舒放
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
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- 嵌合HCV中和抗原表位的HBVS抗原病毒样颗粒制备及鉴定
- 目的 制备嵌合丙型肝炎病毒(HCV)中和表位的HBV 小S 抗原病毒样颗粒,并进行鉴定和纯化.方法 选择HCV E1和E2区保守的线性中和抗原表位,扩增HBV S 抗原基因,在HBV S 疏水区127 和128 位氨基酸...
- 韦三华舒放雷迎峰林芳崔颖李斌张利军刘昕阳张惠中
- 关键词：中和表位病毒样颗粒
- 嵌合HCV串联多表位的乙肝S基因真核载体构建及表达
- 2016年
- [目的]构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)串联多中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达。[方法]将HCV基因中高度保守且具有广谱交叉中和活性的三个表位和一个HVR1模拟表位串连。串联表位嵌合于HBV S基因的氨基端胞外区,形成嵌合基因MEpS;将基因克隆至真核表达载体pCI-neo中,构建重组质粒pCI-MEpS。将质粒转染至293T细胞中,间接免疫荧光及Western Blot检测嵌合基因的表达情况。[结果]重组质粒经双酶切证实构建正确;pCI-MEpS转染的293T细胞胞浆内可见较强的绿色荧光,Western Blot显示pCI-MEpS在相对分子量约38 kDa处可见蛋白条带。[结论]构建了HBV S抗原嵌合HCV串联多中和抗原表位的重组质粒,成功在293T细胞中表达,为制备嵌合HCV串联多中和抗原表位的HBV S抗原VLPs,研究嵌合VLPs免疫动物后产生的中和抗体的保护作用奠定了实验基础。
- 王晓岩雷迎峰李翠林芳崔颖舒放张惠中韦三华
- 关键词：S抗原
- 丙型肝炎病毒中和抗原表位与乙型肝炎病毒S抗原嵌合基因重组真核表达质粒的构建及其在293T细胞中的表达被引量：5
- 2013年
- 目的构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达。方法从含HBV全序列的质粒pHBV中扩增HBV S抗原基因,在HBV S疏水区127和128位氨基酸序列处引入AgeⅠ酶切位点,将HCV E1和E2区保守的线性中和抗原表位及HVR1的模拟表位基因分别插入该位点,获得嵌合HCV中和抗原表位的重组HBV S基因,将该基因克隆至真核表达载体pCI-neo中,构建重组真核表达质粒pCI-HBSE1～4。将4种重组真核表达质粒转染293T细胞,间接免疫荧光和Western blot检测嵌合基因的表达。结果 4种重组真核表达质粒经双酶切证实构建正确;4种重组质粒转染的293T细胞胞浆内可见较强的绿色荧光,Western blot显示,在相对分子质量约27 000处可见蛋白条带。结论成功构建了HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合基因真核表达质粒,其在293T细胞中可有效表达,为进一步制备嵌合HCV中和抗原表位的HBV S抗原VLP,研究中和抗体对HCV假病毒颗粒(HCVpp)和JFH-1 HCV体外培养系统(HCVcc)感染的抑制作用奠定了实验基础。
- 舒放雷迎峰林芳王希李斌张利军董轲张惠中韦三华
- 关键词：丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒S抗原真核细胞
- HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒的制备及纯化被引量：5
- 2015年
- 目的制备丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并进行纯化和鉴定。方法采用脂质体法分别将4个HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合重组表达载体p CI-HBSE1、p CI-HBSE2、p CI-HBSE3、p CI-HBSE4转染HEK293T细胞,48 h后收集培养上清,获得自我装配的嵌合HCV中和表位的HBV VLPs,分别命名为VLPs-SE1、VLPs-SE2、VLPs-SE3、VLPs-SE4,蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后,电镜观察VLPs,电化学发光法进行HBs Ag定量,ELISA法检测嵌合VLPs作为包被抗原与HCV感染患者血清的反应。结果电镜观察可见4种嵌合VLPs,大小约为22 nm;浓度最高的VLPs-SE2 HBs Ag含量达5.51×103ng/ml,该浓度可满足后续试验的要求;用混合VLPs作为包被抗原检测的HCV感染患者血清中和抗体水平稍高于单一VLPs作为包被抗原检测的水平。结论成功制备了HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合VLPs,为进一步评价VLPs体内诱导的中和抗体及中和抗体的保护作用奠定了基础。
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- 关键词：丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒S抗原病毒样颗粒
- 嵌合有HCV多中和抗原表位的乙肝S抗原病毒样颗粒的制备与鉴定
- 2017年
- 制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBV S抗原病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时,将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞,48h后在培养上清中得到自我装配的嵌合HCV多中和表位及包膜蛋白E2的HBV病毒样颗粒(VLP-MEpS,VLP-M2S)。蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后,电化学发光法进行HBsAg定量测定、电镜分析和Western blotting鉴定。制备出的嵌合病毒样颗粒VLP-MEpS和VLP-E2S经浓缩后其HBsAg定量最高达到3×10~4 ng/mL。实验表明我们成功制备出嵌合有HCV多中和抗原表位的HBV VLP,为进一步分析诱导的中和抗体研究奠定基础。
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- 关键词：丙型肝炎病毒中和表位病毒样颗粒
- HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒诱导的中和抗体应答及保护评价被引量：2
- 2015年
- 目的用纯化的嵌合HCV中和抗原表位的HBV VLPs免疫Balb/c小鼠,测定小鼠血清中的中和抗体,并观察免疫血清对HCVpp和HCVcc感染Huh7.5的抑制作用。方法 500 ng纯化的嵌合病毒样颗粒抗原,免疫Balb/c小鼠3次,每2周尾静脉采血,用合成的表位肽和HBs Ag阳性血清作为包被抗原检测小鼠血清中抗体。免疫血清和HCVpp及HCVcc预处理,观察其对HCVpp和HCVcc感染Huh7.5细胞的抑制作用。结果 Balb/c小鼠体内诱导出HBs Ab和一定水平的针对HCV中和抗原表位的中和抗体,混合VLPs免疫诱导的中和抗体水平高于单一VLPs诱导产生的中和抗体。用免疫小鼠血清预处理的HCVpp和HCVcc感染Huh7.5能力明显低于对照组。结论嵌合HCV中和抗原表位的HBV VLPs免疫小鼠可诱导产生针对中和抗原表位的中和抗体,该中和抗体能抑制HCVpp和HCVcc对Huh7.5的感染,具有一定的保护作用。
- 王晓岩张海舒放雷迎峰魏欣林芳崔颖李斌张惠中韦三华
- 关键词：丙型肝炎病毒中和表位病毒样颗粒
- 嵌合HCV中和抗原表位的HBV S抗原病毒样颗粒制备及鉴定
- <正>目的制备嵌合丙型肝炎病毒(HCV)中和表位的HBV小S抗原病毒样颗粒,并进行鉴定和纯化。方法选择HCVE1和E2区保守的线性中和抗原表位,扩增HBVS抗原基因,在HBVS疏水区127和128位氨基酸序列处引入Age...
- 韦三华舒放雷迎峰林芳崔颖李斌张利军刘昕阳张惠中
- 文献传递
