张先梅
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EGCG对TF/Ⅶa/PAR2促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用
- 2011年
- 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对组织因子(TF)/凝血因子Ⅶa/蛋白酶激活受体(PAR)2促进结肠癌细胞株SW620细胞增殖与迁移的干预作用。方法用不同浓度EGCG、蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa刺激SW620细胞,采用MTT法t、ranswell法分别检测细胞增殖及迁移能力,实时定量PCR检测细胞TF及半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)7 mRNA表达,发色底物法与Western blot分别检测TF活性、Caspase-7蛋白表达。结果与PAR2-AP或Ⅶa单独处理相比,EGCG+PAR2-AP、EGCG+Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用明显降低,TF mRNA表达及活性下降,Caspase-7 mRNA及蛋白表达上调(P<0.05)。结论 EGCG可干预SW620细胞TF和Caspase-7的表达,抑制TF/Ⅶa/PAR2对细胞增殖与迁移的促进作用。
- 周芳周红吴莺王婷郭东琳许国莹文海平张先梅
- 关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯蛋白酶激活受体2
- 因子Ⅶa依赖组织因子激活PAR2/ERK/NF-κB抑制结肠癌SW620细胞caspase-3表达被引量：5
- 2012年
- 目的探讨凝血因子Ⅶa对结肠癌SW620细胞增殖能力以及表达凋亡分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的影响及其作用机制。方法用一定剂量的蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、凝血因子Ⅶa等刺激物处理SW620细胞,观察细胞生长情况;western blot和定量PCR分别检测细胞表达caspase-3蛋白质及mRNA水平;利用相关抗体、拮抗剂和抑制剂等观察因子Ⅶa对caspase-3表达的效应变化。结果 PAR2-AP(100μmol/L)及因子Ⅶa(10 nmol/L)能够明显促进SW620细胞的生长,减少细胞caspase-3蛋白质和mRNA的表达;抗组织因子(TF)抗体(а-TF)、PAR2拮抗剂(PAR2-аAP)、ERK1/2抑制剂U0126以及NF-κB抑制剂PDTC均能逆转因子Ⅶa对SW620细胞caspase-3表达的抑制效应,而p38MAPK抑制剂SB203580对caspase-3的表达无明显的干预作用。结论因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经ERK1/2和NF-κB信号通路,抑制SW620细胞caspase-3表达,从而促进细胞的增殖与生长。
- 张先梅周红陈东东解鸿翔胡丽超武标吴莺
- 关键词：蛋白酶激活受体2
- 核因子κB在凝血因子Ⅶa促进结肠癌SW620细胞增殖迁移中的作用被引量：3
- 2011年
- 目的探讨核因子KB（NF—κB）在促进结肠癌SW620细胞增殖迁移过程中的作用及其可能的机制。方法以凝血因子VIIa、NF—κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）等处理结肠癌细胞株SW620，采用Westernblot法检测细胞核NF—κB（p65）、细胞浆NF-κB抑制蛋白（IκB-α）和凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶7（caspase-7）的蛋白表达变化；采用流式细胞术检测SW620细胞的细胞周期变化；采用Transwell法测定SW620细胞的迁移能力；采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测白细胞介素8（IL-8）和组织因子（TF）mRNA的表达水平。结果凝血因子Ⅶa能够显著下调细胞浆中IκB-α的表达水平，并使细胞核内NF—κB的表达水平升高，单克隆抗TF和抗蛋白酶激活受体2（PAR2）抗体能够抑制凝血因子Ⅶa的这一作用。PDTC能够明显干预凝血因子Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用。PDTC能够明显干预凝血因子Ⅶa对SW620细胞中TF、IL-8mRNA表达的促进作用和对caspase-7蛋白表达的下调作用。结论凝血因子Ⅶa与细胞表面TF结合形成TF／Ⅶa复合物，活化受体PAR2，经NF—κB通路上调IL-8、下调caspase-7的表达，促进SW620细胞的增殖与迁移。TF／Ⅶa／／PAR2／NF—κB通路还可进一步上调TF的表达，从而形成TF／Ⅶa／PAR2／NF—κB／TF正反馈通路。
- 郭东琳周红吴莺周芳张先梅许国莹文海平
- 关键词：结肠肿瘤蛋白酶激活受体2核因子ΚB
- β_2GPI/抗β_2GPI抗体复合物激活THP-1细胞内TRIF途径被引量：5
- 2011年
- 目的:观察β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能否激活单核细胞株THP-1的TRIF途径,以探讨TRIF依赖途径在抗磷脂综合征(APS)发病机制中的作用。方法:采用一定剂量β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞TRIF mRNA水平,Western blot检测细胞TRIF蛋白表达情况;进一步观察TLR4途径抑制剂-TAK-242是否干预β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对TRIF的诱导表达以及相关细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达。结果:β2GPI/抗β2GPI抗体复合物(100 mg/L)能够诱导THP-1细胞表达TRIF(mRNA及蛋白),并显示时间效应,分别于刺激1 h和2 h时TRIF mRNA及蛋白表达至高峰。TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞TRIF的诱导表达,同时抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子的表达。结论:TRIF依赖的TLR4途径参与了β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞的激活,提示其在抗磷脂综合征的病理机制中发挥一定作用。
- 解鸿翔周红王海波陈东东王婷张先梅夏龙飞穆原
- 关键词：抗磷脂综合征TRIF炎症因子
- MAPKs在anti-β_2 GPI/β_2 GPI刺激THP-1细胞表达TF过程中的作用探讨被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)在anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的活化及其作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒等分别检测anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性,Western blot检测细胞表达p38、磷酸化-p38(p-p38)、ERK1/2、磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)、JNK、磷酸化-JNK(p-JNK)的情况。进一步采用p38、ERK1/2、JNK抑制剂(SB203580、U0126、SP600125)观察是否能阻断anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF。结果:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物(100μg/ml)能够显著增强THP-1细胞表达TF,并使p-p38、p-ERK1/2、p-JNK水平显著升高(P<0.05 vs control);其引发的MAPKs磷酸化具有时间效应性,均在刺激30分钟时达到高峰;对应的特异抑制剂SB203580(10μmol/L)、U0126(5μmol/L)、SP600125(90 nmol/L)单独或合并处理THP-1细胞后,anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导细胞TF mRNA表达及TF活性的效应明显被阻断(P<0.01 vs control)。结论:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,MAPKs被激活进而发挥重要作用。
- 陈东东周红解鸿翔张先梅夏龙飞王婷王海波
- 关键词：抗磷脂综合征GPI丝裂原活化蛋白激酶
- PKCα参与凝血因子Ⅶa/TF激活PAR2促进SW620细胞迁移被引量：1
- 2012年
- 目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)参与凝血因子Ⅶa依赖组织因子(TF)激活蛋白酶激活受体2(PAR2),从而促进SW620细胞迁移以及可能的作用机制。方法用蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa、PKC激动剂佛波醇酯(PMA)等刺激物处理SW620细胞,并用抑制抗体(抗TF、抗PAR2)、同型对照抗体(mopc-21)进行抑制试验。用western blot检测其PKCα与p-PKCα的表达,免疫荧光试验观察PKCα的分布情况;分别用PMA(100 nmol/L)、Ⅶa(10 nmol/L)及PKCα抑制剂(safingol,10μmol/L)处理SW620细胞,Transwell试验观察细胞迁移情况,定量PCR法检测其MMP-9 mRNA表达水平。结果PMA(100 nmol/L),因子Ⅶa(10 nmol/L)及PAR2-AP(100μmol/L)能明显促进PKCα的磷酸化(F=289.9,P<0.05),而对PKCα的表达没有显著性影响(F=2.02,P>0.05);免疫荧光实验结果表明,PKCα自胞浆向核膜与核内发生转位;加入抗TF及抗PAR2抗体能够显著抑制因子Ⅶa对PKCα的激活,而同型对照抗体(mopc-21)没有此作用;Transwell试验与定量PCR结果表明,PKCα抑制剂明显阻断因子Ⅶa对细胞迁移及MMP-9表达的促进作用。结论因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经信号分子PKCα介导,上调SW620细胞MMP-9表达,促进细胞的迁移。
- 武标周红张先梅胡丽超吴莺
- 关键词：蛋白激酶CΑ蛋白酶激活受体2细胞迁移
