马昱澍
- 作品数：33 被引量：25H指数：3
- 供职机构：华东理工大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 大肠杆菌热敏毒素B亚单位的真核表达方法
- 本发明涉及一种大肠杆菌热敏毒素B亚单位(E.coli heat-labile enterotoxin B subunit，LT-B)的真核表达方法，其主要步骤是：首先将LT-B的核酸序列(如SEQ ID NO：1所示)通...
- 魏东芝马兴元郑文云王天文罗晨马昱澍
- 文献传递
- 新型脂肪酶LipB52催化生物柴油被引量：12
- 2008年
- 一种来源于荧光假单胞菌的新型脂肪酶基因lipB52在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,并且利用Ni-NTA亲和柱对脂肪酶LipB52进行纯化。采用固定化脂肪酶LipB52催化大豆油与甲醇的转酯反应生产生物柴油。实验考察了温度、底物摩尔比、酶用量、有机溶剂、酶的种类以及油的类型对于反应的影响,结果表明:转酯反应的最佳反应条件为:m(酶)∶m(油)=20∶80,n(油)∶n(甲醇)=1∶4、正庚烷作为溶剂、反应温度为30℃,在此条件下脂肪酶LipB52表现出很高的催化活性,反应40 h后甲酯的产率高达92%。
- 王刚罗宇江正兵魏东芝马昱澍
- 关键词：生物柴油脂肪酶荧光假单胞菌转酯反应
- Serratia marcescens H30脂肪酶的重组可溶表达、固定化及其酶学性质
- 2014年
- 为了提高Serratia marcescens H30脂肪酶的可溶表达水平,分别将目的基因与p GEX-4T-1、p ET28a和p ET32a构建重组表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),通过优化诱导过程,发现可溶性酶的最高活性可达25 000 U/L。再经Ni2+亲和柱纯化、LH-EP固定化后,固定化酶的比酶活为214 U/g(以1 g湿质量计),酶活回收率为51%。固定化后重组脂肪酶的最适温度由30℃提高到35℃,最适p H从7.0偏移至8.0左右,并且稳定性也有所增加。该固定化重组脂肪酶同样能够拆分消旋体反式-4-甲氧苯基缩水甘油酸甲酯,光学选择性没有改变。反应14 h,转化率为48.5%,底物的e.e.值为99.2%,表明该固定化脂肪酶能有效拆分消旋体反式-4-甲氧苯基缩水甘油酸甲酯,为工业生物催化制备地尔硫卓提供了可能。
- 徐晶晶苏二正吴向萍马昱澍魏东芝
- 关键词：黏质沙雷氏菌脂肪酶可溶表达固定化手性拆分
- 星海链霉菌卤化酶重组蛋白在大肠杆菌中可溶表达
- 2014年
- 大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)是表达异源蛋白的良好宿主,但常遇到蛋白表达产物不可溶的困难.在对来自星海链霉菌的卤化酶基因sinH进行大肠杆菌异源表达时,为克服蛋白表达产物可溶性低的问题,探讨了不同载体对蛋白可溶表达的影响.利用pET28a进行SinH表达时不能得到可溶的目标蛋白;使用含有泛素标签及内含肽的载体pHUIE实现了卤化酶蛋白SinH的可溶表达,但纯化后纯度不高;利用带有链霉菌分子伴侣蛋白基因的载体pET28a-SinH与pETcoco-pL1SL2在E.coli BL21(DE3)中共表达,在30℃,0.1mmol/L IPTG诱导条件下表达4h,成功获得大量可溶蛋白,使用亲和层析(Ni-NTA)纯化,获得了较纯的目标蛋白SinH,上述研究结果为在大肠杆菌中进行其他链霉菌蛋白的可溶表达提供了参考.
- 王玉梅赵心清马昱澍魏东芝
- 关键词：可溶表达
- 脂肪酶基因以及工程菌和脂肪酶菌株
- 本发明提供了一种脂肪酶基因，其编码的脂肪酶，表达该酶的工程菌及工程菌的应用。本发明提供的脂肪酶基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明提供的基因工程菌可用于低温全细胞催化生产生物柴油，在10℃-25℃催化...
- 魏东芝高蓓马昱澍苏二正
- 文献传递
- 重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白制备及其促癌细胞凋亡活性研究被引量：3
- 2006年
- 从人乳腺癌细胞系B-Cap-37中克隆出Survivin的cDNA,并对其中编码34位Thr的密码子定点突变为Ala的密码子后,经一系列基因操作方法将天然HIV-TAT转导肽的突变体基因HIV-TATm引入Survivin(T34A)基因的5′端,正确构建了表达载体pRSET-B-HIV-TATm-Survivin(T34A),经转化E.coliBL21(DE3)后诱导表达,目的蛋白质以包涵体形式表达,占菌体总蛋白的45%。经3.7L发酵罐分批发酵可收获650mg/L的包涵体,经阳离子交换、凝胶层析分离和柱上复性与透析,得到纯度达96%以上的可溶性目的蛋白HIV-TATm-Survivin(T34A)。目的蛋白对人乳腺癌细胞B-Cap-37、人胰腺癌细胞SW1990和人肝癌细胞SSMC-7721作用4h后有在细胞形态上呈现出显著的凋亡特征,而对人宫颈癌细胞系Hela不敏感,对正常的人内皮细胞系EVC-304未见明显影响。作用24h时MTT法检测显示,120μg/mL目的蛋白对SW1990、B-Cap-37、SSMC-7721和Hela细胞的抑制率分别达到89%、63%、59.5%和39%,且具有剂量依赖性。对最为敏感的SW1990和B-Cap-37以每孔60μg/mL终浓度的目的蛋白作用48h的流式细胞技术检测发现,凋亡率分别为25.6%和19.3%,与对照相比,实验组细胞出现明显的凋亡峰,细胞周期的分布发生明显的变化,65%以上的癌细胞被阻滞于G1期。体外实验结果显示重组目的蛋白具有较强的抑制癌细胞增殖和促进凋亡作用,预示着良好的抗癌前景。
- 郑文云马兴元魏东芝王锦之刘清海马昱澍杨胜利
- 关键词：表达纯化
- 含有HIV转导结构域的生存素突变体及制备方法和应用
- 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种Survivin点突变体融合蛋白基因TAT(m)－Survivin(T34A)及其重组表达载体、含有该表达载体的工程菌及其制备方法、表达产物TAT(m)－Survivin(T34A)制...
- 魏东芝马兴元郑文云马昱澍刘清海杨胜利
- 文献传递
- 胰高血糖素样肽1受体N端片段与exendin-4的亲和位点分析被引量：2
- 2008年
- 通过易错PCR(epPCR)方法建立了一个鼠肺的胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)N端片段的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体来分析突变后胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)与exendin-4结合活性。实验结果显示:保守的半胱氨酸C26发生突变后并未引起nGLP-1R与其配体exendin-4结合能力的改变,第101位和108位氨基酸是nGLP-1R与exendin-4结合的潜在位点。
- 高蔚丰刘美云马昱澍
- 关键词：EXENDIN-4易错PCR噬菌体表面展示
- 一种获得目的mRNA的方法
- 本发明提供了一种获得目的mRNA的方法。该方法是将目的基因进行改造，在其3’末端引入oligo(dT)序列，然后分别在5’端和3’端加上限制性内切酶识别序列，并与载体结合，转化到大肠杆菌感受态细胞中，促使其高表达，提取大...
- 杨忠赵建龙马昱澍肖君华王锦之魏东芝
- 文献传递
- 一种有机溶剂缓释系统及其制备和在酶催化反应中的应用
- 本发明公开了一种有机溶剂缓释系统的制备及其在酶催化反应中的应用。本发明的有机溶剂缓释系统由多孔类固体物质和吸附在多孔类固体物质中的液态有机物构成；将液态有机物饱和的孔类固体物质和植物油在固定化脂肪酶和溶剂存在的情况下，3...
- 魏东芝罗宇马昱澍
- 文献传递
