张恒辉
- 作品数：8 被引量：58H指数：3
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：卫生部临床学科重点项目美国中华医学基金美国中华医学基金会项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HLA-A2肽四聚体的构建及其在乙、丙型肝炎中的初步应用被引量：37
- 2004年
- 目的 分别构建乙型肝炎病毒 (HBV)和丙型肝炎病毒 (HCV)特异的HLA A2肽四聚体 ,为检测乙、丙型肝炎患者体内特异性的细胞毒T细胞 (CTL)提供直接、有效的方法 ,指导临床用药。方法 分别构建含有HLA A2 BSP(含有 15个可供识别生物素化的氨基酸位点 )和 β2微球蛋白(β 2m)基因的原核表达载体 ,并进行表达、复性、鉴定及纯化。再分别将HBV和HCV特异性短肽与HLA A2 BSP和 β 2m蛋白在体外进行耦合 ,该复合物经纯化浓缩后进行生物素化。生物素化的产物经纯化浓缩后形成单体 ,此单体再与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成四聚体 ,最后进行流式细胞仪检测。结果 获得了高效、稳定的pBV2 2 0 HLA A2 BSP和 pBV2 2 0 β 2m原核表达载体 ,表达量分别占菌体的 4 6 %和 2 6 %左右 ;纯度达 90 %以上。构建的四聚体可成功的检测急、慢性乙型和丙型肝炎患者中特异性的CTL ,急性HBV感染时CTL占 1 84 % ,慢性HBV感染时CTL占0 0 2 %～ 0 6 8% ,慢性HCV感染的CTL占 0 0 2～ 0 72 %。结论 高效、稳定的pBV2 2 0 HLA A2 BSP和 pBV2 2 0 β 2m原核表达载体大量的表达可用于构建各种肽特异性的四聚体复合物 ;在体外构建的MHC Ⅰ类分子四聚体 ,为特异性细胞毒T细胞的检测提供有效的工具。
- 朴文花何豫席宏丽孙新婷张恒辉徐京航赵鸿许文燮李在琉王贵强
- 关键词：HLA-A2四聚体CTL丙型肝炎原核表达载体复性
- 人β_2-微球蛋白在pET-22b(+)表达载体中的克隆、表达与纯化被引量：3
- 2005年
- 目的 :构建人 β2-microglobulin( β2- M)基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中高效表达 β2 -M蛋白质并进行纯化 ,为构建MHC 肽四聚体奠定基础。方法 :从人外周血单核细胞中提取总RNA ,采用RT-PCR技术扩增出去除信号肽部分的 β2-M基因 ,克隆入pET-2 2b( + )表达载体进行诱导表达。采用离子交换层析和凝胶过滤方法对表达产物进行纯化 ,用ELISA和West ernblot法进行免疫学鉴定。结果 :成功地构建了表达载体pET-2 2b( + )- β2-M ,对表达产物进行了纯化 ,并对表达产物进行了鉴定。结论 :获得 β2- M蛋白的高效表达 。
- 朴文花张恒辉何豫朴桂花许文燮李在琉王贵强
- 关键词：Β2-M纯化四聚体
- 合成抗菌肽对大肠杆菌的体外抑制作用
- 2004年
- 目的 观察不同浓度抗菌肽在不同时间内对大肠杆菌体外抑制和杀灭作用。方法 将2种不同浓度的抗菌肽分别加到1×105 cfu.mL-1大肠杆菌菌液中,振荡培养0.5～6 h, 其中取5个时间段菌液,一部分培养后进行细菌计数,另一部分放入肉汤中继续培养,16h后测定不同时间段的A值。结果 在细菌浓度一定,加入抗菌肽200 mmol.L-1,作用时间为0.5,6 h时,A值分别为0.15,0.63。加入抗菌肽400 mmol.L-1,作用时间0.5～6 h时,A值为0.002～0.001,对照组A值为0.98。结论 抗菌肽杀菌效果与抗菌肽和细菌量有关,抗菌肽活性分子足够量才能杀死细菌,未受到抗菌肽作用的菌体能继续分裂繁殖。
- 孙新婷王贵强米志宝张恒辉朴文花
- 关键词：抗菌肽大肠杆菌体外敏感试验
- 树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究被引量：15
- 2005年
- 目的探讨通过聚肌胞体外作用树突状细胞后改善慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能,并在体外活化自身T细胞获得高频数HBV特异性细胞毒性T细胞(CTL)的方法。方法分离慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞,在粒巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)和白细胞介素4(IL4)的诱导下培养树突状细胞。培养的第7天加入聚肌胞刺激获得成熟树突状细胞,经HBVcore1827肽负载后与自身T淋巴细胞共培养,通过酶联斑点计数法(Elispot)及MHC肽四聚体法(Tetramer)比较病人T细胞未经自身树突状细胞刺激组、经HBVcore1827肽负载的自身树突状细胞刺激组、经聚肌胞促成熟的HBVcore1827肽负载的自身树突状细胞刺激组中HBV特异性的CTL的功能和频数。结果慢性乙型肝炎病人外周血单核细胞体外经GM CSF和IL4诱导可转化为树突状细胞,树突状细胞转化过程中聚肌胞的刺激可显著上调树突状细胞表面分子CD80、CD83的表达(P<0.01),促进树突状细胞的成熟。Elispot法检测分泌IFNγ的CTL的频数病人T细胞未经自身树突状细胞刺激组分泌频数为(9～28)/1×105T细胞,均值16;经HBVcore1827肽负载的自身树突状细胞刺激组频数为(30～67)/1×105T细胞,均值为46;经聚肌胞促成熟的HBVcore1827肽负载的自身树突状细胞刺激组频数为(59～130)/1×105T细胞,均值为98。三组数据?
- 张恒辉何豫赵鸿朴文花刘茂昌席宏丽于敏王贵强
- 关键词：体外刺激慢性乙型肝炎病HBV特异性人外周血单个核细胞TETRAMER细胞毒性T细胞
- 树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究
- 目前认为,HBV慢性感染的主要原因是针对HBV特异性细胞免疫功能的低下。DC是功能最强大的抗原递呈细胞,在病毒抗原摄取、递呈及特异性免疫激活中均具有重要作用,是抗感染免疫的中心环节,而近年来研究发现慢性乙型肝炎患者(ch...
- 张恒辉何豫赵鸿朴文花刘茂昌席宏丽于敏王贵强
- 文献传递
- 慢性乙型肝炎病毒感染产妇的胎儿脐带血树突状细胞的表型及功能被引量：7
- 2005年
- 目的探讨孕妇慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对其胎儿脐血的树突状细胞(DC)的表型和功能的影响,并与健康胎儿、健康成人及成人慢性HBV感染者进行对比研究。方法体外分离慢性HBV 感染产妇及健康产妇胎儿脐带血、健康成人及慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞进行树突状细胞转化,行流式细胞术对其表型进行分析,通过交叉混合淋巴细胞培养和DC培养上清液白细胞介素(IL)-12检测来分析DC的功能。结果慢性HBV感染产妇脐血来源DC的CD 80、CD 83的表达显著低于健康胎儿组、健康成人组、成人慢性HBV感染组,CD14的表达则显著高于此三组,P值均<0.0 5;慢性HBV感染产妇脐带血DC分泌的IL-12水平也明显低于健康产妇、健康成人组及慢性乙型肝炎患者(P<0.05);促异体T淋巴细胞增殖能力的强弱依次为健康成人DC-健康脐血T淋巴细胞>健康成人DC-健康成人异体T淋巴细胞>健康脐血DC-异体健康脐血T淋巴细胞>健康脐血DC-健康成人T淋巴细胞>孕母HBV感染脐血DC-健康脐血T淋巴细胞>孕母HBV感染脐血DC-健康异体成人T淋巴细胞。结论慢性HBV感染产妇胎儿脐血DC的成熟和功能显著低于健康胎儿脐血DC、健康成人甚至慢性乙型肝炎患者外周血DC。
- 张恒辉杨慧霞席宏丽何豫朴文花赵鸿于敏王贵强
- 关键词：慢性乙型肝炎病毒感染树突状细胞胎儿脐带血表型混合淋巴细胞健康产妇
- A9.树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究
- 本研究通过在体外进行CHB患者单核细胞树突状细胞方向转化,并辅以聚肌胞poly(I:C)刺激,增强DC的成熟和功能,活化病人自身的T淋巴细胞,以获得数量更多、功能更强的HBV特异性的CTL,并通过最近开展的Elispot...
- 张恒辉何豫赵鸿朴文花刘茂昌席宏丽于敏王贵强
- 关键词：CHB树突状细胞体外刺激HBVT细胞
- 文献传递
- 慢性HBV感染产妇新生儿脐带血树突状细胞表型及功能的研究
- 目的探讨孕母为慢性HBV感染者的新生儿其脐带血树突状细胞(DC)表型成熟和功能的情况, 并与健康孕母的新生儿、健康成人及慢性HBV感染成人的树突状细胞的表型和功能分别进行对比研究, 以解释树突状细胞在HBV母婴垂直传播导...
- 张恒辉何豫席宏丽朴文花刘茂昌赵鸿于敏王贵强
- 文献传递
