翁秋萍
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的表达、纯化和复性研究被引量：7
- 2007年
- 报道重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAOase)的研究进展。重组NAOase由大肠杆菌argE基因编码,在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中的表达量为32.5%,大多以无活性的包涵体存在。低温诱导可增大有活性的可溶表达部分的比例。可溶性NAOase经Ni-NTA凝胶亲和纯化后得到SDS-PAGE电泳纯的酶,比酶活为1193.2u/mg蛋白。诱导条件影响整菌蛋白的成分及比例。37℃诱导生成的包涵体经尿素梯度洗涤后纯度较22℃高。低的蛋白浓度和合适的氧化还原体系是影响复性的关键因素。稀释法和透析法皆可使包涵体部分复性。在合适的条件下以稀释法复性时,约有17.78%包涵体可顺利复活。包涵体经尿素洗涤、溶解、Ni-NTA凝胶柱亲和纯化后,获得了高纯度的NAOase。
- 李环陈悦翁秋萍吴明刚韦萍欧阳平凯
- 关键词：包涵体复性
- argE基因的表达优化及Zn^(2+)添加时间和浓度的影响机制分析被引量：1
- 2007年
- 确定了目的基因argE在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中的表达位置,研究了Zn2+对重组菌生长及表达产物活性的影响,并分析了影响机制.结果表明,argE可在重组菌中高效表达,表达产物N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶大多以不可溶的包涵体形式存在,只有少量为有活性的可溶性表达.1.0g/L的Mg2+对重组菌的生长及酶活有明显促进作用.Zn2+加入时机及加入量不同,影响结果也不同.发酵起始加入Zn2+严重抑制菌的生长及酶活,而在1.0%乳糖诱导2.5h后加入则可解除生长抑制并提高酶活.SDS-PAGE电泳及活力测定证实Zn2+参与形成酶的催化中心,对酶的表达量没有影响.
- 李环陈悦翁秋萍朱大伟韦萍
- 关键词：活性表达
- N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶活性位点的构成研究
- 2008年
- 目的:用生物信息学软件预测出N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的活性中心的金属离子结合位点。方法:选用DEPC、WRK、PMSF、NBS、DTNB 5种化学试剂选择性修饰N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶中组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、色氨酸和半胱氨酸;同时考察Co^(2+)、Fe^(3+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、Ni^(2+)、Cu^(2+)等金属离子对酶活性的影响。结果:在DEPC、WRK修饰后,酶的活力明显下降,而PMSF、NBS、DTNB对酶的活力影响不大;说明组氨酸和酸性氨基酸为酶活性中心的必需氨基酸,而丝氨酸残基、色氨酸残基、半胱氨酸残基不参与酶活性中心的组成;Co^(2+)对酶反应有促进作用,验证了生物信息学的预测结果;底物N-乙酰-D,L-蛋氨酸对酶有较好的保护作用,保护作用随浓度增加而增加。结论:本研究为深入研究酶结构与功能的关系提供实验依据,为N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的工业应用提供理论参考。
- 翁秋萍李环陆高圣韦萍
- 关键词：化学修饰活性中心
- N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的生物信息学分析被引量：1
- 2008年
- [目的]对ArgE蛋白的结构和功能进行初步预测。[方法]以在GenBank上查找到的若干微生物N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶基因序列为分析对象,以ArgE(P23908)为研究对象,利用生物信息学在线软件ORF finder、ProtParam和Protscale等对ArgE编码的蛋白N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的二级结构和特殊结构、序列同源性、结构域及功能位点进行了初步预测。[结果]ArgE蛋白是一种酸性可溶性蛋白,理论等电点为5.54,分子量为42 347.3,无信号肽,为非分泌蛋白,有多个磷酸化位点。蛋白中存在α螺旋、β-折叠和无规则卷曲结构,有2个可形成跨膜结构的片段,不存在卷曲螺旋,也无线粒体定位信号。ArgE蛋白与CBPG、DAPE、ACY1、YSCS几种蛋白具有较高的相似性。[结论]该研究可为ArgE蛋白的结构和功能的实验研究提供理论依据。
- 翁秋萍李环韦萍
- 关键词：生物信息学
