韩珑
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
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- 白细胞介素22对人表皮角质形成细胞CC趋化因子配体27表达的影响被引量：5
- 2018年
- 目的 研究白细胞介素22（IL-22）对人表皮角质形成细胞CC趋化因子配体27（CCL27）表达的影响及机制。方法 免疫组化法检测10例银屑病患者皮损及5例健康对照组皮肤中CCL27的表达。培养HaCaT细胞，分为8组：对照组用PBS处理，IL-22处理组分别用12.5、25、50、100、200 μg/L IL-22处理，信号通路阻断组先分别加入50 μmol/L AG490（JAK2/STAT3通路抑制剂）或PD98059（MAPK-ERK1/2通路抑制剂）阻断处理，2 h后各加入50 μg/L IL-22，继续于37 ℃、5% CO2孵箱中培养。孵育24 h 后，分别提取 HaCaT 细胞总蛋白并收集上清液，Western印迹、ELISA法分别检测CCL27表达。结果 免疫组化检测示，银屑病患者皮损中CCL27的表达水平明显高于正常人皮肤。Western 印迹显示，HaCaT细胞分别用12.5、25、50、100、200 μg/L IL-22处理后，CCL27相对表达量逐渐升高至0.491 ± 0.013、0.620 ± 0.019、0.623 ± 0.014、0.802 ± 0.052、1.138 ± 0.013，均较对照组（0.413 ± 0.013）升高（P＜0.01）；IL-22 ＋ AG490组及IL-22 ＋ PD98059组CCL27表达量分别为0.411 ± 0.019和0.280 ± 0.012，均低于50 μg/L IL-22组（均P＜0.01）。ELISA法检测显示，各组HaCaT细胞CCL27分泌水平变化趋势与Western印迹法检测结果一致。结论 IL-22可促进HaCaT 细胞CCL27表达，其机制可能与MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3通路有关。
- 周文娇任杰韩珑刘欣欣汤坤龙罗素菊
- 关键词：角蛋白细胞JANUS激酶2白细胞介素22
- 双酶联合消化法培养人皮肤成纤维细胞被引量：5
- 2019年
- 目的建立一种便捷、高效的人皮肤成纤维细胞体外培养技术,获得大量高纯度原代细胞。方法取健康成年男性包皮标本,去除皮下组织,将皮肤剪成小皮片,以0.25%的胰蛋白酶溶液4 ℃消化过夜后分离去除表皮;将真皮组织剪碎,加入0.1%胶原酶Ⅱ溶液后于37 ℃ CO2孵育箱中消化3~4 h,筛网过滤,收集滤液后离心、培养。绘制细胞生长曲线,HE染色观察细胞形态,细胞免疫荧光、Western blot检测Vimentin鉴定成纤维细胞,取第3代、第6代细胞以流式细胞术检测细胞纯度。结果获得原代人皮肤成纤维细胞;细胞生长周期:0~2 d为潜伏期,2~5 d为指数生长期,之后进入平台期;细胞为梭形或星形;Vimentin表达呈阳性,鉴定为成纤维细胞;第3代、第6代成纤维细胞纯度分别为95.82%、99.51%。结论利用双酶联合消化法成功培养高纯度原代人皮肤成纤维细胞,为进一步研究奠定基础。
- 孔杰刘原君范丽云齐蔓莉王敬韩珑刘全忠
- 关键词：皮肤成纤维细胞原代培养酶消化法
- 运用穿梭质粒在小鼠沙眼衣原体中表达外源性基因
- 2015年
- 目的在能够转化小鼠沙眼衣原体的穿梭质粒pGFP：：CM中加入新的开放读码框，为研究衣原体单个蛋白功能奠定基础。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增质粒pGFP：：CM和新的开放读码框（包括质粒蛋白pgp4的启动子、红色荧光蛋白mCherry基因和沙眼衣原体CT579的转录终止序列），将连接产物转化至大肠埃希菌感受态Stellar中，提取质粒进行PCR、酶切和测序鉴定。将重组质粒利用氯化钙法转化至无质粒的CMUT3中，荧光显微镜下观察并挑选带有荧光的转化衣原体包涵体，经过氨苄西林筛选和噬菌斑纯化后，采用间接免疫荧光染色法检测转化株CMUT3-pGFP·mCherry-CM中pgp3和glgA蛋白的表达。结果经PCR、酶切和测序鉴定后得到正确序列的重组质粒，转化CMUT3后可见含有绿色和红色荧光的衣原体包涵体。氨苄西林筛选和噬菌斑实验纯化后得到新的转化株CMUT3-pGFP-mCherry-CM。免疫荧光证实pgp3和glgA蛋白在衣原体CMUT3-pGFP-mCherry-CM和CMUT3-pGFP：：CM中表达相似。结论在质粒pGFP：：CM中成功加入开放读码框，转化衣原体后能够表达外源性基因，使衣原体转化技术能够用于衣原体蛋白质功能研究，为临床沙眼衣原体感染的防治提供新的线索。
- 刘原君孙毅娜马璟玥孔杰韩珑刘全忠
- 关键词：衣原体开放读码框基因表达
- 白细胞介素22对HaCaT细胞CCL28表达的影响被引量：1
- 2020年
- 目的探讨白细胞介素(IL-22)对HaCaT细胞黏膜相关上皮趋化因子(CCL28)表达的影响。方法培养HaCaT细胞,将其分为6组:4个IL-22组(分别用12.5、25、50、100μg/L的IL-22进行干预处理);阻断剂组(50μmol/L PD98059阻断干预,2 h后加入50μg/L IL-22);对照组(用PBS处理)。24 h后,用CCK-8检测细胞的增殖;用实时荧光定量RT-PCR检测CCL28 mRNA的水平变化;用蛋白免疫印迹法、酶联免疫吸附法和免疫荧光检测CCL28蛋白水平的变化。结果CCK-8检测显示,上述浓度的IL-22作用于HaCaT细胞24 h后,对细胞的增殖有明显的促进作用,且这种促进作用能被PD98059抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量RT-PCR检测显示,上述浓度的IL-22作用于HaCaT细胞,细胞中CCL28 mRNA逐渐升高,均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01);通路阻断剂组较50μg/L IL-22组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。用蛋白免疫印迹法和酶联免疫法检测到CCL28蛋白水平变化的趋势与实时荧光定量RT-PCR检测到的CCL28 mRNA的水平变化的趋势一致,且差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光检测显示,HaCaT细胞内CCL28蛋白主要表达在细胞质。结论IL-22可剂量依赖促进HaCaT细胞增殖和CCL28的表达,其可能通过MAPK-ERK1/2通路作用。
- 熊传茜周文娇王惠平韩珑樊雁飞刘原君刘全忠罗素菊
- 关键词：银屑病丝裂原激活蛋白激酶类HACAT细胞
- D型沙眼衣原体多形外膜蛋白I的分段克隆表达及其免疫原性分析被引量：3
- 2016年
- 目的获得D型沙眼衣原体多形外膜蛋白（Pmp）I的全长（PmpI—FL）和羧基端蛋白（PmpI—C），并鉴定蛋白免疫原性。方法用PCR扩增目的基因PmpI—FL和PmpI—C，分别将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中，连接产物转化人大肠埃希菌DH5a，提取质粒进行酶切、PCR、测序鉴定。再将重组质粒分别转化人大肠埃希菌BL21并诱导表达，考马斯亮蓝染色和免疫印迹鉴定目的蛋白，谷胱甘肽巯基转移酶（GST）磁珠分别纯化PmpI—FL—GST融合蛋白和PmpI-C-GST融合蛋白。用纯化后的蛋白分别免疫BALB／c小鼠，ELISA测定抗体效价。结果克隆目的基因PmpI—FL和PmpI—C的长度分别为2659和1195bp，序列均与基因库中一致，考马斯亮蓝染色和免疫印迹显示目的蛋白相对分子质量分别约为122000和69000；并得到纯化的蛋白。免疫小鼠所得血清经ELISA检测多克隆抗体效价达1：12800（抗PmpI-FL）和1：6400（抗PmpI-C）。结论成功表达具有强免疫原性的PmpI-FL-GST和PmpI-C—GST两种融合蛋白，为进一步研究其功能奠定基础。
- 盛彩虹孙毅娜孔杰马绿玥齐蔓莉韩珑那德木刘全忠刘原君
- 关键词：免疫原性
- 衣原体分泌蛋白pgp3的分泌受到质粒蛋白pgp4的调控
- 目的 衣原体质粒编码蛋白pgp3是目前已知的最重要的衣原体分泌蛋白之一，然而pgp3蛋白的分泌机制目前仍不是很清楚.本研究通过构建高表达pgp3而没有表达pgp4的新突变衣原体，研究pgp3的分泌是否受到pgp4的调控....
- 孙毅娜张颖孔杰马璟玥韩珑刘全忠刘原君
- 关键词：衣原体分泌蛋白
