- Sulforaphane抑制热灭活大肠杆菌诱导的HeLa细胞凋亡被引量：1
- 2019年
- 目的研究Sulforaphane(SFN)对细胞凋亡的抑制作用及其在脓毒症中对细胞的保护作用。方法将HeLa细胞分为4组:对照组、热灭活大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)处理组、SFN处理组(SFN组)和热灭活E.coli+SFN组。酶联免疫反应检测炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α;流式细胞术(annexin V/propidium iodide双染)检测细胞凋亡;免疫荧光检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量及线粒体膜电位的变化;Western blot检测活化的caspase 3、bax和bcl-2水平。结果热灭活E.coli处理后,细胞产生的炎症因子IL-1β[(121.13±8.44)pg/mL比(36.67±5.82)pg/mL,P<0.05]和TNF-α[(123.83±7.32)pg/mL比(20.63±1.91)pg/mL,P<0.05]明显升高、凋亡细胞数明显增加[(32.49±3.96)%比(12.52±1.37)%,P<0.05]、活化的caspase 3[(2.28±0.19)比(1.01±0.19),P<0.05)]和BAX[(4.81±0.80)比(1.04±0.25),P<0.05)]水平明显升高,而bcl-2[(0.27±0.08)比(0.96±0.18),P<0.05)]水平明显降低。用SFN处理后(包括SFN组、热灭活E.coli+SFN组),IL-1β[(45.41±13.16)pg/mL比(121.13±8.44)pg/mL,P<0.05],TNF-α[(30.3±6.0)pg/mL比(123.8±7.3)pg/mL,P<0.05]水平明显降低、凋亡细胞明显减少[(11.34±2.05)%比(32.49±3.96)%,P<0.05]、活化的caspase3[(1.01±0.07)比(2.282±0.19),P<0.05)]、BAX[(2.15±0.14)比(4.81±0.80),P<0.05)]明显减少,而bcl-2[(1.34±0.18)比(0.27±0.08),P<0.05)]水平明显增加。与此相对应,与灭活E.coli处理的细胞相比较,加入SFN(包括SFN组和热灭活E.coli+SFN组),ROS水平明显下降[(1.27±0.17)比(6.30±1.50),P<0.05)],而线粒体膜电位明显上升[(1.18±0.10)比(0.14±0.01),P<0.05)]。结论SFN可有效抑制热灭活E.coli诱导的HeLa细胞调亡、稳定线粒体膜电位、降低ROS、抑制炎性因子的产生。因此,SFN可能作为脓毒血症时保护细胞的药物。
- 张箭张箭瞿丛王瑶王瑶赵文然
- 关键词：SULFORAPHANE细胞凋亡活性氧炎症因子
- 99TcM-MIBI SPECT/CT同机融合显像对颅内肿瘤性占位病变的临床应用价值
- 目的:本文对颅内占位病变患者分别行三种头颅影像学检查方法:99Tcm-MIBI SPECT/CT同机融合显像、SPECT显像和CT显像。对比研究99Tcm-MIBI SPECT/CT同机融合显像与SPECT显像或CT显像...
- 王瑶
- 关键词：影像学检查
- 抗B组柯萨奇病毒3型3C蛋白多克隆抗体的制备及初步应用
- 2023年
- 目的制备抗B组柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CVB)3C蛋白的多克隆抗体。方法通过聚合酶链式反应从pcDNA3.1(+)-EGFP-3C中扩增编码3C的DNA片段,构建pET28a(+)-3C-6His表达载体,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli,E.Coli)BL21(DE3)以表达3C重组蛋白。优化表达条件及菌体蛋白的提取方法,经超声破碎制备菌体总蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)后,用氯化钾进行胶染色,切胶回收相对分子质量为26000的蛋白,即纯化的3C重组蛋白(3C-6His的相对分子质量为26000)。用纯化的1 mg 3C重组蛋白加等量弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,共免疫5次,每次间隔1周,免疫结束后1周取兔血清,检测抗体的特异性。结果在相对分子质量为26000的位置检测到了3C-6His融合蛋白的表达,成功构建了高效表达带His标签的3C重组蛋白载体。重组3C蛋白原核优化表达条件为37℃培养细菌6 h,加0.05 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导。经SDS-PAGE分离菌体总蛋白,得到了纯化的3C重组蛋白。获得的兔免疫血清可以结合E.Coli及HeLa细胞表达的3C蛋白,还能识别感染CVB3或肠道病毒A71的HeLa细胞中表达的3C蛋白。结论获得了抗CVB33C蛋白酶的多克隆抗体,这一抗体可特异结合肠道病毒的3C蛋白酶,为进一步研究3C蛋白酶在肠道病毒致病机制中的作用奠定了基础。
- 牛孙敏张箭王立鑫王瑶赵朔暄邵恩泽沃晓嫚赵文然
- 关键词：B组柯萨奇病毒多克隆抗体
- 颈内导管固定器（双桥洞型）
- 1.本外观设计产品的名称：颈内导管固定器（双桥洞型）。;2.本外观设计产品的用途：本外观设计产品用于患者颈内导管的固定。;3.本外观设计产品的设计要点：在于形状。;4.最能表明设计要点的图片或照片：立体图。
- 李雪婷王瑶 彦子博 曹新宇 李非 宫瑾 武广润
- 宫颈癌中IGF-Ⅱ表达及其体外诱导Siha细胞株增殖的临床意义
- 目的：
研究胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)及胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-IR)在宫颈癌中表达及临床意义。同时探讨IGF-Ⅱ激活宫颈癌SiHa细胞株ERK1/2(p42/44MAPK)信号通路的模式变化及对...
- 王瑶
- 文献传递
- 抗人CLC-7多克隆抗体的制备
- 2019年
- 目的制备抗氯离子通道蛋白(chloride channel 7,CLC-7)多克隆抗体.方法将表达载体pEGFP-CLC-7导入感受态大肠杆菌DH-5α,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalacto-side,IPTG)诱导细菌表达CLC-7蛋白;经SDS-PAGE电泳后切胶获得纯化的CLC-7蛋白,与免疫佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,免疫5次后,经心脏采血获取抗血清,用Western blot检测抗血清特异性及效价.结果与市售的CLC-7抗体比较,所获抗CLC-7抗血清可识别细菌及HeLa细胞表达的CLC-7蛋白,表明抗血清有较好的特异性;1:4000倍稀释抗血清时,Western blot实验仍可获得清晰的反应带,表明所制备的抗CLC-7多克隆抗体有较高的效价.结论利用原核表达的CLC-7蛋白作为抗原免疫动物,获得了高效价且特异性好的抗人CLC-7蛋白多克隆抗体,该抗体可用于后续研究.
- 徐勇王瑶袁园赵朔暄赵文然
- 关键词：抗体
- 一种双桥洞型颈内静脉导管用固定装置
- 本实用新型提供一种双桥洞型颈内静脉导管用固定装置，属于医疗辅助器械领域，包括双桥洞线卡、固定翼和安装座；双桥洞线卡的表面开设有两个线槽，双桥洞线卡的两侧连接有连接块；本实用新型中：采用双桥洞线卡可以实现双导管的安装，将导...
- 李雪婷王瑶 彦子博 曹新宇 李非 宫瑾 武广润
- 阿司匹林抵抗与血小板膜糖蛋白GpIbα基因VNTR多态性的关系
- 目的：
研究哈尔滨地区心脑血管病患者中，阿司匹林抵抗者血小板膜糖蛋GPIba基因VNTR多态性的等位基因及基因型的分布状况。
方法：
阿司匹林100mg/天至少7天以上的心脑血管疾病的患者1...
- 王瑶
- 关键词：血小板聚集阿司匹林抵抗VNTR多态性心脑血管疾病PCR扩增电泳技术
- 文献传递
