马帅
- 作品数：14 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 日本血吸虫重组抗原及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种日本血吸虫重组抗原，该重组抗原包含：日本血吸虫磷酸甘油酸激酶的SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。本发明还公开了该日本血吸虫重组抗原的制备方法及其在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗或药物中的应用。本发明的日...
- 林矫矫黄莉妮洪炀傅志强张旻韩艳辉王馨茁李长健曹晓丹伍妙梨郭小勇韩倩刘艳涛马帅
- 文献传递
- 日本血吸虫钙调神经磷酸酶B基因的克隆表达及表达产物的免疫保护效果的评估被引量：1
- 2014年
- 为掌握日本血吸虫钙调神经磷酸酶B亚基(CNB)特性并评估其作为候选疫苗分子的潜力,采用PCR方法扩增日本血吸虫CNB基因,构建重组质粒pET-28a(+)-CNB,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用His-Bind亲和层析纯化获得重组蛋白rCNB。Western-blot结果显示,rCNB能被该重组蛋白免疫小鼠血清识别,具有较好的免疫原性。免疫组织化学分析表明,CNB主要分布在日本血吸虫虫体的睾丸、卵巢等生殖器官中,在表膜中也有少量分布。用重组蛋白rCNB结合ISA206佐剂免疫BALB/c小鼠,结果 rCNB诱导小鼠产生了27.93%(P<0.05)的减虫率和42.93%(P<0.01)的肝减卵率。结果表明,日本血吸虫CNB具有一定的免疫保护效果,为深入研究日本血吸虫钙调神经磷酸酶的生物学功能奠定了基础。
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- 关键词：日本血吸虫免疫保护
- 日本血吸虫重组蛋白及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种日本血吸虫重组蛋白，该重组蛋白是由含日本血吸虫Vamp2基因的重组载体经表达而制得。本发明还公开了该日本血吸虫重组蛋白作为日本血吸虫诊断抗原的应用，以及该重组蛋白在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗或药物中的应...
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- 日本血吸虫四跨膜孤儿受体(TOR)克隆及其第一个膜外区基因的表达被引量：3
- 2014年
- 埃及血吸虫和曼氏血吸虫四跨膜孤儿受体(trispanning orphan receptors,TOR)受体可以结合补体C2a,可能在血吸虫免疫逃避过程中起重要作用。为研究日本血吸虫TOR受体的特性和功能,利用PCR扩增到Sj TOR基因并进行了生物信息学分析;同时克隆了Sj TOR基因N端第一个膜外区(ed1)基因,构建了重组质粒p ET-28a-Sj TOR-ed1,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达后用组蛋白亲和层析纯化获得重组蛋白Sj TOR-ed1,Western blot结果显示r Sj TOR-ed1能被日本血吸虫阳性小鼠血清识别。该研究为进一步开展研究日本血吸虫TOR受体的功能提供了基础。
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- 关键词：日本血吸虫BLOT
- 日本血吸虫促凋亡基因SjBAD的初步研究被引量：1
- 2015年
- 目的了解日本血吸虫促凋亡基因Sj BAD的生物学、免疫学和转录表达特征,评估Sj BAD重组蛋白作为日本血吸虫病疫苗候选分子的潜力。方法根据Sj BAD的参考序列设计引物,应用PCR技术扩增Sj BAD基因,构建重组表达质粒p ET-28a(+)-Sj BAD。采用实时定量PCR检测Sj BAD基因在日本血吸虫不同发育期及42 d雌、雄虫体内的转录水平;应用Western blotting和间接ELISA法分析Sj BAD重组蛋白的抗原性和免疫原性。用重组抗原Sj BAD免疫BALB/c小鼠,通过计算减虫率及肝脏减卵率,评估重组抗原作为血吸虫病候选疫苗分子的潜力。结果成功克隆了日本血吸虫Sj BAD基因,构建了重组表达质粒p ET-28a(+)-Sj BAD,并在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白分子量约为22 k Da。Western blotting表明Sj BAD具有较好的抗原性和免疫原性,间接ELISA法检测表明重组蛋白免疫小鼠产生了高水平的特异性抗体Ig G。实时定量PCR检测发现Sj BAD基因在日本血吸虫的各个发育阶段均有转录,以14 d表达量最高,且在雄虫体内的表达量高于雌虫。两次动物免疫试验表明,重组蛋白Sj BAD在BALB/c小鼠体内诱导了30.82%和27.87%的减虫率,及42.52%和45.84%的肝脏虫卵减少率,均显著高于PBS对照组(P均<0.05)。结论成功克隆、表达了日本血吸虫促凋亡相关基因Sj BAD,该基因在日本血吸虫不同发育期虫体内均有表达。纯化的重组Sj BAD蛋白在小鼠体内能诱导产生部分抗血吸虫感染的免疫保护效果。
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- 关键词：日本血吸虫细胞凋亡BAD
- 日本血吸虫TOR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
- 2017年
- 本研究扩增到日本血吸虫Sj TOR完整的蛋白编码区并将其克隆到p XJ40-FLAG载体的HindⅢ、XhoⅠ酶切位点,构建真核表达质粒p XJ40-FLAG-TOR。将测序正确的质粒转染到293T细胞中进行表达,然后应用间接免疫荧光、实时荧光定量PCR、Western blot检测其在293T细胞中的表达情况。测序结果表明Sj TOR蛋白编码区为1245 bp,真核表达质粒p XJ40-FLAG-TOR构建成功。转染293T细胞48 h后,应用间接免疫荧光染色可观察到转染重组质粒的细胞有特异性绿色荧光,空质粒对照则未见。实时荧光定量PCR结果显示,在转染质粒p XJ40-FLAG-TOR 6 h后Sj TOR蛋白的基因已有转录,至转染24 h时转录水平最高,随后开始降低。Western blot结果显示Sj TOR蛋白分子量约53 k Da,可被FLAG单抗和抗Sj TOR-ED1抗血清识别。结果表明Sj TOR蛋白可以在293 T细胞中表达,为进一步研究Sj TOR蛋白的生物学功能和DNA疫苗打下了基础。
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- 关键词：日本血吸虫基因克隆真核表达
- 日本血吸虫凋亡诱导因子SjAIF功能区片段的克隆及表达分析
- 2015年
- 目的克隆表达日本血吸虫凋亡诱导因子(SjAIF)功能区片段,并对其生物学特性进行初步分析。方法应用PCR技术扩增日本血吸虫凋亡诱导因子的功能区片段,构建原核重组表达质粒并诱导其表达,实时定量PCR分析其在不同发育时期童虫和成虫的转录水平,通过Western-blot和间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性和免疫原性,应用免疫组化分析该蛋白在虫体内的分布情况。结果克隆了SjAIF功能区片段,大小为831bp。成功构建了原核重组表达质粒pET-28a(+)-SjAIF,并在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白分子量35kD。实时定量PCR分析表明SjAIF基因在童虫和成虫的各个发育阶段均有转录,其中7d^21d虫体表达量较低,42d和28d虫体表达量较高,雌虫表达量高于雄虫。重组蛋白具有较好的抗原性和免疫原性,免疫小鼠后诱导产生了较高水平的特异性IgG抗体。该蛋白主要存在于日本血吸虫体被,少部分分布于实质组织中。结论成功表达了SjAIF基因的功能区片段,对其生物学特性进行了初步分析,为进一步研究该基因生物学功能和作用提供了基础。
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- 关键词：日本血吸虫细胞凋亡凋亡诱导因子
- 日本血吸虫重组抗原及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种日本血吸虫重组抗原，该重组抗原是由含日本血吸虫四跨膜孤儿受体N端第一个膜外区基因的重组载体经表达而制得。本发明还公开了该日本血吸虫重组抗原的制备方法及其在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗或药物中的应用。本发明...
- 傅志强马帅洪炀林矫矫伍妙梨陆珂李浩朱传刚韩艳辉贾秉光曹晓丹韩倩宰金丽
- 文献传递
- 日本血吸虫TOR基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
- 为了全面评估日本血吸虫Sj TOR蛋白的生物学功能,利用PCR扩增得到其完整的蛋白编码区,利用HindⅢ、XhoⅠ酶切位点克隆到真核表达载体中构建真核表达质粒pX J40-FLAG-TOR。然后将该质粒pX J40-FL...
- 宰金丽马帅王涛贾秉光柴淑梅张倩傅志强
- 关键词：日本血吸虫TOR基因克隆真核表达载体
- 文献传递
- 日本血吸虫重组蛋白及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种日本血吸虫重组蛋白，该重组蛋白是由含日本血吸虫C1qBP基因的重组载体经表达而制得。本发明还公开了该日本血吸虫重组蛋白rSjC1qBP的制备方法及其在制备治疗血吸虫病的药物中的应用。本发明的日本血吸虫重组...
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