王桂珍
- 作品数：44 被引量：108H指数：6
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- 双酶切法克隆肺炎支原体DNA的研究
- 1993年
- 用PstⅠ、EcoRⅠ两种限制性内切酶切割pUR222质粒DNA.经离心沉淀除去两酶切位点之间的小分子DNA片段,与肺炎支原体DNA重组,转化受体茵。用X-gal平板筛选出236株耐氨苄青霉素呈白色的菌落。经酶切图谱分析及DNA斑点杂交实验确证,这些菌株为含有肺炎支原体DNA片段的重组株。
- 王桂珍鲁润铭姜晶董占双郭慕华
- 关键词：肺炎支原体DNA重组
- 量子点标记肺炎支原体重组蛋白抗体检测抗原方法的建立被引量：6
- 2011年
- 目的建立一种用CdSe/ZnS量子点标记技术用于肺炎支原体检测的方法。方法用重组Mp P1蛋白免疫动物制备免疫血清,硫酸铵沉淀法及离子层析法纯化IgG抗体,纯化抗体用CdSe/ZnS量子点标记,离心沉淀法纯化标记产物。用标记抗体检测Mp抗原。结果量子点标记抗体直接玻片荧光法检测Mp抗原具有较高的敏感性(检测灵敏度在0.001μg/mL),且与呼吸道常见病原菌无交叉反应。结论成功建立量子点标记技术检测肺炎支原体抗原方法,具有操作简单、检测快速的优良,适用于Mp感染的早期诊断。
- 曾晶晶何梦博赵芝娜周世冠王桂珍
- 关键词：肺炎支原体抗原检测
- 肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的表达及鉴定被引量：3
- 2017年
- 目的探讨肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的免疫反应活性。方法对CARDS毒素蛋白的抗原表位进行分析,选取10个重要的表位进行拼接,反向翻译后合成并克隆,插入pET28a表达载体构建pET-CARDS表达质粒并转入受体菌。经IPTG诱导表达的多表位拼接CARDS蛋白使用6×His单克隆抗体和人阳性血清进行了免疫印迹的检测。结果 CARDS毒素蛋白的多表位拼接抗原表达载体构建成功,诱导后表达大小为30KDa的重组蛋白,Western blot测定其能与6×His单克隆抗体和人阳性血清发生反应。结论本研究选取的CARDS毒素蛋白抗原表位具有较强的免疫活性,可为Mp感染的诊断提供新的候选抗原。
- 刘宝山赵芝娜赵雨杰王桂珍
- 关键词：肺炎支原体
- 肺炎支原体感染鼠T淋巴细胞活化的动态变化被引量：2
- 2015年
- 动态观察肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)感染鼠T淋巴细胞的数量及其亚群的变化,为正确评价T淋巴细胞在Mp感染中的作用提供理论依据。Mp滴鼻感染小鼠,在感染后不同时间点采集标本,流式细胞术检测感染鼠外周血中T淋巴细胞数量变化,ELISA测定脾细胞上清中TGF-β1、IL-10含量。结果表明,Mp感染不同时间点外周血中CD4+T淋巴细胞数量变化不明显或呈下降趋势。CD4+/CD8+比值下降。初次感染和再次感染的第3天、第7天,TGF-β1、IL-10表达水平升高。肺炎支原体感染对CD4+T淋巴细胞有一定抑制作用,外周血TGF-β1、IL-10的表达与脾细胞中CD4+T淋巴细胞数量变化成反比。提示TGF-β1可能参与了对Th1细胞的负调控作用。
- 赵芝娜刘宝山冯辉杨颖司文王桂珍
- 关键词：肺炎支原体CD4+T淋巴细胞TGF-Β1
- 原位放射免疫分析在检测肺炎支原体克隆基因表达产物及临床微量标本上的应用
- 1993年
- 应用原位放射免疫分析法,从本实验室重组的以质粒为载体的重组子中,筛选出一株表达肺炎支原体抗原的克隆。同时应用此法对7例疑为非典型肺炎的患儿痰及咽嗽液标本进行检洲,其中4例出现阳性结果。试验表明此法也适用于临床微量抗原的直接检测。
- 卢金鲁润铭郭慕华陈庆学王桂珍李万军董占双
- 关键词：肺炎支原体放射免疫测定
- 沈阳地区肺炎支原体分离株P1蛋白基因限制性酶切图谱分型研究
- 2001年
- 目的 :根据肺炎支原体 (MP)P1蛋白基因限制性酶切图谱分类MP临床分离株 ,调查沈阳地区肺炎支原体流行情况。方法 :多聚酶链反应扩增MPFH标准株和MP临床分离株的P1基因片段 ,扩增产物用限制性内切酶HeaIII消化 ,1.5 %琼脂糖凝胶电泳分析。结果 :肺炎支原体临床分离株和FH标准株酶切图谱相同。结论 :沈阳地区肺炎支原体分离株属于Ⅱ型。
- 王桂珍董占双刘中顺李保强
- 关键词：肺炎支原体P1基因
- 环介导等温扩增技术的改进和发展被引量：9
- 2009年
- 环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新兴的快速扩增技术,非常适合于现场检测。自建立以来,其在反应速度、产物检测和引物设计等许多方面又得到了进一步的改进和发展,使其性能更优异,用途更广泛。
- 刘宝山潘树德陈博王桂珍
- 关键词：LAMP引物设计
- 肺炎支原体P1蛋白结构基因片段的制备及C末端基因片段克隆的研究
- 2001年
- 目的 制备肺炎支原体P1蛋白结构基因 ,并在大肠杆菌中克隆肺炎支原体P1蛋白C末端基因片段 ,为P1蛋白基因片段的扩增、表达及探讨C末端基因片段功能打基础。方法 PCR扩增方法获取P1结构基因。扩增产物用P1蛋白基因特异引物扩增鉴定。用SalⅠ和EcoRⅠ双酶酶切消化方法制备P1蛋白C末端基因片段 ,并与pUC19DNA连接 ,转入大肠杆菌JM10 9菌株。用X - gal平板及质粒图谱分析方法筛选重组克隆株 ,再用限制性核酸内切酶酶切图谱分析鉴定。 结果 经PCR扩增MPDNA获得一条 5 .0kbDNA片段 ,用P1基因区特异引物扩增鉴定获得阳性结果。重组质粒限制性内切酶指纹图谱显示出两条带 ,一条为 pUC19载体DNA带 ,另一条是 1kb的插入片段。
- 王桂珍董占双刘忠顺李保强
- 关键词：肺炎支原体基因克隆
- 肺炎支原体感染在BALB/c小鼠肺组织不同时间炎症的变化被引量：6
- 2012年
- 目的了解肺炎支原体感染的不同时期肺组织的病理变化、用PCR的方法检测肺炎支原体出现时间、阳性率的变化情况。方法建立肺炎支原体经呼吸道感染的BALB/c小鼠模型,对感染后3、7、14、21 d的小鼠的肺组织进行病理变化、肺湿重、PCR检测肺炎支原体出现时间的研究。结果肺炎支原体经呼吸道感染的BALB/c小鼠肺组织变大重量增加,肺指数同正常对照组相比,P﹤0.01,差异有统计学意义;呼吸道感染的BALB/c小鼠肺组织在3、7 d时,肺组织的病理变化最明显,14 d炎症减轻,21 d炎症基本消退;用PCR的方法检测支气管肺泡灌洗液肺炎支原体7 d时全部为阳性。结论肺炎肺炎支原体感染BALB/c小鼠模型制作成功,感染后7 d时肺部炎症最明显。
- 张晗尚云晓周潇男何梦博焦旭勇王莉韩晓华王桂珍
- 关键词：肺炎支原体BALB/C小鼠动物模型
- 沈阳地区不同时期分离的淋球菌抗生素敏感性和质粒图谱的研究
- 1995年
- 本文对１９８９年以来６年间在沈阳地区分离鉴定的１９７株淋球菌进行了１４种抗生素的药物敏感性检测。结果显示，不同时期分离的淋球菌对壮观霉素、头孢三嗪、环丙氟哌酸３种药物保持稳定的敏感性。对复方新诺明的敏感性由１９９３年以前的７２．６６％下降到１９９４年的５３．４５％，差异显著。对青霉素等７种抗生素的敏感性百分率均有所提高，差异显著，β－内酰胺酶检测结果及质粒图谱分析表明：不同时期的分离株质粒的携带情况和产青霉素酶的淋球菌（ＰＰＮＧ）阳性百分率无明显差异。
- 王桂珍辛小蜜陈庆学李鲁平张晓明小林芳夫
- 关键词：淋球菌药敏试验质粒图谱
