孙庭万
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- [B10Glu,B24-Asp-B25]人胰岛素类似物的制备、鉴定与性质研究被引量：2
- 2004年
- 采用 PCR方法 ,将人胰岛素分子 B链 B1 0位 His突变为 Glu,在 B2 4和 B2 5位之间插入 Asp,构建了[B1 0 Glu,B2 4-Asp-B2 5 ]胰岛素原基因 .利用通用型质粒 p BV2 2 0构建表达载体 ,在大肠杆菌 DH5 α中表达 ,表达蛋白为包含体形式 ,约占菌体总蛋白的 2 0 %～ 3 0 % .经过复性和凝胶过滤得到胰岛素原融合蛋白 .用胰蛋白酶和羧肽酶 B酶切 ,经 DEAE离子交换和 RP-HPLC纯化得胰岛素突变体类似物 .用凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质 ,用圆二色谱测定了构象变化 .放射性免疫活性及受体结合活性测定结果表明 ,突变体分子缔合性明显下降 ,放免活性和受体结合活性分别约为人胰岛素的 73 .6%和 1 46% .
- 怀文辉孙庭万俞梅敏茹炳根
- 关键词：胰岛素类似物原核表达生物学活性PCR胰岛素原
- 1.人胰岛素原突变体Des-B26Tyr-proinsulin,Des-B28Pro-Proinsulin及B27Thr-Asp-B28Pro-Proinsulin基因的构建,表达和分离纯化;2.人胰岛素原C肽在大肠杆菌中的表达
- 利用非对称PCR的方法,进行基因定点突变.分别在人胰岛素原基因的B26,B28位进行了点删除;B27,B28位之间插入Asp.将三个突变的人胰岛素原基因克隆以温度诱导表达载体pBV220中在E.ColiDH5a中进行了直...
- 孙庭万
- 关键词：基因定点突变胰岛素突变体大肠杆菌
