郑逢梅
- 作品数：13 被引量：108H指数：4
- 供职机构：河南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省科技攻关计划国家农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 河南不同地区猪场柯布病毒流行情况调查
- 一前言2007年,Gabor Reuter等在匈牙利首次发现猪柯布病毒(kobuvirus,KBV)。之后在中国、泰国、韩国、日本、巴西以及荷兰相继有猪群KBV感染报道。国外报道无临床症状猪群KBV感染率为19～65%,...
- 姬郭彪王川庆赵军杨霞常洪涛陈陆刘红英王新卫郑逢梅
- 文献传递
- PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立被引量：9
- 2014年
- 为建立检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白抗体的ELISA方法，应用RT-PCR从腹泻仔猪样本中扩增获得了1段PEDV河南流行毒株N基因全长序列，根据对其氨基酸序列的抗原性分析结果，将N基因上2个大的抗原表位区（112～321位氨基酸）克隆至原核表达载体pET-32u，构建pET-32a-N重组质粒并转化至宿主菌BL21（DE3）中。将重组菌在37℃条件下加入IPTG进行诱导使该蛋白获得了高效表达，表达产物为融合蛋白，相对分子质量约41300。Western-blot分析表明，所表达的蛋白可与抗PEDV全病毒小鼠阳性血清发生反应。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法，抗原最佳包被量0．226ug／μL，血清最佳稀释度为1：100，二抗最佳稀释度为1：2000，待检血清n450值≥0．28判定为阳性。国内首次用该方法对临床猪血清样本进行了检测，母猪血清PEDV抗体阳性率为84．26％（166／197），仔猪血清阳性率为27．93％（31／111）。结果表明，建立的间接ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好，可用于-1盏床上PEDV抗体水平的监测和PED流行病学调查。
- 郑逢梅赵军霍金耀李欢杨霞陈陆常洪涛王新卫刘红英杜季梅姚慧霞王川庆
- 关键词：PEDVN基因原核表达抗体监测
- 河南地区猪嵴病毒分子检测和VP1基因遗传进化分析
- 小RNA病毒是无囊膜的单股正链RNA病毒,该科由12个属组成,包含一个新的嵴病毒属。目前,嵴病毒属有Aichi病毒、牛嵴病毒(Bovine Kobuvirus,BKV)和一个暂定的猪嵴病毒(Porcine Kobuvir...
- 姬郭彪赵军李欢杨霞周峰魏亚鹏王晓梦常洪涛郑逢梅陈陆王川庆
- 河南地区猪嵴病毒分子检测和VP1基因遗传进化分析被引量：4
- 2014年
- 猪嵴病毒（PKV）为新发现的小RNA病毒科嵴病毒属的一个待定种。为调查PKV在河南地区猪群中的感染和流行情况，本研究采集2010年~2012年河南地区84个种猪场150份猪腹泻粪便样品和23份无腹泻症状猪的粪便样品（猪场有腹泻史），采用RT．PCR方法对PKV的VP1基因进行检测。结果显示，检测样品中PKV总阳性率为82．1％（142／173），猪场PKV总阳性率为82．1％（69／84），表明河南地区各种猪群普遍存在PKV感染。其中发病猪群的PKV总阳性率为80．0％（120／150），临床健康猪群的PKV总阳性率为95．7％（22／23），两者无明显差异。此外，对8个阳性样品中VP1基因进行测序比对，结果显示与中国其它地区的PKVvP1基因的核苷酸同源性为80．7％～99．9％，推导的氨基酸序列同源性为83．9％～99．6％。遗传进化分析显示所有已知的PKV株构成4个分支，河南的8个PKV的VP1序列分别位于其中的3个分支中。
- 姬郭彪赵军周峰魏亚鹏常洪涛郑逢梅王川庆
- 关键词：VP1基因遗传进化分析
- 猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、A群轮状病毒和嵴病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用被引量：11
- 2013年
- 本研究建立了可同时检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis Virus,TGEV)、A群轮状病毒(Group A rotavirus,GARV)和猪嵴病毒(Porcine kobuvirus)的多重RT-PCR方法。检测中,建立的多重RT-PCR方法能够检测到500pg的TGEV、PEDV、GARV和猪嵴病毒等量混合RNA模板,与常规的单一RT-PCR检测结果基本相同(检测TGEV、PEDV、GARV和猪嵴病毒的灵敏性分别为100%、100%、93.33%和96.67%,特异性均为100%)。结果表明,建立的多重RT-PCR方法敏感性和特异性良好,可作为临床上猪病毒性腹泻病因快速、高效的诊断工具。应用该方法对2010-2012年华中地区190份腹泻仔猪样本进行检测,PEDV、TGEV、GARV和猪嵴病毒的阳性率分别为62.11%、0.53%、7.37%和82.11%。混合感染方面,PEDV和猪嵴病毒混合感染率为47.89%,PEDV和GARV混合感染率为4.74%,GARV和猪嵴病毒混合感染率为7.37%,PEDV、GARV和猪嵴病毒混合感染率为4.74%,未发现TGEV与其它3种病毒的混合感染情况。另外,有27份样本中仅检出PEDV(14.21%),57份样本只检出猪嵴病毒(30%)。分析表明,我国自2010年底大面积暴发的病毒性腹泻是多病原混合感染造成的,主要病原为PEDV,猪嵴病毒在其中所起作用尚待进一步验证和研究。
- 霍金耀郑逢梅陈陆余秋颖常洪涛陈文定明星郑关民赵军王川庆
- 关键词：PEDVTGEV
- 猪链球菌血清2型环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为了建立快速、灵敏的猪链球菌血清2型(SS2)LAMP检测方法,根据GenBank登录的SS2特异的荚膜多糖(cps2 H)基因序列作为检测靶标,在其序列的保守区域设计LAMP引物,利用参考菌株S735基因组DNA为模板进行扩增,优化了LAMP的反应条件和反应体系,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果,利用建立的LAMP方法对SS2进行扩增,扩增产物显色呈现阳性反应,电泳出现阶梯状条带,最低检测量为0.186fg/μL模板DNA,比常规PCR高1 000倍;且与其他常见的细菌无交叉反应。结果表明,建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速和重复性强等优点,适用于猪链球菌病的实验室快速检测。
- 张九州李欢杨霞赵军陈陆常洪涛程海卫郑逢梅王川庆迪丽拜尔.阿木提
- 关键词：环介导等温扩增技术
- 2010～2012年华中地区猪流行性腹泻病毒分子特征和遗传进化分析被引量：79
- 2013年
- 2010年底开始,猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)在中国境内出现严重暴发。为探讨该病突然再次暴发的原因,对2010年10月至2012年6月于华中地区11个地市收集的12株猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)S、M和ORF3基因进行RT-PCR扩增、克隆及测序,并对其序列变化、遗传进化关系、抗原位点、糖基化位点和多肽极性进行分析。结果显示,12株PEDV流行毒株S、M和ORF3基因部分核苷酸及氨基酸的改变使其关键序列明显不同于以往毒株,其中有11株流行毒株的S基因比现用疫苗毒株CV777多9个核苷酸,而且在其S1区N′端存在大量的氨基酸突变。遗传进化分析显示,12株PEDV华中地区毒株与2007～2009年韩国毒株、2007～2008年泰国毒株、2009～2010年越南毒株、2011年日本毒株及2010～2012年中国其它地区流行毒株亲缘关系均较密切,而与欧洲株(CV 777、Br1/87)、中国现用疫苗株(CV777)及2003～2007年中国分离株(LJB/03、JS-2004-2、DX、QH、LZC)亲缘关系均较远。与现用疫苗株(CV777)相比,流行毒株S蛋白的抗原位点、糖基化位点和跨膜螺旋均有明显改变,提示PEDV在近年呈现快速变异和进化的趋势,因而可能需要选择更有效的疫苗株来控制PEDV的暴发。
- 郑逢梅霍金耀赵军常洪涛王晓梦陈陆王川庆
- 关键词：系统进化分析S基因ORF3基因M基因病毒变异
- 猪链球菌血清2型抗体IHA检测方法的建立及应用被引量：1
- 2013年
- 用猪链球菌血清2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)致敏经戊二醛处理过的鸡红细胞,优化致敏醛化红细胞的抗原量和时间。结果显示,在37℃条件下CPS(2.2 5mg/L)致敏鸡红细胞90min,IHA试验在25℃条件下操作,被检血清IHA效价在1∶8及其以上时判为SS2抗体阳性。应用此方法对猪大肠杆菌、副嗜血杆菌、猪肠球菌、SS1、SS7、SS9、金黄色葡萄球菌、沙门菌、巴氏杆菌阳性血清进行检测,结果表明,SS2抗体均为阴性。对1044份无临床症状的猪血清进行检测,SS2抗体阳性率为61.69%。该方法敏感性高,特异性较强,可用于大规模SS2抗体水平的检测和SS2的血清流行病学调查。
- 张九州郑逢梅李乔晶姬郭彪杨霞赵军陈陆常洪涛王新卫李欢王川庆
- 关键词：链球菌间接血凝试验抗体检测
- 河南不同地区猪场柯布病毒流行情况调查
- 姬郭彪王川庆赵军杨霞常洪涛陈陆刘红英王新卫郑逢梅
- 血清2型猪链球菌河南分离株毒力基因的鉴定及其cps2j全基因序列分析被引量：2
- 2011年
- 为了解血清2型猪链球菌(S.suis 2)河南分离株的毒力基因型及cps2j全基因突变情况,本研究扩增S.suis 2毒力基因gdh、cps2j、mrp、ef、sly、orf2和fbps,并对S.suis 2的cps2j进行全基因序列测定和同源性分析。结果表明,gdh、cps2j、mrp、ef、sly、orf2和fbps基因在8个S.suis 2分离株中的检出率分别为100%(8/8)、100%(8/8)、62.5%(5/8)、75%(6/8)、87.5%(7/8)、100%(8/8)和100%(8/8);其中cps2j全基因核苷酸及推导的氨基酸序列与来源不同的S.suis 2分离株同源性分别达98%和97%以上,以该基因构建的系统发育树表明8株S.suis 2河南分离株与国内外不同参考株同源性高,亲缘关系密切。
- 张九州李乔晶郑逢梅常洪涛陈陆杨霞姚惠霞王川庆迪丽拜尔.阿木提
- 关键词：毒力基因同源性
