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实时荧光定量PCR筛选牛源整联蛋白αv基因的siRNA片段被引量：1: 2011年; 设计并合成三条针对牛口蹄疫病毒(FMDV)整联蛋白受体αv亚基基因的特异性干扰小RNA(SiRNA)片段,将其转染至本身表达整联蛋白受体αv亚基基因的MDBK细胞。分别在转染后36 h和48 h收集细胞,提取细胞总RNA并反转录为cDNA。应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR的方法检测3个siRNA片段的干扰效果,筛选出对整联蛋白αv基因具有高效干扰效果的小RNA片段。为建立抗口蹄疫病毒牛新品种培育的RNA干扰转基因技术平台奠定了基础。; 张国峰独军政常惠芸薛霜骆继怀; 关键词：实时荧光定量PCR 整联蛋白 RNA干扰 SYBR

实时荧光定量PCR技术研究进展及其在兽医学中的应用被引量：26: 2010年; 实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医学的基础研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用。笔者将对FQ-PCR技术的原理、检测方法研究进展以及目前的应用状况等作一综述。; 薛霜独军政高闪电常惠芸; 关键词：实时荧光定量PCR 探针

绵羊FMDV受体整联蛋白αvβ6的体外表达及组织分布研究: 口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病。FMDV主要利用VP1 G-H...; 薛霜; 关键词：口蹄疫病毒细胞系; 文献传递

整联蛋白结构与信号转导机制被引量：5: 2010年; 整联蛋白是一类α/β异源二聚体膜受体分子,通过细胞膜的双向信号转导作用以调节细胞分化、迁移、免疫、黏附等生物学功能。整联蛋白能通过多种途径如黏附斑激酶、胞内-外离子浓度及结构域构象变化等介导细胞信号转导。近年来,研究的焦点是整联蛋白如何通过构象的改变来调节细胞信号转导以及对配体的亲和力。论文主要从分子水平上就整联蛋白结构和介导的信号转导机理进行了综述。; 薛霜独军政赵建勇高闪电常惠芸; 关键词：整联蛋白构象信号转导配体

1-2月龄荷斯坦奶牛不同组织中FMDV受体亚基αv、β3、β6mRNA转录水平的相对定量研究被引量：6: 2010年; 【目的】建立检测牛口蹄疫病毒(FMDV)受体亚基αv、β3、β6 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析受体αvβ3和αvβ6在不同器官组织中的转录水平。【方法】在对牛FMDV受体基因克隆和测序的基础上,设计实时定量PCR引物,以GAPDH为内参基因,采用△△Ct相对定量PCR方法检测分析FMDV受体亚基αv、β3、β6 mRNA在1—2月龄荷斯坦奶牛体内不同器官组织中的转录表达谱。【结果】αvβ3在荷斯坦奶牛24种组织中均有不同程度的转录表达;αvβ6在甲状腺、硬腭、鼻内皮、喉头、肺、食管、肾、后蹄冠状带等组织表达量较高,在唇、舌皮、软腭、气管、心脏、瘤胃、直肠、前蹄冠状带等组织转录表达量适中,在唾液腺、下颌淋巴结、肝、脾、肌肉等组织未检测到表达;αvβ6在牛体内的表达分布与FMDV组织嗜性基本一致,αvβ6受体可能是决定FMDV组织嗜性的主要功能受体,αvβ3的组织分布似乎与FMDV组织嗜性无关,但不能排除αvβ3在病毒感染过程中的作用。【结论】建立了检测FMDV受体亚基mRNA在不同器官组织中表达水平的相对实时定量PCR方法。; 独军政常惠芸薛霜高闪电丛国正邵军军林彤包慧芳才学鹏; 关键词：SYBR 荷斯坦奶牛

口蹄疫病毒受体羊源整联蛋白β6亚基配体结合域的原核表达、纯化及鉴定被引量：1: 2009年; 利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白。以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pPROEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRO/β6LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导表达重组羊β6LBD融合蛋白。SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达并利用镍离子亲和树脂对其纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot方法分析鉴定表达产物。成功构建了pPRO/β6LBD原核表达载体,实现了羊FMDV受体整联蛋白亚基β6LBD在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量(Mr)约为33 kDa,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。用本试验室保存的抗FMDV受体猪源整联蛋白β6亚基LBD的单克隆抗体进行ELISA和Western blot检测,显示该单抗可与重组目的蛋白发生特异性反应,证明纯化后的蛋白与特异性抗体具有良好的特异性反应及抗原活性。为深入研究整联蛋白受体β6亚基在羊体内的分布及其在FMDV致病过程中的作用机制奠定了基础。; 薛霜独军政高闪电常惠芸; 关键词：口蹄疫病毒受体配体结合域原核表达

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薛霜