陈悦
- 作品数：9 被引量：30H指数：4
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 乳糖对产木聚糖酶基因工程菌1020的诱导作用及碳氮源优化被引量：10
- 2005年
- 研究了国产及进口LB培养基对产嗜热性木聚糖酶基因工程菌1020生长及产酶的影响,并以国产原料为基准,优化了培养基。结果表明,国产的酵母膏及蛋白胨和进口原料相比,缺少某些成分,单纯增加用量不能弥补这种差别;乳糖可以代替昂贵的IPTG起到有效的诱导作用;10g·L-1的乳糖可兼起能源及诱导剂的双重效果,菌的生物量和产酶量达到最佳;发酵8h后补加5g·L-1乳糖,生物量及酶活皆有提高。复合氮源优于单一的无机或有机氮源。优化后的酶活从进口LB培养基的270U～290U提高到1700U～1800U。
- 李环陈悦朱孝霖韦萍欧阳平凯
- 关键词：乳糖
- L-鸟氨酸的混合菌种发酵研究被引量：5
- 2006年
- 谷氨酸棒杆菌可发酵葡萄糖产L-鸟氨酸。通过连续筛选与驯化筛选到了产量较高的生产菌株CG1006。以GC/MS对发酵液成分的定性分析及鸟氨酸的产量为依据,优化了培养条件,产量从最初的14.346g/L提高到40.416g/L。初步考察了酵母菌CG1006-1对发酵液成分及产量的影响。结果表明混合菌种发酵可纯化发酵液成分。
- 李环周磊陈悦韦萍欧阳平凯
- 关键词：L-鸟氨酸发酵纯化
- 基因工程菌1020的培养优化及木聚糖酶部分特性研究被引量：1
- 2006年
- 对基因工程菌1020培养基成分及培养条件进行了优化。结果表明,Mg2+、Mn2+、Zn2+三种金属离子可促进发酵产木聚糖酶。180 r.m in-1的摇床转速可满足70 mL/500 mL装液量的溶氧需求。最适培养温度为30℃,pH值为7.0。优化后的酶活为优化前的2.09倍。全细胞木聚糖酶的酶学性质表明该酶有两个最适pH值,分别为7.0与9.0。金属离子Ca2+,Fe3+,Fe2+对酶活有促进作用。pH7.0时Km为36.7095 mmol.L-1,Vm为0.3829 mmol.L-1.m in-1;pH9.0时Km29.9945mmol.L-1,Vm 0.2165 mmol.L-1.m in-1。
- 李环金晶陈悦韦萍
- 关键词：基因工程菌木聚糖酶酶学性质
- 金属离子对重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶可溶部分酶活力的影响被引量：3
- 2007年
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶可在重组菌BL21-pET22b-argE中高效表达,大多以不可溶的包涵体形式存在。文中研究了金属离子浓度及添加时间对该菌生长及可溶表达部分酶活力的影响。结果表明,1.0g/L的Mg2+对生物量和酶活有明显促进作用。Co2+的浓度及添加时间不同,对菌的生长及酶活力的影响结果也不同。培养起始加入Co2+会抑制菌的生长及酶活,而在1.0%乳糖诱导2.5h后加入则可解除生长抑制并促进酶活。Ni2+,Cu2+会抑制菌体的生长及酶活。Mn2+、Mo2+和B3+不影响菌的生长,对酶活有促进作用。添加金属离子后,酶活从16.90U/mL提高到251.91U/mL。
- 李环陈悦王娟韦萍欧阳平凯
- 关键词：金属离子
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的表达条件优化
- 2008年
- N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶(N-acetylornithine deacetylase,NAOase)为新型氨基酸拆分酶,可在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中胞内诱导表达。为降低生产成本并提高酶活,优化了培养基成分及诱导条件。结果表明,进口的蛋白胨和酵母膏明显优于国产原料。5.0g/L的乳糖可以代替昂贵的IPTG(isopropy1β-D-1-Thiogalacto pyranoside,异丙基β-D硫代半乳糖苷)起到有效的诱导效果。最佳碳源为1.0g/L甘油,氮源为15.0ml/L玉米浆和5.0g/L蛋白胨。NAOase大多以不可溶的包涵体形式表达,少量为可溶的活性表达。降低诱导温度可增大活性表达的比例,而整菌表达量也随之降低。22℃诱导10h为活性表达的最适条件,生物量为6.91,酶活为392.65U/ml,分别为优化前的1.65倍和5.72倍。
- 李环朱大伟陈悦任真韦萍
- 关键词：包涵体
- 产乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶基因工程菌的构建及遗传稳定性研究被引量：7
- 2008年
- 利用质粒pET22b(+)为表达载体,成功构建了产N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶基因工程菌BL21-pET22b(+)-argE,并考察了重组质粒的稳定性。双酶切鉴定了质粒构建正确,SDS-PAGE电泳证实了该菌可高效表达目的蛋白。连续传代50次实验表明重组质粒具有结构稳定性。无选择压力连续传代时,质粒丢失严重;有选择压力时连续传代未发生质粒丢失现象,具有较好的分离稳定性。发酵过程中,用羧苄青霉素代替氨苄青霉素,质粒稳定率由77.78%提高到86.42%。羧苄青霉素浓度为200μg/mL时,质粒稳定率提高到98.33%。
- 陈悦李环韦萍
- 关键词：基因工程菌重组质粒
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的高效表达与纯化被引量：3
- 2006年
- 利用质粒pET-22b（＋）为表达载体，成功构建了高效表达N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的基因工程菌BL21-pET-22b（＋）-argE。研究了该菌的最适超声破壁条件及硫酸铵分级沉淀的最适范围，并以金属螯合亲和层析法纯化含有6-His-Tag的目的蛋白。结果表明：26℃诱导表达的菌体，最佳超声破碎条件为功率200W，超声时间为15min；目的蛋白主要存在于40％-50％硫酸铵沉淀中。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白，可以达到SDS-PAGE电泳纯，并显示单亚基相对分子质量为43000。纯化倍数为139倍，回收率为11．1％。
- 陈悦李环姚忠韦萍
- 关键词：基因工程菌纯化
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的表达、纯化和复性研究被引量：7
- 2007年
- 报道重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAOase)的研究进展。重组NAOase由大肠杆菌argE基因编码,在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中的表达量为32.5%,大多以无活性的包涵体存在。低温诱导可增大有活性的可溶表达部分的比例。可溶性NAOase经Ni-NTA凝胶亲和纯化后得到SDS-PAGE电泳纯的酶,比酶活为1193.2u/mg蛋白。诱导条件影响整菌蛋白的成分及比例。37℃诱导生成的包涵体经尿素梯度洗涤后纯度较22℃高。低的蛋白浓度和合适的氧化还原体系是影响复性的关键因素。稀释法和透析法皆可使包涵体部分复性。在合适的条件下以稀释法复性时,约有17.78%包涵体可顺利复活。包涵体经尿素洗涤、溶解、Ni-NTA凝胶柱亲和纯化后,获得了高纯度的NAOase。
- 李环陈悦翁秋萍吴明刚韦萍欧阳平凯
- 关键词：包涵体复性
- argE基因的表达优化及Zn^(2+)添加时间和浓度的影响机制分析被引量：1
- 2007年
- 确定了目的基因argE在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中的表达位置,研究了Zn2+对重组菌生长及表达产物活性的影响,并分析了影响机制.结果表明,argE可在重组菌中高效表达,表达产物N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶大多以不可溶的包涵体形式存在,只有少量为有活性的可溶性表达.1.0g/L的Mg2+对重组菌的生长及酶活有明显促进作用.Zn2+加入时机及加入量不同,影响结果也不同.发酵起始加入Zn2+严重抑制菌的生长及酶活,而在1.0%乳糖诱导2.5h后加入则可解除生长抑制并提高酶活.SDS-PAGE电泳及活力测定证实Zn2+参与形成酶的催化中心,对酶的表达量没有影响.
- 李环陈悦翁秋萍朱大伟韦萍
- 关键词：活性表达
