刘礼兵
- 作品数：4 被引量：28H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- qa-3稀有密码子和mRNA结构改造及其在大肠杆菌中的高效表达被引量：21
- 2006年
- 奎尼酸脱氢酶的高表达是奎尼酸生物合成的代谢工程研究的关键和基础。粗糙脉孢菌基因组中编码奎尼酸脱氢酶的基因qa-3在大肠杆菌中不表达,根据大肠杆菌密码子使用频率分析qa-3基因,发现有27个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有8个,编码Gly(G)的有9个。编码精氨酸的AGG(AGA)两个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有个相对比较集中的GGG密集区G区。进一步通过计算机分析其qa-3基因mRNA二级结构,发现改变5′和3′末端个别碱基对其二级结构的影响很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3kJ/mol降低到最小-80.5kJ/mol,从而大大减少mRNA两端二级结构的产生,而仅仅改变R区和G区的稀有密码子自由能变化很小。通过对该基因密码子改造和优化5′和3′末端对其mRNA二级结构的影响,在大肠杆菌中表达真菌的基因qa-3,并测到了奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌株奠定基础。
- 刘礼兵刘云何华庆李永辉徐琪寿
- 关键词：密码子MRNA二级结构
- 奎尼酸生物合成的代谢工程研究
- 奎尼酸是一种具有极高价值的精细化工产品和医药中间体，在医药工业、食品工业、化工等行业均有较大的用途。本研究是将代谢工程技术应用于产奎尼酸基因工程菌的构建。根据代谢工程原理系统分析了细胞代谢网络，并利用DNA重组技术合理设...
- 刘礼兵
- 关键词：奎尼酸代谢工程基因敲除基因工程菌生物合成
- 文献传递
- 奎尼酸的生物合成与应用被引量：6
- 2005年
- 奎尼酸是一种具有极高价值的精细化工产品和医药中间体,在医药、食品、化工等行业均有广泛的应用价值。奎尼酸广泛存在于多种植物中,其咖啡酰类衍生物在抗病毒、治疗心血管疾病等研究中得到越来越多的关注和应用。目前获得奎尼酸的方法主要有4种,即植物提取法、化学合成法、酶工程法和微生物发酵法。随着分子生物学的不断发展,结合现代生物技术,应用基因工程方法,必将成为获得奎尼酸的重要途径。本文综述奎尼酸的分布、生物合成及其应用。
- 刘礼兵徐琪寿
- 关键词：奎尼酸生物合成中间体
- 大肠杆菌aroE基因的克隆与表达被引量：1
- 2005年
- 目的:克隆表达大肠杆菌莽草酸脱氢酶基因aroE,并测定其生物学活性。方法:根据大肠杆菌中aroE基因的序列设计了一对引物,利用PCR技术扩增得到aroE基因,将其克隆入高效原核表达载体pBV220,以双脱氧法进行测序,然后对该重组子利用温度诱导表达,并测酶的生物活性。结果:构建了aroE基因的克隆和表达重组子,aroE基因获得高效表达,SDS-PAGE图谱显示新增30×103蛋白带,酶活性测定结果表明奎尼酸脱氢酶的相对酶活性是5.6倍。结论:实现了莽草酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的高效表达,证明了其具有奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌种奠定了基础。
- 何华庆刘云刘礼兵林维平李思光徐琪寿
- 关键词：大肠杆菌基因表达聚合酶链反应
