韩宏晓
- 作品数：32 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 日本血吸虫感染不同适宜性宿主的比较研究
- 林矫矫洪炀彭金彪蒋韦斌傅志强石耀军刘金明冯新港韩宏晓
- 日本血吸虫Sj Cyclophilin B基因的克隆、表达及免疫保护效果分析
- 2010年
- 本研究克隆和表达了日本血吸虫Cyclophilin B(Sj CyPB)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。本研究以日本血吸虫童虫cDNA为模板,RT-PCR扩增其基因全长cDNA,提交序列到NCBI,登录号为GQ403665。荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,构建重组表达质粒,表达纯化重组蛋白。利用Western blotting检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。结果表明,RT-PCR获得了Sj CyPB编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为672bp。经分析确定其为CyPs家族中的CyPB基因,命名为Sj CyPB。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在18d童虫期表达量最高,32d次之。构建了重组表达质粒pGEX-6P-1-SjCyPB,并在大肠杆菌中成功表达,表达产物分子量为49.5kDa。Western blotting试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得31.5%的减虫率和41.01%的肝脏减卵率。本研究获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPB基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPB原核重组表达质粒,并在大肠杆菌中成功表达,证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。
- 彭金彪韩宏晓洪炀王艳郭凡吉石耀军傅志强刘金明程国锋林矫矫
- 关键词：日本血吸虫CYCLOPHILIN免疫保护效果
- 日本血吸虫可溶性虫卵和童虫抗原刺激RAW264.7巨噬细胞的初步分析
- 2017年
- 本文采用不同浓度的日本血吸虫虫卵抗原（SEA）、童虫抗原（SSA）刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264．7，结果显示SEA抗原能明显刺激巨噬细胞增殖分化（SI〉2），且多数巨噬细胞形态发生了改变并出现细胞死亡。实时定量荧光PCR结果显示，在SEA、SSA抗原刺激下，巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL，10和CCL2的mRNA表达量都明显高于对照组。结果提示血吸虫抗原对巨噬细胞的刺激作用可能在宿主抗血吸虫感染的先天免疫应答和虫卵肉芽肿形成免疫调节中发挥了一定的作用。
- 沈元曦张祖航韩宏晓傅志强洪炀林矫矫
- 关键词：日本血吸虫巨噬细胞虫卵抗原
- 日本血吸虫magonashi基因的克隆、表达及功能初步分析
- 目的克隆和表达magonashj基因(Sj magonashi)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体及不同性别的表达情况,动物实验评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。方法从本实验室构建的童...
- 彭金彪韩宏晓洪炀王欣之石耀军傅志强刘金明程国锋林矫矫
- 文献传递
- 日本血吸虫促凋亡基因SjBAD的初步研究被引量：1
- 2015年
- 目的了解日本血吸虫促凋亡基因Sj BAD的生物学、免疫学和转录表达特征,评估Sj BAD重组蛋白作为日本血吸虫病疫苗候选分子的潜力。方法根据Sj BAD的参考序列设计引物,应用PCR技术扩增Sj BAD基因,构建重组表达质粒p ET-28a(+)-Sj BAD。采用实时定量PCR检测Sj BAD基因在日本血吸虫不同发育期及42 d雌、雄虫体内的转录水平;应用Western blotting和间接ELISA法分析Sj BAD重组蛋白的抗原性和免疫原性。用重组抗原Sj BAD免疫BALB/c小鼠,通过计算减虫率及肝脏减卵率,评估重组抗原作为血吸虫病候选疫苗分子的潜力。结果成功克隆了日本血吸虫Sj BAD基因,构建了重组表达质粒p ET-28a(+)-Sj BAD,并在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白分子量约为22 k Da。Western blotting表明Sj BAD具有较好的抗原性和免疫原性,间接ELISA法检测表明重组蛋白免疫小鼠产生了高水平的特异性抗体Ig G。实时定量PCR检测发现Sj BAD基因在日本血吸虫的各个发育阶段均有转录,以14 d表达量最高,且在雄虫体内的表达量高于雌虫。两次动物免疫试验表明,重组蛋白Sj BAD在BALB/c小鼠体内诱导了30.82%和27.87%的减虫率,及42.52%和45.84%的肝脏虫卵减少率,均显著高于PBS对照组(P均<0.05)。结论成功克隆、表达了日本血吸虫促凋亡相关基因Sj BAD,该基因在日本血吸虫不同发育期虫体内均有表达。纯化的重组Sj BAD蛋白在小鼠体内能诱导产生部分抗血吸虫感染的免疫保护效果。
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- 关键词：日本血吸虫细胞凋亡BAD
- 东方田鼠感染日本血吸虫后miRNA表达谱分析
- 东方田鼠是至今报道唯一一种对日本血吸虫具有天然抗性的哺乳动物宿主，日本血吸虫在东方田鼠体内不能发育成熟.miRNAs是研究发现的重要表观遗传调节分子之一，东方田鼠对日本血吸虫的天然抗性可能与miRNA介导的基因表达及调控...
- 韩宏晓陶建平林矫矫彭金彪洪炀张曼韩艳辉刘丹丹傅志强石耀军许金俊
- Wistar大鼠感染日本血吸虫前和10天后差异表达miRNA的比较分析
- 大鼠是日本血吸虫的非适宜宿主,与小鼠相比,大鼠的机体环境更不适宜日本血吸虫的生长和发育.miRNA作为内源性非编码RNA,在真核生物多个生物学过程中发挥重要的生物学功能.为研究miRNA在大鼠感染血吸虫中可能发挥的生物学...
- 韩宏晓林矫矫彭金彪洪炀张旻韩艳辉傅志强石耀军许金俊陶建平
- 日本血吸虫mago nashi基因的克隆表达及其功能研究
- 2011年
- 以日本血吸虫18 d虫体的cDNA为模板,PCR获得Sjmago nashi编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为441 bp,将该序列提交至NCBI,登录号为GQ403668;应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况。结果表明:该基因在不同发育阶段均有表达,在13日龄童虫表达量相对最高,32日龄次之;在不同性别成虫虫体中,该基因在雄虫的表达量远高于雌虫,说明该基因为日本血吸虫性别发育差异基因。以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,在大肠杆菌中表达,表达产物分子质量为19.5 ku,并以Ni-NTA HisBind Resin纯化重组蛋白。Western blotting试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得25.94%的减虫率和30.01%的肝脏减卵率。
- 彭金彪韩宏晓洪炀王欣之石耀军傅志强刘金明林矫矫
- 关键词：日本血吸虫克隆表达免疫保护效果
- 日本血吸虫蛋白酶体α2亚基基因的克隆、表达及功能分析被引量：2
- 2010年
- 26S蛋白酶体是一种能够降解大多数内源性蛋白的多亚基复合物,它的蛋白降解作用能够影响细胞周期、转录控制和其他一些重要的细胞进程。本实验利用PCR技术从日本血吸虫18d童虫中首次扩增到蛋白酶体α2亚基基因(GenBank Accession No.AY813725),序列分析表明该基因的开放阅读框(ORF)含708bp,编码235个氨基酸,理论分子量25.84kDa。同源性分析结果显示,该基因为日本血吸虫蛋白酶体α2亚基,命名为SjPSMA2。实时定量PCR分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d和42d虫体中都有表达,7d和23d虫体表达量低于其他几个时期。构建了该基因的原核表达质粒pET28a(+)-SjPSMA2,在大肠杆菌系统中成功获得了表达,重组蛋白以包涵体形式存在,Western blotting显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别,并且能检测到天然状态下该蛋白的存在。应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,诱导产生了较高的特异性抗体水平及12.33%的减虫率和35.23%的肝脏减卵率。SjPSMA2基因及其表达产物的获得,为探索蛋白酶体在血吸虫生长发育中的作用提供了重要基础。
- 洪炀韩宏晓彭金彪李晔石耀军傅志强刘金明李祥瑞林矫矫
- 关键词：日本血吸虫克隆免疫保护
- 日本血吸虫Sj PRMT1基因的克隆、表达及表达产物的免疫保护效果分析
- 目的：克隆和表达日本血吸虫精氨酸甲基转移酶1（SjPRMT1）编码基因cDNA，分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况，评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。 方法：从实验室构建的7 d 童虫消减c...
- 韩宏晓林矫矫彭金彪洪炀王欣之石耀军傅志强刘金明程国锋李祥瑞
- 关键词：日本血吸虫免疫保护基因克隆
