T细胞主要为效应记忆细胞Tem。外周血与肠道固有层中增殖T细胞比例相当,而淋巴结中T细胞增殖水平相对较低。各组织中CXCR4受体表达量普遍高于CCR5受体,其中肠道固有层CCR5受体表达水平最高。值得注意的是,有一小群表型CD3+CD4+CD8low的细胞仅在肠道固有层中存在,经分析其功能活性应高于肠道CD4单阳性T细胞。因此,测定了健康中国恒河猴各表型T淋巴细胞在多种淋巴组织中的基础数值,为相关模型研究奠定基础。; 熊竞刘克剑吴芳新丛喆王卫陈霆魏强; 关键词：中国恒河猴记忆T细胞 KI67 CCR5

猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)恒河猴适应株耐9-(2-磷酸甲氧丙基)腺嘌呤(PMPA)突变位点筛查: 2013年; 目的初步明确猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)耐9-(2-磷酸甲氧丙基)腺嘌呤(PMPA)突变基因位点,指导SIV/恒河猴模型在药物评价中的应用。方法 SIVmac239恒河猴适应株感染恒河猴,之后进行PMPA治疗,测定不同时间点血浆病毒载量和外周血CD4+T细胞数;使用CEMx174细胞进行药物敏感实验。单拷贝PCR测定病毒rt基因变异情况。结果 PMPA治疗不能有效降低感染猴血浆病毒载量,且对血CD4+T细胞数没有显著影响;细胞水平药物敏感实验证实该病毒株对PMPA不敏感。序列比对发现S205L和M502I可能影响到病毒对PMPA的药物敏感性。结论本研究为SIV/恒河猴模型的合理使用及HIV-1的临床治疗提供了信息。; 王卫鞠斌丛喆董志会陈霆杜文达蒋虹魏强; 关键词：SIVMAC239

抗人B淋巴细胞单克隆抗体清除中国恒河猴体内B淋巴细胞效果观察: 2012年; 目的用抗人B淋巴细胞单克隆抗体(利妥昔单抗注射液,Rituximab)通过静脉滴注的方法敲除中国恒河猴体内B淋巴细胞,并观察其敲除效果,为建立B淋巴细胞缺失的恒河猴动物模型提供基础的实验数据。方法选取健康的中国恒河猴两只,静脉滴注抗人B淋巴细胞单克隆抗体,定期采集外周血、腹股沟淋巴结和十二指肠黏膜组织,制备淋巴细胞悬液,应用流式细胞术的方法系统性测定B淋巴细胞及T淋巴细胞亚群的变化。结果静脉滴注利妥昔单抗注射液后24 h,中国恒河猴外周血中B淋巴细胞的缺失即能达到100%,持续约14 d;腹股沟淋巴结中B淋巴细胞在静注后7 d缺失100%;十二指肠黏膜组织中B淋巴细胞在静脉滴注后7 d缺失达到90%,维持28 d。并且在成功敲除B淋巴细胞的情况下,CD4+T及CD8+T淋巴细胞无明显波动,维持在一个稳定的水平。结论利妥昔单抗注射液能有效去除中国恒河猴体内B淋巴细胞,为建立B淋巴细胞缺失动物模型奠定基础。; 苏爱华丛喆王卫陈霆魏强; 关键词：中国恒河猴 B淋巴细胞利妥昔单抗

SHIV1157ipd3N4细胞适应株的制备及其生物特性: 2011年; 目的体外制备SHIV1157ipd3N4病毒中国恒河猴细胞适应株,在细胞水平和中国恒河猴体内评价其生物学特性。方法用SHIV1157ipd3N4病毒阴道感染中国恒河猴,在血浆病毒载量高峰期采血分离外周血单核淋巴细胞(PBMCs),与正常中国恒河猴PBMCs共培养。定期测定培养液中的P24抗原水平。当病毒复制达高峰期时收集培养上清,分装并冻存。测定病毒RNA载量、P24抗原浓度和TCID50。静脉感染中国恒河猴,研究该批次SHIV1157ipd3N4在体内的病毒学、免疫学指标变化及变异情况,分析其基本的生物学特性。结果本研究共制备了243 mL SHIV1157ipd3N4病毒原液,gp120序列分析表明病毒未发生变异,CCR5的嗜性也未发生改变。病毒载量为1.586×108 copies/mL,P24抗原水平为1.16×103 pg/mL,TZM-bl细胞测定病毒的TCID50为3.16×103/mL。1 mL SHIV1157ipd3N4静脉成功感染中国恒河猴G1004V,高峰期病毒载量达到1.0×106 copies/mL以上。结论此次制备的SHIV1157ipd3N4细胞适应株生物学特性稳定,适合作为毒种库构建SHIV1157ipd3N4/中国恒河猴模型。; 丛喆姚南刘浩金光陶真陈霆魏强; 关键词：中国恒河猴

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