王恩雨
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”黑龙江省博士后科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 猪整合素αv多克隆抗体制备与应用被引量：3
- 2017年
- 利用大肠杆菌原核表达系统对猪整合素αv基因片段进行表达,纯化目的蛋白免疫小鼠,制备猪整合素αv多克隆抗体,并对其进行鉴定及初步应用。对基因序列进行预测分析后,截取胞外区抗原性较好的基因片段,针对大肠杆菌稀有密码子优化后合成该基因序列,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体上,诱导表达并纯化重组蛋白,对重组蛋白进行Western blot鉴定后免疫小鼠,制备多克隆抗体。利用间接ELISIA方法检测抗体效价,利用Western blot技术检测猪整合素αv多克隆抗体与天然整合素αv蛋白的反应原性。获得了分子质量为83 ku的重组蛋白,以纯化的重组蛋白作为免疫原制备的多克隆抗体效价大于1∶6 400,且能识别天然整合素αv蛋白。研究成功制备了猪整合素αv多克隆抗体,为后续相关研究提供基础。
- 王恩雨高晶郭东华李春秋孙东波
- 关键词：整合素ΑV多克隆抗体重组蛋白病毒受体
- 2014—2015年黑龙江省牡丹江地区犬细小病毒2型分子流行病学调查被引量：2
- 2015年
- 为了调查黑龙江省牡丹江地区犬细小病毒(CPV-2)流行情况,利用基于CPV-2部分VP2基因(568 bp)PCR的方法,对2014年5月—2015年4月收集的40份腹泻犬粪便拭子进行了检测与分析。结果显示,在40份样品中,20份样品为CPV-2阳性(50%),其中,新CPV-2a(Ser297Ala)型和CPV-2c型分为别占75%(15/20)和25%(5/20);序列分析结果显示,20个CPV-2毒株VP2基因的核苷酸和氨基酸的相似性分别为98.6%~100%和98.2%~100%;进化树分析表明,与其他国家CPV-2参考毒株相比,鉴定的新CPV-2a型毒株和CPV-2c型毒株与中国CPV-2参考毒株形成一个进化群(A),其中鉴定的新CPV-2a型毒株分布于不同的分支中。结果提示,CPV-2在牡丹江地区犬腹泻病例中呈现高感染率。
- 耿雨菲王恩雨滕井胜李春秋姚爽王志慧王欣宇苏明俊魏姗赵喜文孙筱璇边秀东张立春孙东波
- 关键词：腹泻VP2基因分子流行病学
- 2015年黑龙江省猪流行性腹泻病毒ORF3和S1基因的遗传变异分析被引量：2
- 2017年
- 为了解黑龙江省猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行现状及遗传进化情况,试验利用RT-PCR方法对2015年在黑龙江省采集的35份PEDV阳性病料进行检测,针对PEDV ORF3和S1基因进行扩增及测序,并对其进行遗传进化分析。结果表明:ORF3基因和S1基因的核苷酸同源性分别为98.8%~100%和96.6%~100%,其中HLJ2015/DP1-1毒株与经典毒株CV777相比,S1基因在1 130~1 141 bp之间有12个核苷酸缺失;S1基因系统进化树分析显示,PEDV S1基因分为GⅠ群和GⅡ群,此次试验鉴定的PEDV毒株属于GⅡ群的non S-INDEL型毒株。
- 王恩雨郜洪泉邢宇昕张鹏宇边秀东孙筱镟孙东波
- 关键词：ORF3基因S1基因
- 猪整合素β3多克隆抗体制备与鉴定
- 2016年
- 为了制备猪整合素β3多克隆抗体,试验利用大肠杆菌原核表达系统,对密码子优化的猪整合素β3基因主要抗原区进行原核表达,表达的重组蛋白纯化后,免疫Balb/c雌性小鼠,采血后分离血清,进一步通过ELISA和Western-blot对制备的猪整合素β3多克隆抗体进行鉴定。结果表明:猪整合素β3基因主要抗原区获得了成功表达,表达蛋白分子质量为102 ku左右,以纯化重组蛋白作为免疫原制备的多克隆抗体效价为1∶12 800,且能识别天然猪整合素β3。
- 高晶王志慧郭东华李春秋苏明俊王欣宇赵喜文王恩雨魏姗刘秋瑾孙东波
- 关键词：整合素Β3原核表达重组蛋白多克隆抗体病毒受体病毒感染
- 奶牛腐蹄病坏死杆菌分离鉴定及白细胞毒素基因lktA1序列分析被引量：3
- 2015年
- 为分离纯化奶牛腐蹄病坏死杆菌,分析其与其他菌株的亲缘关系,本研究利用坏死杆菌白细胞毒素特异性引物,对奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品进行了PCR检测,利用厌氧培养基对PCR检测阳性样品进行了坏死杆菌的分离培养,以分离的坏死杆菌基因组DNA为模板,对白细胞毒素基因进行了克隆和序列分析。结果显示,9份奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品PCR检测结果均为阳性,对其中一份样品中的坏死杆菌进行分离培养,获得了纯培养物,命名为bFR13-1。坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素基因测序结果显示,与GenBank已发表的H05、A25和B35菌株的白细胞毒素基因在核苷酸水平的同源性分别为98.40%、98.35%和90.79%,推导氨基酸的同源性分别为97.7%、97.6%和89.0%。进化树分析结果显示,坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素与H05菌株的同源性最高,bFR13-1菌株与H05菌株和A25菌株呈较近亲缘关系。结果表明,不同坏死杆菌分离株的白细胞毒素呈现一定的变异性,这种变化是否与坏死杆菌致病性相关,值得深入研究。
- 高晶李春秋姚爽张立春王欣宇王志慧赵喜文魏姗王恩雨孙东波武瑞郭东华
- 关键词：奶牛腐蹄病坏死杆菌
- 2016年黑龙江省猪流行性腹泻病毒S1基因的遗传变异分析被引量：2
- 2018年
- 为了解2016年黑龙江省猪场内猪流行性腹泻病毒（PEDV）的流行与变异情况,试验利用RT-PCR方法对采自黑龙江省的29份腹泻仔猪的小肠组织样品进行检测,针对PEDV S1基因进行扩增及测序,构建系统进化树,并对其进行系统进化性分析和氨基酸序列插入或缺失突变分析。结果表明：10个S1基因测序成功,鉴定毒株间核苷酸序列同源性为96.2%-99.7%,推导出的氨基酸序列同源性为96.2%-99.5%;与已知的中国HGC-01-2015、FJ-FQ 2014野毒株和美国高致病性毒株USA/Colorado/2013同源性较高,而与经典毒株CV777、中国早期毒株同源性较低;以S1基因构建系统进化树,主要分为GⅠ群和GⅡ群,新鉴定的10株PEDV毒株均属于GⅡb亚群的non S-INDEL型毒株,与经典毒株CV777及亚洲其他地区毒株、欧洲毒株分属于不同亚群;鉴定毒株与亚洲地区常用疫苗株相比,存在相同的突变位点,并集中在S1蛋白的N末端结构域。
- 朱金海王恩雨孙东波
- 关键词：S1基因系统进化树
- 2015年中国七个地区PEDV ORF3和S1基因的遗传进化分析
- <正>猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种高度接触性肠道传染病,为调查中国P...
- 王恩雨孙东波
- 关键词：ORF3基因S1基因遗传进化
- 文献传递
- 2014—2015年黑龙江省哈尔滨地区犬冠状病毒M基因分子流行病学调查被引量：4
- 2016年
- 为调查黑龙江省哈尔滨地区犬冠状病毒（CCo V）的流行情况,本研究通过RT-PCR对141份腹泻犬粪便拭子样品中CCo V M基因片段（409 bp）进行了扩增,进一步对M基因进行了测序和分子进化性分析。结果表明：在141份样品中,38份样品为CCo V阳性（26.95%,38/141）,其中CCo V-Ⅰ型和CCo V-Ⅱ型分别占13.16%（5/38）和86.84%（33/38）。M基因序列分析表明：5个CCo V-Ⅰ型毒株M基因序列的核苷酸同源性为95.7%~99.1%,推导的氨基酸序列同源性为97.4%~100%;33个CCo V-Ⅱ型毒株M基因序列的核苷酸同源性为97.4%~100%,推导的氨基酸序列同源性为100%;33个CCo V-Ⅱ型毒株与中国参考毒株HF3的核苷酸同源性为88.7%~96.2%,推导的氨基酸序列同源性为92.2%~97.4%。进化树分析表明：5个CCo V-Ⅰ型毒株与2个巴西参考毒株呈现出较近的亲缘关系;33个CCo V-Ⅱ型毒株形成五个亚群,与中国参考毒株（除NJ17毒株）和国外参考毒株表现出较远的亲缘关系。可见CCo V在犬腹泻中呈现出较高感染率,以CCo V-Ⅱ型毒株感染为主,并表现出遗传多样性。
- 王欣宇王福军辛科睿魏姗王恩雨郜洪泉王志慧邢宇昕赵喜文孙筱璇边秀东刘秋瑾孙东波
- 关键词：M基因流行病学
- 变形蹄奶牛血清shotgun蛋白质组学分析
- 2016年
- 为了揭示变形蹄奶牛血清蛋白表达谱,探索奶牛变形蹄发生的机制,试验利用鸟枪法(shotgun)蛋白质组学技术分别对健康奶牛(UA,n=26)和变形蹄奶牛(HD,n=40)的混合血清样品进行了鉴定和生物信息学分析,进一步分析UA和HD样品的差异蛋白,并对选择的差异蛋白进行验证。结果表明:在UA样品中鉴定了393个蛋白,其中224个蛋白为高度可信蛋白;在HD样品中鉴定了409个蛋白,其中225个蛋白为高度可信蛋白。UA和HD样品中鉴定的蛋白,在分子功能、细胞进程和细胞成分分类中显示出明显的差别。在UA和HD样品中存在着24个潜在的差异蛋白,其中18个蛋白来自HD样品,6个蛋白来自UA样品;在HD样品潜在的差异蛋白中,桥粒蛋白(desmoplakin)、连接桥粒斑珠蛋白(junction plakoglobin)和钙磷脂结合蛋白A2(annexin A2)与奶牛变形蹄发生具有潜在的相关性。通过ELISA或Western-blot对UA和HD样品中的免疫球蛋白(Ig G)、牛结合珠蛋白(Bo Hp)、补体C4和补体C8进行了验证,说明变形蹄奶牛血清蛋白表达谱发生了变化。
- 赵喜文郭东华谷城曲永利王欣宇苏明俊魏姗王恩雨王志慧刘秋瑾辛科睿武瑞孙东波
- 关键词：奶牛变形蹄血清蛋白质组学差异蛋白
