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郭刚: 作品数：151 被引量：551H指数：13; 供职机构：天津医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学农业科学更多>>

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胰岛β细胞自身抗体IA-2Ab的ELISA方法建立——附110例正常人测定值: 2006年; 目的以本实验室研制的重组人自身抗原IA-2作为抗原,建立血清中抗IA-2的自身抗体的ELISA测定方法,并对正常人群进行检测。方法在间接ELISA法建立过程中对封闭剂、血清稀释度及二抗稀释度及其他测试条件进行了选择,方法建立之后,对110名正常人血清中的IgG型抗IA-2抗体进行了检测,用国外已成型的试剂盒进行了对照性实验,并进行统计学分析。结果确立了血清中抗IA-2自身抗体的间接ELISA法,以本方法对110例正常人血清中抗IA-2自身抗体进行检测的平均滴度为0·31±20·07,与用进口试剂盒进行检测的结果进行配对t检验,无显著性差异。结论建立了血清中抗IA-2自身抗体的检测方法及正常值为糖尿病的初筛、早期诊断的开展,做了准备。; 张瑞郭刚梁东春张镜宇; 关键词：ELISA

温敏壳聚糖－接枝－NIPAAm/VL共聚物转基因载体的制备: 本发明公开了一种温敏壳聚糖－接枝－异丙基丙烯酰胺/月桂酸乙烯酯共聚物转基因载体的制备方法。该方法过程：以异丙基丙烯酰胺与月桂酸乙烯酯共聚合成温敏性共聚物，将分子量1000－7000，脱乙酰度80－95％的壳聚糖与共聚物偶...; 刘文广孙书军程男姚康德梁东春左爱军郭刚张镜宇; 文献传递

适用于PCR检测的发根DNA提取法被引量：3: 2003年; 目的为适应在组织、细胞、血液等标本无法获取或现场只留下毛发的情况下进行基因组检查，本文研究了自发根提取DNA的方法。方法试验了三种提取方法，即Tris—钾镁盐液(TKM)法、细胞裂解法及最简单的水煮沸法。结果三种方法所得的DNA产量不同，但经模板活性鉴定，均适用于PCR检查。结论在其它样品取材受限时，毛发可作为另一类标本进行基因组DNA的分析。; 吴伊丽李华郭刚张镜宇; 关键词：PCR 发根

不同碘营养水平对大鼠肝脏组织中Ⅰ型5’脱碘酶的影响被引量：1: 2007年; 目的研究不同碘营养水平对大鼠肝脏组织中Ⅰ型5’脱碘酶（DI）表达及活性的影响。方法正常2月龄Wistar大鼠根据碘摄入量不同分为6个组：低碘（LI）组、适碘（NI）组、5、10、50、100倍高碘（5HI、10HI、50HI、100HI）组，分别于饲养3、6、12个月时处死。放免法测定血清甲状腺激素水平；提取肝组织总RNA，以β-actin为内对照，半定量RT-PCR分析DI基因的表达水平：改进的Chopra法测定肝组织匀浆液中DI活性。结果与NI组相比，因碘供给量及给予时间的不同，100HI组及LI组大鼠血清甲状腺激素水平有不同程度的降低．而50HI组则无明显变化。肝DI基因表达水平，LI组随低碘持续时间的不同有所波动，各HI组则与NI组无显著差别。肝DI活性：3个月时与碘供给量成反比；饲养6、12个月时LI组则显著低于NI组（P〈0．05），各高碘组与NI组相比较，差异没有统计学意义（P〉0．05）。结论在碘缺乏早期，大鼠出现以低L为主要表现的甲状腺功能低下症（甲低），并导致DI活性和DI基因表达水平代偿性上调，以维持足够的T3水平来避免周围组织出现器官性甲低；长期碘缺乏后，动物表现为失代偿性的甲低和肝DI活性及DI基因表达水平的降低。机体对碘过量有一定的耐受阈值，若碘摄入量为正常量的50倍以内，甲状腺功能可保持正常，当超过50倍时，甲状腺功能出现失代偿。长期（12月）高碘状态下．机体又会出现对高碘的耐受，而表现为甲状腺功能逐渐恢复正常．肝DI的活性和基因表达水平也趋于正常。; 左爱军梁东春刘颖赵学勤郭刚阎玉芹陈祖培; 关键词：碘脱碘酶甲状腺激素类基因表达

大鼠bFGF基因荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5: 2008年; 目的建立用荧光定量PCR方法检测大鼠bFGF基因mRNA水平。方法以Trizol一步法提取新鲜骨组织总RNA，以Oligo（dt）18为引物逆转录产生cDNA并进行扩增，以T-A克隆法将纯化的目的片断与PGEM—T Easy载体连接成重组质粒并转化E．coli DH5α。采用碱裂解法提取重组质粒，经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量，并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果由PGEM-T Easy—bFGF所构建的标准曲线线性关系良好（反应体系中含1×10^2～1×10^7拷贝大鼠bFGF基因分子时，扩增反应α值与拷贝数的对数成线性关系）、灵敏度高、特异性强、准确可靠。批内和批间重复性测定的变异系数分别为1．03％～4、59％以及2．24％～6．46％。结论成功建立了用实时荧光定量PCR检测大鼠bFGF基因表达量的方法。; 舒剑波张瑞董茵郭刚; 关键词：碱性成纤维生长因子 SYBR 实时荧光定量PCR

甲状腺激素受体βΔ的P-box氨基酸序列与转录激活作用关系的研究: 2017年; 研究新发现的甲状腺激素受体(TR)TRβΔ的P-box氨基酸序列能否结合甲状腺激素反应元件(TRE)后增强靶基因转录,揭示P-box序列的保守性与TRβΔ转录激活作用的关系,验证TRβΔ的功能性和活性。构建pcDNA3.1-TRβΔ真核表达载体质粒和含有回文序列TRE的pGL3-Promoter/TRE报告基因载体。突变TRβΔ的P-box氨基酸序列对应的DNA序列,分别构建pcDNA3.1-TRβΔmut1、pcDNA3.1-TRβΔmut2突变质粒。以上质粒分组瞬时共转染至COS-7细胞中,分别用含有T3和不含T3的培养基处理后,检测各组荧光素酶的活性。以上载体经PCR、双酶切和质粒测序证实均构建成功。与TRβ1相比,TRβΔ的P-box序列仅在最后一位不同,但基本保证了完整性。在加入T3后,TRβΔ正常与TRE结合,激活报告基因表达,荧光素酶活性显著增加(P<0.01)。将P-box序列突变为与TRβ1一致的pcDNA3.1-TRβΔmut1,在T3调节下也能显著提高荧光素酶的表达(P<0.01)。但完全破坏P-box序列的pcDNA3.1-TRβΔmut2与TRβΔ相比,其荧光素酶的表达显著降低(P<0.01)。结果证明,TRβΔ只有通过完整保守的P-box氨基酸序列,在T3的调节下才能与TRE正常结合,产生转录激活作用。TRβΔ是有转录因子性质的功能性TR。; 谢伟赵荣兰左爱军梁东春孙蓓郭刚张镜宇; 关键词：转录激活

重组人甲状旁腺素相关蛋白PTHrP1-86对骨质疏松大鼠治疗作用的实验研究被引量：2: 2008年; 目的探讨重组人甲状旁腺素相关蛋白PTHrP1-86对骨质疏松大鼠的骨同化作用。方法用摘除大鼠双侧卵巢的方式制备骨质疏松模型(OVX),去势手术16周后,测定大鼠腰椎骨密度,确认动物模型造模成功。实验动物分为8个组,给药后测定骨密度、骨钙素、骨形态计量学、骨生物力学等指标,初步评价重组人甲状旁腺素相关蛋白PTHrP1-86对骨质疏松大鼠的骨同化作用。结果重组人甲状旁腺素相关蛋白PTHrP1-86可使骨转换加快,促进新骨生成,使骨的力学性能提高,抗弯曲强度提高,抗变形能力增强,韧性增高,脆性降低,不易发生断裂。结论PTHrP1-86能有效提高骨的抗骨折能力,对治疗和预防骨质疏松有一定疗效。同时证明该动物实验方法行之有效,可以很好地测定PTHrP对骨质疏松的治疗作用,并可以此为依据开始一期临床实验。; 郭刚刘新宇梁东春张瑞张镜宇; 关键词：骨形态计量学骨生物力学

一种基于聚合酶链反应高效构建T载体的方法: 本发明公开了一种基于PCR法高效构建T载体的方法，主要是将含有特定限制酶位点的一对寡核苷酸片段引入出发载体(如pUC18)中，此限制酶位点的特点是其相应酶(如EcoRV)能产生平末端，且切点前后碱基分别是T和A。继而用该...; 李晓霞王宝利郭刚张镜宇钟启平訾自强张瑞; 文献传递

老年2型糖尿病患者糖化血红蛋白水平与血糖及胰岛素敏感性的关系被引量：23: 2017年; 目的探讨老年2型糖尿病(T2DM)患者糖化血红蛋白(Hb A1c)水平与血糖及胰岛素敏感性的关系。方法 150例老年T2DM患者根据Hb A1c水平不同分为Ⅰ组(4.0%~7.0%)41例、Ⅱ组(7.1%~8.0%)35例、Ⅲ组(8.1%~9.0%)39例及Ⅳ组(9.1%~10.0%)35例,同时随机从该院体检中心选择同期健康者40例作为对照组;所有受试者均进行馒头餐糖耐量试验与胰岛素释放试验,检测各组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、Hb A1c、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h FPG)、空腹胰岛素(FIns)、餐后2 h胰岛素(2 h FIns),并用稳态模型(Homa Model)公式评估胰岛素细胞功能指数(HOMA-β)与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用胰岛素敏感指数(ISI)评估胰岛素敏感性;通过Spearman相关分析Hb A1c水平与上述指标的相关性。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组的Hb A1c水平均显著高于对照组,且Hb A1c水平越高,对应的病程越长,Ⅲ、Ⅳ组病程显著长于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05),差异均有统计学意义;Ⅲ、Ⅳ组的TG水平显著高于Ⅰ、Ⅱ组,TC、TG水平显著高于对照组(P<0.05),差异均有统计学意义。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组FPG、2 h FPG、FIns及HOMA-IR显著高于对照组,HOMA-β与ISI显著低于对照组(P<0.05),差异均有统计学意义;Ⅰ组2 h FIns水平显著高于对照组,而Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅲ、Ⅳ组的FPG、2 h FPG、FIns显著高于Ⅰ、Ⅱ组,2 h FIns、HOMA-β与ISI显著低于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05),差异均有统计学意义,而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组HOMA-IR差异无统计学意义。相关性分析显示,T2DM患者的Hb A1c水平与FPG、2 h FPG呈显著正相关(r=0.674、0.766,P<0.05),与FIns、HOMA-β及ISI呈显著负相关(r=-0.571、-0.430、-0.513,P<0.05)。结论老年T2DM患者的Hb A1c水平与血糖及胰岛素敏感性存在密切关系,Hb A1c水平越高,血糖越高,而胰岛素敏感性越低,胰岛β细胞分泌能力越弱。; 张斌郭刚汪蓓蕾张欣张瑞; 关键词：糖化血红蛋白胰岛素

胰岛素样生长因子1(IGF-1)mRNA同源模板竞争性PCR定量方法的建立被引量：3: 2003年; 胰岛素样生长因子 1(IGF 1)是一种多功能的细胞增殖调控因子 ,其表达水平受多种因素的影响 ,为了研究IGF 1基因在转录水平上的调控机制 ,建立了定量测定IGF 1mRNA的竞争性PCR方法 .同时 ,也建立了一种简便的制备同源性竞争模板的方法 .以构建好的重组pUC IGF 1质粒为基础 ,利用IGF 1mRNA序列上唯一存在 ,但是在pUC18质粒上多拷贝的MspⅠ酶切位点 ,以该限制性内切酶处理重组pUC IGF 1质粒 .在T4DNA连接酶作用下对酶切产物进行随机连接 ,以连接产物作为模板 ,用可扩增IGF 1cDNA的引物进行PCR ,由此得到因含有随机插入序列而与原IGF 1cDNA产生明显长度差别的重组IGF 1.以不同浓度的该DNA片段作为同源竞争模板与大鼠肝组织cDNA在同一反应体系中进行PCR ,对PCR产物进行分析 ,计算出样本中IGF 1cDNA的初始浓度 .成功地建立了IGF 1mRNA的竞争性PCR定量检测方法 ,为研究IGF 1基因的表达调控奠定了基础。; 梁东春郭刚郭若霖张镜宇; 关键词：胰岛素样生长因子1 MRNA

郭刚

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