张洋
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：石河子大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：高层次人才科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- LPA对人结肠腺癌Caco2细胞SLC26A3表达的影响
- 2016年
- 为探讨溶血磷脂酸(LPA)对溶质载体26 A3(solute carrier 26 A3′SLC26A3或DRA)在Caco2细胞中细胞内定位及蛋白表达的影响。采用构建pIRES2-ZsGreen1-SLC26A3质粒,转染Caco2细胞,G418筛选获稳转pIRES2-ZsGreen1-SLC26A3 Caco2细胞。设立未处理的Caco2细胞组(Caco2组)、转染空质粒的Caco2组(NP-Caco2组)、转染SLC26A3质粒的Caco2组(SLC26A3-Caco2组)、LPA处理的转染空质粒的Caco2组(LPA+NP-Caco2组)和LPA处理的转染SLC26A3质粒的Caco2组(LPA+SLC26A3-Caco2组),以LPA与Caco2细胞共孵育12 h为观察时间点(LPA浓度为100μmoL/L),利用细胞免疫荧光实验观察Caco2细胞中SLC26A3的定位分布,Western blot法检测Caco2细胞中SLC26A3蛋白的表达。结果显示,细胞免疫荧光实验观察结果显示LPA+SLC26A3-Caco2组SLC26A3细胞膜定位较SLC26A3-Caco2组的略有增加;Western blot检测结果显示LPA+NP-Caco2组的糖基化SLC26A3蛋白表达量较Caco2组与NP-Caco2组的均增加,有统计学意义(相对β-actin的表达量,LPA+NP-Caco2组vs.Caco2组:0.83±0.446 vs.0.14±0.050,P=0.018;LPA+NP-Caco2组vs.Np-Caco2组:0.83±0.446 vs.0.29±0.032,P=-0.044)。由此可知,LPA可促进SLC26A3在Caco2细胞的细胞膜定位和蛋白表达,从而为LPA作为治疗结肠炎相关性腹泻的候选药物提供更多理论依据。
- 胡慧王艳杨奉天龚先锋张洋徐丽红郑勇
- 关键词：溶血磷脂酸A3
- NHERF4真核表达质粒的构建及其在Caco2细胞中的表达
- 2016年
- 目的:构建人NHERF4真核表达质粒,转染人结肠癌Caco2细胞,建立能稳定携带NHERF4基因并高表达的Caco2细胞株,为后期相关实验奠定基础。方法:利用真核表达载体pIRES2-ZsGreen1构建人NHERF4cDNA真核表达质粒,脂质体介导质粒pIRES2-ZsGreen1和NHERF4表达质粒pIRES2-ZsGreen1-NHERF4转染人结肠癌细胞Caco2,荧光显微镜观察判断转染结果。G418筛选稳转细胞株,共聚焦免疫荧光观察NHERF4的亚细胞定位表达,蛋白免疫印迹实验观察NHERF4蛋白表达。结果:荧光显微镜观察证实质粒pIRES2-ZsGreen1和NHERF4表达质粒pIRES2-ZsGreen1-NHERF4均成功转染Caco2细胞。蛋白免疫印迹实验证实转染pIRES2-ZsGreen1-NHERF4质粒的Caco2细胞高表达NHERF4蛋白。结论:成功建立稳定表达外源NHERF4蛋白的pIRES2-ZsGreen1-NHERF4Caco2细胞株,为能进一步分析研究NHERF4与MPR2在结肠癌多药耐药机制中的作用奠定了前期实验基础。
- 胡慧王艳杨奉天龚先锋张洋徐丽红郑勇
- 关键词：真核表达质粒结肠癌免疫荧光
