董占双
- 作品数：19 被引量：35H指数：3
- 供职机构：中国医科大学基础医学院病原生物学教研室更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目辽宁省教委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肺炎支原体P1蛋白结构基因片段的制备及C末端基因片段克隆的研究
- 2001年
- 目的 制备肺炎支原体P1蛋白结构基因 ,并在大肠杆菌中克隆肺炎支原体P1蛋白C末端基因片段 ,为P1蛋白基因片段的扩增、表达及探讨C末端基因片段功能打基础。方法 PCR扩增方法获取P1结构基因。扩增产物用P1蛋白基因特异引物扩增鉴定。用SalⅠ和EcoRⅠ双酶酶切消化方法制备P1蛋白C末端基因片段 ,并与pUC19DNA连接 ,转入大肠杆菌JM10 9菌株。用X - gal平板及质粒图谱分析方法筛选重组克隆株 ,再用限制性核酸内切酶酶切图谱分析鉴定。 结果 经PCR扩增MPDNA获得一条 5 .0kbDNA片段 ,用P1基因区特异引物扩增鉴定获得阳性结果。重组质粒限制性内切酶指纹图谱显示出两条带 ,一条为 pUC19载体DNA带 ,另一条是 1kb的插入片段。
- 王桂珍董占双刘忠顺李保强
- 关键词：肺炎支原体基因克隆
- 肺炎支原体P1重组蛋白的提取纯化及应用研究被引量：6
- 2007年
- 提取纯化肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1重组蛋白,建立酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,协助临床肺炎支原体感染的诊断。以GST融合蛋白层析柱提取、纯化Mp P1重组蛋白做抗原,以全肺炎支原体菌体成分做抗原对照,建立间接ELISA实验方法,检测40份正常献血者血清标本和51份疑似MP感染临床血清标本的IgG抗体。重组蛋白经SDS-PAGE可见诱导表达的样品在分子量大约59 ku处有明显条带,经Western blotting可与肺炎支原体免疫血清发生反应。ELISA实验检测51份临床标本,由P1重组蛋白抗原检测阳性31份,阳性率为60.78%。Mp检测阳性20份,阳性率为39.22%。实验精确度检测阳性混合血清的变异系数(CV值)为5.40%,阴性混合血清变异系数为1.10%。用Mp P1重组蛋白抗原建立的ELISA检测方法,其敏感性高于全肺炎支原体抗原,可用于临床肺炎支原体感染的诊断。
- 宋焕景王桂珍董占双刘忠顺吉兆华周吉海
- 关键词：肺炎支原体重组蛋白
- 甘草酸单铵对体外培养的兔肾传代细胞的影响被引量：3
- 1995年
- 甘草酸单铵对体外培养的兔肾传代细胞的影响刘军，吴一迪，董占双，宋艾芝陈誉华，张福会，苏若萍，宋今丹（基础医学院微生物学教研室）（基础医学院细胞生物学教研室）关键词甘草酸单铵；传代细胞甘草酸单铵（Ｍｏｎｏａｍｍｏｎｉｕｍｇｌｙｃｙｒｈｉｚ－ｉｎａｔｅ，...
- 刘军吴一迪董占双宋艾芝陈誉华张福会苏若萍宋今丹
- 关键词：细胞培养离体培养甘草酸单铵
- 肺炎支原体重组P1蛋白多克隆抗体的制备及纯化被引量：2
- 2011年
- 目的制备肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)重组P1蛋白多克隆抗体,为Mp抗原诊断试剂的制备奠定基础。方法用Mp重组P1蛋白免疫家兔,ELISA法测定免疫血清抗体效价;硫酸铵沉淀及离子交换层析法纯化抗体;紫外分光光度法测定抗体的浓度;SDS-PAGE分析抗体的纯度;量子点标记纯化抗体,分析抗体的免疫活性;直接免疫荧光法检测抗体的特异性。结果重组P1蛋白兔免疫血清抗体效价为1∶25 600;纯化的抗体浓度为3.689μg/μl;SDS-PAGE显示相对分子质量58 000的重链条带;用量子点标记纯化的抗体仍保持较高的免疫活性,与其他呼吸道常见病原菌均未发生特异性结合。结论获得的纯化Mp P1蛋白IgG抗体具有较高的免疫活性和特异性,可用于临床Mp感染的抗原诊断。
- 曾晶晶王舰赵芝娜刘忠顺董占双王桂珍
- 关键词：P1蛋白多克隆抗体
- 枯草杆菌B_(224)菌培养物体外抑菌效果观察
- 1991年
- 为了探讨枯草杆菌BS_(224)菌株的抑菌原理,我们采用了小钢杯法观察BS_(224)菌培养物及其代谢产物对几种常见化脓性细菌的抑菌情况。结果,BS_(224)菌培养物有明显的抑制金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌及大肠杆菌的作用。BS_(224)菌的代谢产物无抑菌作用。说明BS_(224)菌的抑菌作用由其细菌自身引起。
- 鲁润铭李万军董占双张铜郭慕华
- 关键词：枯草杆菌抑菌实验
- 肺炎支原体重组蛋白抗原的初步鉴定
- 2005年
- 克隆并表达肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1黏附蛋白D-2区基因片段,进而对重组蛋白的抗原特异性进行鉴定.应用PCR技术获取目的基因片段,并构建含有目的基因片段的重组质粒,用重组质粒酶切图谱法、PCR扩增及核苷酸测序方法鉴定重组质粒.而后将其转入大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导目的基因表达,用SDS-PAGE分析重组蛋白的相对分子量,免疫印迹实验鉴定其免疫反应性,并用ELISA实验测定重组蛋白抗原的特异性.结果重组质粒中的p1基因片段经测序后,与GenBank中p1基因核苷酸序列比较,其同源性为99.66%～100%;经SDS-PAGE分析,重组蛋白的相对分子量约为 59 ku;免疫印迹实验和ELISA实验证实,Mp免疫血清和Mp感染患者血清都能与重组蛋白发生特异反应.研究中的含P1黏附因子D-2区基因的重组质粒已成功构建,其表达的重组蛋白具有特异的免疫反应性,初步ELISA实验证实,本研究获得的重组蛋白可用于临床标本检测.
- 李保强赵芝娜宋焕景董占双刘忠顺王桂珍
- 关键词：肺炎支原体重组蛋白
- 双酶切法克隆肺炎支原体DNA的研究
- 1993年
- 用PstⅠ、EcoRⅠ两种限制性内切酶切割pUR222质粒DNA.经离心沉淀除去两酶切位点之间的小分子DNA片段,与肺炎支原体DNA重组,转化受体茵。用X-gal平板筛选出236株耐氨苄青霉素呈白色的菌落。经酶切图谱分析及DNA斑点杂交实验确证,这些菌株为含有肺炎支原体DNA片段的重组株。
- 王桂珍鲁润铭姜晶董占双郭慕华
- 关键词：肺炎支原体DNA重组
- 肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段在大肠杆菌中克隆的研究被引量：1
- 2001年
- 在大肠杆菌中克隆肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段 ,为P1蛋白基因片段的扩增、表达及探讨羧基端基因片段功能打基础。采用PCR扩增方法获取P1结构基因。扩增产物用SalI和EcoRI酶切消化 ,回收 1kb大小的DNA片段并与 pUC19DNA连接 ,转入大肠杆菌JM10 9菌株。用X gal平板及质粒图谱分析方法筛选重组克隆株 ,再用限制性核酸内切酶酶切图谱分析鉴定。经PCR扩增MPDNA获得 1条 5 .0kbDNA片段。重组质粒限制性内切酶指纹图谱显示出 2条带 ,1条为pUC19载体DNA带 ,另 1条是 1kb的插入片段。实验获得肺炎支原体P1蛋白结构基因及含P1蛋白羧基端DNA片段的重组克隆株。
- 王桂珍李保强董占双刘忠顺
- 关键词：肺炎支原体基因克隆
- 培养-增强套式PCR检测肺炎支原体感染被引量：1
- 2002年
- 应用培养 增强套式多聚酶链反应 (C ENPCR)检测 44例肺炎支原体感染住院患儿咽拭子标本。在检测的 44份咽拭子标本中 ,肺炎支原体的检测阳性率为 38.6 3%。结果显示 ,C ENPCR检测MP感染敏感性较高 。
- 董占双刘忠顺王佳贺王桂珍
- 关键词：肺炎支原体
- 应用APAAP法检测T淋巴细胞亚群方法的改进
- 1997年
- 应用ＡＰＡＡＰ法检测Ｔ淋巴细胞亚群方法的改进马廷贤梁再赋＊董占双＊（中国医科大学组胚教研室＊微生物教研室沈阳１１０００１）；Ｔ淋巴细胞在维持机体正常免疫功能方面起着重要作用，而Ｔ淋巴细胞亚群间的正常比值又是维持机体正常免疫功能的重要保证，现研究表明［...
- 马廷贤梁再赋董占双
- 关键词：APAAP法T淋巴细胞细胞亚群免疫功能
- 全文增补中
