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靖学芳: 作品数：22 被引量：77H指数：5; 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>; 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市教委科技发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>

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pPICZα-synBPI_(m600)酵母表达载体的构建和鉴定被引量：4: 2004年; 为使rBPIm2 3 重组抗菌蛋白在毕赤酵母表达系统中分泌表达 ,拟构建synBPIm60 0 酵母表达载体。以pUC18 synBPI41 4 质粒为模板扩增synBPI2 0 0 基因片段 ,经XhoI/EcoRI双酶切获得synBPI1 85bp基因片段 ;EcoRI/SalI双酶切PBV2 2 0 BPIm60 0 质粒获得BPIm42 0 基因片段 ;将上述 2个基因片段连接后定向克隆到pPICZα酵母表达载体上。连接产物转化E .coliTOP 10F′ ,在含Zeocin的低盐LB固体培养基上筛选阳性转化子。阳性克隆菌经菌落PCR法鉴定、酶切分析和测序鉴定 ,结果与预期相符。提示 :成功构建了pPICZα synBPIm60 0; 丛敏靖学芳刘振龙孙明洁安云庆; 关键词：毕赤酵母

链球菌组蛋白样蛋白对人脐静脉血管内皮细胞产生TNF-α的影响被引量：2: 2003年; 研究链球菌HlpA对HUVEC产生TNF-α的作用。用1929成纤维细胞的细胞毒实验检测TNF-α活性。链球菌HlpA(0-80μg/ml)在体外以剂量和时间依赖方式促进HUVEC过量产生TNF-α(P<0.05)。LTA和HlpA的混合物对TNF-α的产生呈协同增强作用(P<0.05);抗HlpA和肝素则起抑制作用。; 张力平平国玲李卫红沈海中张海燕张红春靖学芳李玉兰; 关键词：链球菌肿瘤坏死因子-Α

BPI23-Fcg1重组蛋白的研究: 安云庆杨贵贞陈金栋柯岩刘振龙靖学芳; 《BPI23-Fcg1重组抗菌蛋白的研究》是国家自然科学基金项目（批号：39570666）。该重组抗菌蛋白是采用基因工程技术研制的一种由杀菌/渗透增强蛋白功能性N端片段（BPI23）与IgG1Fc片段（Fcg1）嵌合而成...; 关键词：; 关键词：重组蛋白内毒素革兰氏阴性细菌

BPIm23-Fcg1重组抗菌蛋白在真核细胞中的表达及其抗菌活性和对小鼠的抗感染保护作用1重组抗菌蛋白在真核细胞中的表达及其抗菌活性和对小鼠的抗感染保护作用: 靖学芳; 关键词：CHO细胞

BPI_(23)-Fcγ1重组抗菌蛋白的研究: 2003年; 该重组抗菌蛋白是采用基因工程技术研制的一种由杀菌/渗透增强蛋白功能性N端片段(BPI23)与IgGlFc片段(Fcγ1)嵌合而成的抗感染生物制剂.目前该课题已取得关键性研究成果,即采用原核表达系统成功地获得了具备BPI和IgG双重功能的非糖基化抗菌蛋白.体外初步研究证实,该重组蛋白不仅具有杀伤G-菌及中和内毒素的作用,而且兼备激活补体和调理作用.; 安云庆杨贵贞陈金栋柯岩刘振龙靖学芳; 关键词：阳离子

提高重组抗菌蛋白BPI_(23)在E.coli中表达水平和复性率的研究被引量：2: 2005年; 目的:提高重组抗菌蛋白BPI23在E.coli D H 5α中的表达水平及提纯后蛋白的复性率。方法:通过降低目的基因5'端序列中G C含量和构建双拷贝重组表达载体pBV 220-(synBPI6002),减少低频密码子数目和增加目的基因拷贝数,并采用不同复性方法对提纯后的蛋白进行复性。结果:降低目的基因5'端序列中GC含量后,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的14.3%;单双拷贝重组表达载体转化E.coli DH 5α后,目的蛋白的表达水平无明显差异;在复性液中加入PEG 4000后,目的蛋白产生聚集沉淀较少。结论:减少目的基因中GC含量可显著提高BPI23的表达水平,增加表达载体中目的基因的拷贝数对其表达水平无影响,在蛋白复性液中加入PEG 4000可明显抑制蛋白聚集沉淀。; 章璐靖学芳安云庆; 关键词：蛋白表达复性

AAV2-BPI_(700)-Fcγ1_(700)重组病毒的制备及其转染小鼠后的抗感染作用被引量：5: 2005年; 目的通过观测BPI700-Fcγ1700嵌合基因导入小鼠对最小致死量E.coli感染攻击的抵抗作用,探讨基因治疗在细菌感染性疾病中应用的可能性。方法采用RT2PCR检测嵌合基因在转录水平的表达;采用免疫组化和酶联免疫吸附实验检测嵌合基因在蛋白水平的表达。结果(1)基因导入小鼠中目的嵌合基因得到表达,在注射部位肌肉组织和血清中可检测到目的嵌合蛋白;(2)在最小致死量E.coli感染攻击后,基因导入小鼠的存活率为31.43%,明显高于对照组小鼠的存活率4.62%;与小剂量头孢呋辛钠联合应用其存活率高达65%。结论BPI700-Fcγ1700嵌合基因导入小鼠对致死量E.coli感染具有较好抵抗作用,提示抗感染基因治疗在细菌感染性疾病,特别是在感染高危人群中具有广阔的临床应用前景。; 李晨郭向华陈庆华吕喆李静彭智李莉靖学芳孔庆利安云庆; 关键词：革兰阴性菌

定点突变对BPI_(23)-Fcγ1重组抗菌蛋白表达和复性率的影响被引量：5: 2002年; 为提高BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白在原核表达系统中的表达和复性率 ,采用定点突变法改造 pBV BPI60 0 Fcγ1 70 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α后 ,通过温控诱导表达。结果表明 :①突变后BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白表达量比突变前提高约 1 0 % ;②表达时间提前约 1h ;③抗菌活性未受影响 ;; 安云庆柯岩靖学芳杨贵贞; 关键词：定点突变

链球菌组蛋白样蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞的损伤作用: 2004年; 张力平李卫红平国玲沈海中张海燕李郁英靖学芳张红春; 关键词：链球菌人脐带内皮细胞损伤

BPI_(m23)重组抗菌蛋白在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达被引量：4: 2004年; 目的 :采用巴斯德毕赤酵母表达系统表达分泌型功能性rBPIm2 3抗菌蛋白。方法 :利用构建的pUC1 8 synBPI4 1 4质粒和PBV2 2 0 BPIm4 2 0 质粒 ,按分子克隆方法构建pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;用线性化pPICZα synBPIm6 0 0 质粒电转化PichiapastorisGS1 1 5 ,筛选抗性转化子 ,进行PCR和Mut表型鉴定 ;用甲醇诱导目的蛋白rBPIm2 3的表达 ;用离子交换层析纯化rBPIm2 3,并进行SDS PAGE分析、Westernblot鉴定和用BCA法定量。结果 :①成功构建了pPICZα synBPIm6 0 0 重组表达载体 ;②获得稳定整合目的基因的GS1 1 5菌株 ;③表达产物相对分子量约为 2 3kD ,可与抗BPI抗体特异性结合 ;④培养上清液中目的蛋白表达量约为 2 9mg L。结论 :BPIm2 3重组抗菌蛋白在毕赤酵母GS1 1 5中得到分泌表达。; 靖学芳安云庆杨贵贞; 关键词：巴斯德毕赤酵母分泌表达