张亚莉 作品数:32 被引量:72 H指数:4 供职机构: 贵州医科大学医学检验学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 贵州省科技计划项目 广州市重大科技攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 生物学 更多>>
风疹病毒野生株感染ECV304血管内皮样细胞的细胞病变效应 被引量:1 2006年 目的通过体外培养和风疹病毒野生株感染ECV304血管内皮样细胞,初步探讨中国大陆流行的风疹病毒野生株的致病变性特征.方法常规方法培养ECV304血管内皮样细胞和病毒接种,RT-PCR和间接免疫荧光法检测风疹病毒包膜糖蛋白E1基因的表达,相差显微镜及电子显微镜下观察细胞受病毒感染后形态变化,脱氧核糖核酸末端转移酶法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果感染后2~3 d即可检测到风疹病毒包膜糖蛋白E1基因表达;感染后4 d,相差显微镜观察呈现明显的细胞病变效应,即细胞悬浮脱壁、细胞体变圆缩小、细胞膜皱缩、染色质浓缩等;电镜下观察可见明显病毒颗粒,核染色质浓集、边缘化,线粒体聚集于细胞核周围呈溶酶体化、空泡化和自噬现象.TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI)在病毒感染组与对照组间有显著性差异(P<0.01).结论风疹病毒野生株在ECV304细胞中有明显的致细胞病变效应,在体外细胞培养下可诱导ECV304血管内皮样细胞凋亡. 莫小阳 马文丽 张亚莉 赵海全 柯昌文 郑焕英 邹丽容 郑文岭关键词:风疹病毒 聚合酶链反应 间接免疫荧光法 HSV-2的生物信息学分析及其Oligo探针设计 被引量:2 2005年 目的设计单纯疱疹病毒2型(HSV-2)诊断芯片的O ligo探针。方法利用BLA ST软件对HSV-2的DNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;用生物学软件O ligo6.0设计特异性高、Tm值相近、长度均一的O ligo探针。结果获得13条60-m er O ligo探针。结论利用BLA ST系统和生物学软件O ligo6.0设计HSV-2诊断芯片的探针,可为后期打印成DNA芯片,用于HSV-2的检测打下基础。 赵海全 马文丽 莫小阳 张亚莉 郑文岭关键词:单纯疱疹病毒2型 生物芯片 氧化型低密度脂蛋白对可诱导共刺激分子在人外周血T细胞表达的影响 2010年 目的:探讨可诱导共刺激分子(ICOS)在人外周血T细胞的表达及氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的干预作用。方法:以人外周血T细胞为实验模型,通过间接免疫荧光法、RT-PCR和Western blot等方法,观察ox-LDL对人外周血T细胞表达ICOS的影响。结果:①ICOS表达于人外周血T细胞膜,荧光信号呈点状散在分布于细胞表面。RT-PCR检测显示,ICOS mRNA的扩增片段位于相当于Marker 368 bp的位置。Western blot检测显示,ICOS的分子量约为55 kD。②ox-LDL刺激组ICOS的吸光度(A)值高于空白对照组,提示ox-LDL能够明显增加人外周血T细胞中的ICOS mRNA和其蛋白的表达(P<0.05)。结论:ICOS表达于人外周血T细胞表面,ox-LDL能够上调ICOSmRNA和其蛋白的表达,这可能是动脉粥样硬化的免疫学发病机制之一。 徐琳 朱肖星 张亚莉 彭智欣 李炳玲 李志梁 邱健关键词:可诱导共刺激分子 氧化低密度脂蛋白 动脉粥样硬化 雷帕霉素对低氧下人HL-60细胞增殖和凋亡的影响 被引量:3 2012年 本研究拟通过小分子化合物氯化钴(CoCl_2)模拟的低氧环境,探讨雷帕霉素(RPM)对该低氧下人急性髓细胞白血病HL-60细胞的生物学行为的影响。低氧模拟组、低氧雷帕霉素处理组、常氧雷帕霉素处理组HL-60细胞分别采用CoCl_2、CoCl_2/RPM、RPM进行处理,对照组为常氧下常规培养的HL_60细胞,处理及培养24 h、48 h、72 h后收集细胞,采用倒置相差显微镜观察细胞生长状况,常规瑞氏染色后光学显微镜下观察细胞形态;MTT比色法检测各组细胞的活性和增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,与对照组细胞形态规则,胞核呈圆形或椭圆形相比,低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组细胞密度降低,生长明显受抑,细胞胞核呈不规则形或杆状,染色质粗糙,伴扭曲折叠等变化。各组间不同时间细胞增殖抑制率差异显著(P<0.05),低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组增殖抑制率随着处理时间延长而增大,且低氧雷帕霉素处理组的增殖抑制率大于低氧模拟组。与常氧下的对照组及雷帕霉素处理组比较,低氧的模拟组和雷帕霉素处理组诱导细胞发生较明显的凋亡,且后期72 h低氧雷帕霉素处理组凋亡率显著高于模拟低氧处理组。以上结果表明,模拟低氧环境下,HL_60细胞生长明显受抑制,且诱导细胞凋亡;雷帕霉素可增强对低氧对细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。 张亚莉 朱红敏 王剑青 刘会 陶建蜀 陈涛 莫小阳关键词:雷帕霉素 HL-60细胞 低氧 凋亡 骨髓图文分析系统互动模式在临床血液学与血液检验教学中的应用 被引量:4 2014年 临床血液学和血液检验是一门专业性极强的学科,其中血液形态学是该门课程的主要内容,注重基础理论与临床实践的密切结合,因此对"实践性"的要求极高。在血液形态检验实践教学的改革和实践的环节引入骨髓图文分析系统互动模式教学法,并进行总结和分析,从而培养应用型、创造型的医学检验人才。 杨芳 曾小菁 张亚莉 黄吉娥 刘菲 刘咏梅雷帕霉素对低氧下HL-60细胞的低氧调控信号分子表达的影响 被引量:1 2012年 目的:通过小分子化合物氯化钴(CoCl2)模拟的低氧环境,分析低氧下及其雷帕霉素(RPM)作用下人急性髓细胞白血病细胞HL-60的低氧调控信号分子表达的变化;方法:常规方法复苏、传代、培养HL-60细胞,培养细胞进入对数生长期后用于实验。低氧模拟组、低氧雷帕霉素处理组、常氧雷帕霉素处理组分别用含200μmol/L CoCl2、200μmol/L CoCl2/20nmol/L RPM、20nmol/LRPM的1640培养基处理生长状态良好的细胞,对照组细胞用1640培养基培养,各组置培养箱以37℃、5%CO2培养,并于处理后24h、48h、72h收集细胞用于检测;采用实时荧光定量PCR方法检测低氧诱导因子(HIF-1α)、内皮细胞生长因子(VEGF)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及GAPDH在转录水平的表达;结果:①.与各时段对照组相比,低氧模拟组HIF-1α表达随时间逐渐增加,72h明显上调;与常氧雷帕霉素处理组各时段比较,低氧雷帕霉素处理组HIF-1α表达早期(24h)相对下调,后期相对上调;②.与对照组比较,各处理组mTOR表达均下调,低氧雷帕霉素处理组在早期(24h)下调显著;与常氧雷帕霉素处理组比较,低氧雷帕霉素处理组mTOR各时段的表达均相对下调;③与对照组各时段相比,低氧模拟组VEGF的表达在早期显著上调,但后期呈下调;常氧雷帕霉素处理组各时段VEGF的表达下调,与其比较,低氧雷帕霉素处理组各时段均呈相对下调。结论:常氧和低氧下RPM作用HL-60细胞后VEGF、mTOR的mRNA均表达下调,RPM可在低氧环境下增强了这种下调表达作用。 张亚莉 朱红敏 王剑青 陈涛 陶建蜀关键词:雷帕霉素 HL-60细胞 低氧 MTOR 两种标记方法对60mer寡核苷酸芯片背景信号影响的初步分析 被引量:2 2006年 研究两种不同的样本标记方法对人全基因组高密度60mer寡核苷酸芯片背景信号的影响。收集5对患病与健康人外周血单个核细胞,分别提取总RNA后,采用限制性显示技术(restrictiondisplay,RD)进行样本双色(Cy3/Cy5)荧光标记,与5张Agilent60mer高密度(22K)Human1B寡核苷酸芯片进行杂交。芯片全部杂交点分3组基因探针组、阳性对照组和阴性对照组。阳性对照采用荧光标记寡核苷酸直接掺入法进行标记。对全部杂交信号点的Cy3和Cy5背景信号值,用SPSS软件进行数据转换、正态性检验、方差齐性检验、变异系数分析和重复数据的方差分析。数据分析结果显示,Cy3标记的背景信号值均高于Cy5标记的背景信号值。重复测量数据的方差分析表明,在Cy3和Cy5标记中,两种不同标记方法间的背景信号值的差异极显著(PCy3<0.01,PCy5<0.01),且RD标记点的背景信号平均值低于荧光标记寡核苷酸直接掺入标记法标记的阳性对照点。RD标记方法是一种有用的低背景信号的高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法。 张亚莉 马文丽 莫小阳 石嵘 李凌 徐秋林 张海燕 郑文岭关键词:限制性显示技术 寡核苷酸芯片 苯代谢物氢醌对K562细胞WRN基因转录及表达的影响 被引量:4 2016年 目的探讨苯代谢物氢醌(HQ)对人白血病细胞K562中解旋酶WRN基因mRNA转录及蛋白表达的影响。方法常规培养白血病细胞K562至生长对数期,低剂量HQ组、中剂量HQ组、高剂量HQ组分别以15、30、60μmol/L浓度HQ重复间隔染毒48及72 h,以等体积的PBS培养的细胞组为空白对照组。采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测细胞DNA损伤;采用Taqman探针实时荧光定量PCR法检测WRN基因mRNA水平,采用免疫印迹分析WRN基因蛋白表达水平,计算mRNA及蛋白的相对表达量。结果 (1)HQ可导致细胞DNA损伤,且损伤效应随染毒浓度增加而增大,72 h比48 h的DNA损伤程度增加,呈时间-剂量依赖性;(2)HQ染毒48 h,WRN基因mRNA在各组差异均无统计学意义(P>0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),低、中剂量组与高剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组与中剂量组组间差异无统计学意义(P>0.05);(3)HQ染毒48 h,WRN蛋白相对表达量在各组差异无统计学意义(P>0.05);HQ染毒72 h,各剂量组与空白对照组比较,蛋白表达随着染毒剂量增大而降低,差异有统计学意义(P<0.05),HQ各剂量组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HQ可导致K562细胞DNA损伤,且呈时间-剂量依赖性,其机制可能与HQ下调WRN基因mRNA转录及蛋白的表达有关。 龚骏杰 郑丹 肖芸 万秀方 张越时 王永红 张亚莉 杨国珍关键词:氢醌 DNA损伤 K562细胞 雷帕霉素对人急性淋巴细胞白血病细胞SUP-B15的增殖、凋亡与自噬的影响 被引量:3 2012年 目的探讨雷帕霉素(RAPA)对人急性淋巴细胞白血病SUP-B15细胞的增殖、自噬与凋亡的影响。方法常规方法复苏、传代培养SUP-B15细胞,设置空白对照组(正常培养)、雷帕霉素处理组。处理24、48、72 h后收集细胞,采用MTT比色法检测细胞的活性和增殖能力;采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;吖啶橙单染及透射电镜观察细胞自噬现象。结果 MTT检测结果显示,RAPA对SUP-B15细胞增殖有较强抑制作用(IC50=18.174 nmol/L),且抑制作用随药物剂量增加和作用时间延长而增强;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,不同浓度RA-PA作用可诱导SUP-B15细胞凋亡,作用48、72 h细胞凋亡较24 h时明显;RAPA作用48 h时的细胞凋亡随药物浓度增大而增多,72 h时高剂量药物(50、100 nmol/L)引起的细胞凋亡较低剂量药物(10、20 nmol/L)少;吖啶橙单染荧光显微镜观察显示,与空白对照组相比,雷帕霉素处理组细胞胞质中出现较多红色斑点的酸性膜泡(即自噬小体),且随药物浓度增大红色斑点增多;透射电镜观察结果显示,雷帕霉素处理组细胞胞质内可见较多自噬小体和自噬溶酶体,线粒体内嵴明显紊乱,细胞核不规则,染色质边缘化。结论雷帕霉素对SUP-B15细胞生长有较强的抑制作用;雷帕霉素可诱导SUP-B15细胞发生自噬和凋亡,且自噬的发生先于凋亡出现,一定强度的自噬活性可诱导细胞凋亡增加。 张亚莉 陈涛 王剑青 李美 张建英关键词:雷帕霉素 凋亡 自噬 去甲斑蝥素及其五种衍生物抗白血病细胞K562作用的实验研究 被引量:1 2014年 目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)及其五种衍生物抗白血病细胞K562的作用.方法:常规方法复苏、传代培养人慢性粒细胞性白血病K562细胞,待细胞进入对数生长期后用于实验.空白对照组行常规培养,药物处理包括去甲斑蝥素(NCTD)处理组和NCTD衍生物(QJ-2、QJ-3、QJ-13、BH052及BH091)处理组,分别设置各组药物终浓度0.001 mmol/L、0.005 mmol/L、0.05 mmol/L、0.1 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L 处理,各组于处理24 h、48 h (NCTD)、72 h(NCTD)后收集细胞检测:①倒置相差显微镜观察细胞生长状况;②常规瑞氏染色后光学显微镜下观察细胞形态;③MTT比色法检测不同处理组细胞的活力和增殖能力.结果:①与空白对照组比较,NCTD及其衍生物处理后活细胞减少,并出现抱团生长、胞膜出泡、胞体破碎等现象,且变化程度随浓度升高更加明显;瑞氏染色观察 NCTD 作用后K562细胞,药物处理组细胞胞核染色质出现聚集、溶解、碎裂现象,胞浆出现空泡,空泡量且随NCTD浓度升高而增多;②MTT实验测定各药物对K562细胞的IC50值由大到小分别为QJ-3(1.88 mmol/L)、BH091(1.787 mmol/L)、QJ-13(0.621 mmol/L)、BH052(0.406 mmol/L )、QJ-2(0.129 mmol/L )、NCTD (0.083 mmol/L),NCTD对K562细胞的增殖抑制作用最强,且该抑制作用随药物剂量增加和作用时间延长而增强;在NCTD的五种衍生物中 QJ-2的抑制作用最强.结论:①NCTD对K562细胞生长有较强的抑制作用,且呈剂量-时间依赖性;②五种衍生物中QJ-2对K562细胞的作用最强. 王剑青 娄方方 汪冶 王国川 沙启明 张亚莉关键词:去甲斑蝥素 K562 细胞 白血病