目的:以人丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)基因结构为例,利用不同生物相关软件分析、设计和筛选合适的定量PCR引物。方法:利用NCBI的Gene数据库查找人MAPK3基因的参考序列、Uni Gene数据库查找标准参考序列;并用在线软件如Spidey,UCSC,Ensembl等分析基因结构;利用Primer3,Oligo6,IDT等软件进行引物设计;用MFOLD程序分析基因二级结构后,选择引物可定位的外显子位置;利用电子PCR进行引物扩增特异性的检验;最后通过实验检验引物的扩增效果。结果:从程序软件推荐的引物列表中筛选出一对能特异扩增人MAPK3基因的引物。结论:基因结构分析软件有助于定量PCR引物的设计。
