牟云
- 作品数：9 被引量：6H指数：1
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 持续盐胁迫对沙漠小球藻生长的影响
- 2023年
- 为探究不同盐胁迫水平下持续盐胁迫对TLD2A1、TLD6B、GTD7c-2和TGD8A1等4株沙漠小球藻生长的影响,研究不同NaCl添加量、不同胁迫时间下4株小球藻的OD_(680)值、致死率、生物量、比生长速率的变化,筛选出对盐胁迫响应显著的小球藻,优化了其NaCl添加量的梯度。结果表明:除了添加0.2 mol/L NaCl胁迫下生物量增大外,随着NaCl添加量的增大,4株小球藻的OD_(680)值、生物量、比生长速率受到的抑制程度均逐渐增大,致死率逐渐增大;随胁迫时间的延长,OD_(680)值、致死率、生物量逐渐增大,比生长速率先增大后减小。总体而言,GTD7c-2耐盐,GTD8A1盐胁迫后生长不稳定,TLD2A1最不耐盐,TLD6B受盐胁迫的响应最明显。
- 李红李红牟云牟云
- 沙漠小球藻转人乳铁蛋白的电转优化被引量：2
- 2018年
- 对沙漠小球藻建立高效的遗传转化方法,对电击转化的条件和相关参数进行优化。作者以人乳铁蛋白基因作为电转条件优化的参考基因,采用单因素实验确定转染效率的电转化条件,然后进行电转化正交实验,得到最优的电转化组合。结果表明:最优的电转化组合是电压1 400 V、培养周期8 d、渗透剂浓度0.2 mol/L、渗透时间为0 h、质粒质量浓度为6 ug/mL、电击缓冲液浓度为0.4 mol/L,其细胞致死率为51.30%、荧光百分率为52.54%、PCR阳性平均百分率为42.30%。
- 汪文伦牟云胡梦薇许万云严国王会敏高剑峰
- 关键词：电转化小球藻人乳铁蛋白
- 沙漠小球藻的蛋白双向电泳分析被引量：1
- 2016年
- 为建立适用于小球藻（Chlorellasp.TLD6B）蛋白质组分析的双向电泳体系,该研究比较了TCA/丙酮沉淀法和Trisol提取法对小球藻蛋白的提取效果,不同pH梯度IPG胶条（pH3~10和pH4~7）、不同蛋白质上样量、不同聚焦程序对小球藻蛋白的分离效果。结果表明：（1）采用Trisol提取法可获得较高纯度蛋白,当选择24cm pH 3~10的线性IPG胶条时,上样量为500μg,聚焦80 000Vh效果最佳,可分辨蛋白点达726个;当选择24cm pH 4~7的线性IPG胶条时,上样量为1 000μg,聚焦80 000Vh效果最佳,可分辨蛋白点达1 230个。（2）该实验随机挑选了10个胶内蛋白点进行MALDI-TOF/TOF-MS鉴定分析表明,其中8个蛋白点鉴定成功,进一步说明Trisol提取法可适用于小球藻双向电泳分析。
- 牟云汪文伦严国王会敏高剑峰
- 关键词：小球藻双向电泳
- 人乳铁蛋白的沙漠小球藻表达系统的构建与鉴定被引量：1
- 2017年
- 为获得人乳铁蛋白的沙漠小球藻(Chlorella sp.GTD8A1)的表达系统和稳定的小球藻GTD8A1-h LF工程藻种,将人乳铁蛋白基因导入小球藻细胞中进行表达鉴定。以人血c DNA为模板,RT-PCR扩增得到人乳铁蛋白基因(Gen Bank登录号NM-002343.4),经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后,连接到植物表达载体p CAMBIA2300-35S-OCS中,获得重组质粒载体p CAMBIA2300-35S-h LF-OCS,将重组质粒电击转入GTD8A1中,通过菌落PCR鉴定后扩大培养,在DNA和RNA水平分析人乳铁蛋白基因的整合和转录,SDS-PAGE和Western Blot分析获得70 ku的目的蛋白;将转基因藻种(GTD8A1-h LF)在BBM培养基中进行培养周期优化。结果表明,重组人乳铁蛋白在沙漠小球藻细胞中表达成功;通过Elisa测其人乳铁蛋白表达量在20 d时达到最大,浓度为13.28 mg/L。
- 牟云汪文伦许万云胡梦薇王丹严国王会敏高剑峰
- 关键词：小球藻人乳铁蛋白SDS-PAGEWESTERNBLOT
- 模拟持续干旱胁迫对4株沙漠小球藻生长的影响及比较研究
- 2022年
- 沙漠小球藻(Chlorella sp.)生长在极其干旱的环境中,为探究持续干旱胁迫对沙漠来源小球藻生长的影响。以新疆古尔班通古特、塔克拉玛干沙漠分离的4株小球藻菌株(TLD2A1、TLD6B、GTD7c-2、GTD8A1)为研究对象,测定了PEG-6000浓度、不同干旱胁迫持续时间对小球藻的OD_(680)值、致死率、生物量、比生长速率的影响,筛选出对干旱胁迫耐受性最优的小球藻菌株,优化了菌株的PEG-6000浓度梯度。研究表明,随着PEG-6000浓度的增大,4株小球藻的OD_(680)值、生物量、比生长速率的下降程度均逐渐增大,致死率显著增大(P<0.05);随胁迫时间的延长,OD_(680)值、致死率、生物量逐渐增大,比生长速率先增大后减小(P<0.05)。总体而言,GTD7c-2干旱胁迫后生长不稳定;TLD2A1耐旱,但生物量、比生长速率最小;TLD6B生长速率最大,受干旱胁迫的响应最明显。本研究阐明了模拟持续干旱胁迫对4株沙漠小球藻生长的影响,将为后期沙漠小球藻耐干旱胁迫的生理学和分子生物学研究提供材料和基础,也为小球藻耐旱藻种的选育应用提供参考依据。
- 李红李红牟云牟云
- 绵羊MHC-DQB2 exon3单倍型的构建及其与布鲁氏菌病易感性相关性被引量：1
- 2018年
- 为探究绵羊MHC-DQB2基因exon3单核苷酸多态性及其单倍型与布鲁氏菌病易感性的相关性,对145只哈萨克绵羊进行了布鲁氏菌虎红平板检测(RBPT),并通过PCR-SSCP试验选取不同基因型个体进行扩增测序,对测序结果进行统计分析。结果发现,在exon3 282 bp内共有22个单核苷酸多态性位点,其中140A/C/T/G位点、155T/C位点在病例和正常组间存在显著差异(P<0.05);在22个单核苷酸多态位点中,有18个符合Hardy-Weinberg平衡定律,最终构建得到21个单倍型,其中有2个单倍型(Hap6、Hap9)在病例和正常组间存在显著差异(P<0.05),一个单倍型(Hap4)存在极显著差异(P<0.01)。由此表明,绵羊MHC-DQB2 exon3单核苷酸多态性与布鲁氏菌病存在显著相关性。
- 严国王元元罗成齐江姣牟云高剑峰
- 关键词：布鲁氏菌病单核苷酸多态性单倍型
- 沙漠小球藻转植物表达载体的表达预测被引量：1
- 2016年
- 以建立小球藻(沙漠小球藻)表达系统为目的,为利用小球藻重组表达外源蛋白,以及GFP荧光特性研究沙漠中的小球藻生理及理化性质提供基础方法;同时也探索植物表达载体p CAMBIA2300-35S-OCS能否在沙漠小球藻中表达。通过菌落PCR验证E.coli DH5α是否含有目的基因(GFP基因)的重组植物表达载体p CAMBIA2300-35S-GFP-OCS,然后从E.coli DH5α中提取也构建完成的重组植物表达载体pCAMBIA2300-35S-GFP-OCS;利用电转化的方法将重组植物表达载体p CAMBIA2300-35S-GFP-OCS转入到小球藻细胞中;将电转的小球藻在含有100 mg/L卡那霉素的BBM固体培养基中筛选出单克隆,将单克隆在含有15 mg/L卡那霉素的BBM液体培养基中扩大培养,然后利用PCR和RT-PCR预测绿色荧光蛋白基因(GFP基因)的存在与否和表达情况,再利用SDS-PAGE和荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。通过SDS-PAGE和荧光倒置显微镜观察结果表明绿色荧光蛋白(GFP)在小球藻中表达成功。试验结果表明重组植物表达pCAMBIA2300-35S-OCS能够在小球藻中表达外源蛋白,以及利用GFP的荧光特性研究小球藻的生理生化差异;也为小球藻在沙漠环境上的应用提供基础。
- 汪文伦王丹牟云许万云胡梦薇高剑峰
- 关键词：电转化植物表达载体绿色荧光蛋白
- 水胁迫下沙漠小球藻蛋白质组学分析
- 2018年
- 通过研究小球藻(Chlorella sp.)在干旱胁迫下的蛋白质组变化,从蛋白质表达水平解释小球藻对干旱胁迫的响应机理。以20%的PEG 6000胁迫处理0、6、12、18、24和30 d,提取小球藻总蛋白,利用双向电泳和质谱鉴定技术分析差异蛋白。共鉴定29个差异蛋白,按功能可分为7类:光合作用、能量合成和转化、物质代谢、抗氧化、转运和细胞结构、抗逆和功能未知蛋白质。这些蛋白的表达变化影响着沙漠小球藻的油脂积累,对干旱胁迫应答起到了至关重要的作用,并直接或间接地参与了沙漠小球藻细胞内的光合作用和油脂合成。
- 谭君牟云周光普周永顺徐杰高剑峰
- 关键词：干旱胁迫蛋白质组差异表达蛋白
- PEG6000对沙漠小球藻生长及油脂积累的影响被引量：1
- 2016年
- 采用一次性培养的方式研究不同添加量PEG6000对小球藻(Chlorella sp.TLD6B)吸光度(OD680)、生物量、生长速率、可溶性蛋白含量、脂肪酶活性和总脂含量的影响。结果表明:不同添加量PEG6000对小球藻吸光度(OD680)、生物量、生长速率和可溶性蛋白含量的影响总体表现为抑制;随着培养时间的延长,同一PEG6000添加量下脂肪酶活性大体呈上升、下降再上升趋势,而对照组则呈先下降后上升趋势;对照组及5%、10%、20%、30%添加量的PEG6000胁迫下最终小球藻脂肪酶活性分别为300.87、320.67、342.43、360.21、287.76 U/g,总脂含量分别为29.64%、31.28%、33.45%、35.11%、25.26%。结果显示,不同添加量的PEG6000均抑制了小球藻的生长和可溶性蛋白合成;但适宜添加量的PEG6000提高了小球藻的脂肪酶活性及总脂含量。
- 牟云汪文伦李红严国王会敏高剑峰
- 关键词：PEG6000小球藻总脂含量
