赵玲娜
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生政治法律更多>>
- 实时荧光定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立被引量：6
- 2016年
- 本试验旨在建立一种快速、灵敏的诊断小反刍兽疫的方法。本研究通过RT-PCR方法扩增小反刍兽疫病毒N基因,连接到pMD19-T克隆载体上,构建质粒标准品。根据GenBank中中国流行毒株及Nigeria 75/1疫苗株N基因保守序列设计引物,利用SYBR GreenⅠ法进行实时荧光定量PCR,建立标准曲线,并进行特异性试验、敏感性试验和重复性试验。结果表明,在2.82×100-2.82×10^7拷贝/μL范围内,Ct值与质粒拷贝数对数值呈良好的线性关系,标准曲线线性关系R2值为0.992;其他病毒无特异性扩增曲线,特异性良好;批内变异系数为0.27%-2.77%,批间变异系数为0.41%-3.39%,重复性较好;检测灵敏度可达2.82拷贝/μL,是普通PCR的1 000倍。用该方法对12份cDNA样品进行检测,9份为阳性,3份为阴性,而普通PCR检测,7份为阳性,5份为阴性,说明本方法比普通PCR灵敏度高。本检测方法的建立对快速、灵敏诊断小反刍兽疫,防止疫情的扩散具有重要意义。
- 赵玲娜金红岩梁琳李刚
- 关键词：小反刍兽疫病毒实时荧光定量RT-PCRSYBR
- 小反刍兽疫病毒受体细胞系的构建及应用被引量：2
- 2017年
- 为建立一株稳定表达山羊淋巴细胞活化分子(signaling lym phocyte activation molecule,SLA M)的细胞系,给研究小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)感染机制、病毒的分离和疫苗生产等奠定基础,本研究采用PCR扩增了SLAM基因,并将其胞外区连接至pD isplay载体,构建了重组质粒pDisplayg SLAM;利用p Display载体的G 418抗性及抗SLAM单克隆抗体,筛选表达gSLAM的Vero-E6细胞系,对该细胞系进行PCR鉴定、间接免疫荧光试验和Western-blot鉴定。采用该细胞系分离PPRV,并与Vero-E6细胞同时吸附PPRV分离株和疫苗株病毒后进行比较。结果,成功筛选出表达g SLAM的Vero-E6细胞系gSLAM/Vero-E6,并通过PCR方法成功扩增出gSLAM基因。通过间接免疫荧光试验和Western-blot鉴定,gSLAM基因成功表达在细胞膜上,并分离出一株PPRV。gSLAM/Vero-E6细胞系和Vero-E6细胞同时吸附PPRV分离株和疫苗株后,gSLAM/Vero-E6细胞系较Vero-E6细胞产生更明显的细胞病变。上述研究结果表明,gSLAM/Vero-E6细胞系对PPRV是高度敏感,为PPRV的后续研究提供了试验材料。
- 金红岩封家旺梁琳赵玲娜隋修锟史利军侯绍华李刚
- 关键词：小反刍兽疫病毒细胞系
- DNA条形码技术在鸟类物种鉴定中的应用
- 使用羽毛进行鸟类物种鉴定可以简化鸟类基因组DNA的样品处理，特别是当鸟的年龄或大小导致血液或组织样品DNA提取困难时.羽毛可以用来提取高质量的基因组DNA.首先，对羽毛羽根和近端部分进行裂解处理，再用AxyPrep体液病...
- Zheney Makay赵玲娜金红岩隋修馄梁琳薛晓娟李刚
- 关键词：禽流感羽毛DNA条形码技术野生鸟类
- 鸭疫里氏杆菌病的实验室诊断
- 15年从北京某养鸭场的疑似鸭疫里氏杆菌病病死鸭中采集样本,经分离培养、染色镜检、生化试验及PCR检测,证实为鸭疫里氏杆菌.该菌不发酵多数糖类,吲哚试验、MR试验、VP试验均为阴性;不产生H2S,不还原硝酸盐,尿素酶试验和...
- 赵玲娜李刚杨林佩温施慧隋修锟薛晓娟梁琳
- 关键词：鸭疫里氏杆菌病
- 抗小反刍兽疫病毒P蛋白单链抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2016年
- 为制备抗小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria75/1株P蛋白的单克隆抗体并获得其单链抗体(ScFv)基因,利用纯化的PPRV和带有GST标签的重组P蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗PPRV P蛋白的单克隆抗体(m Ab),从分泌抗PPRV P单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,扩增VH基因和VL基因,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)法获得单链抗体全长基因,并克隆至原核表达载体p ET32a(+)中,再将构建的重组质粒p ET32a-ScFv-3A6转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导单链抗体重组蛋白表达。结果,获得了4株能稳定分泌抗PPRV P蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株3A6、1P4、3F8和1P1,对m Ab 3A6进行了Western-blot鉴定和间接免疫荧光试验(IFA)。成功扩增了杂交瘤细胞株3A6的ScFv基因,获得了ScFv-3A6重组蛋白,大小为47 ku,证实该重组蛋白具有较强的抗原结合活性。上述研究结果表明,本研究获得了4株能稳定分泌抗PPRV P蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,并成功扩增到杂交瘤细胞株3A6的ScFv基因,实现了原核表达,为PPR防控新措施的研究奠定了基础。
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- 关键词：小反刍兽疫病毒单链抗体原核表达
- 表达水泡性口炎病毒双血清型G蛋白重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性分析被引量：1
- 2015年
- 旨在以人5型复制缺陷型腺病毒为表达载体,构建表达水泡性口炎病毒(VSV)双血清型G蛋白的重组腺病毒。利用融合PCR技术扩增VSV-IN-G-NJ-G基因并将其克隆至腺病毒穿梭载体pacAd-CMV K-NpA中。通过PacⅠ酶线性化后,与同样经PacⅠ酶线性化的骨架载体pacAd5 9.2-100共转染AAV-293细胞,获得重组腺病毒rAd-VSV-IN-G-NJ-G。该重组腺病毒于AAV-293细胞连续传代至20代效价稳定。经间接免疫荧光和Western blot检测,G蛋白获得正确表达。将重组腺病毒接种小鼠,利用间接ELISA及病毒中和试验检测其体液免疫水平,结果显示可诱导产生VSV特异性抗体,其中和抗体水平在1∶32;利用淋巴细胞增殖试验检测细胞免疫水平,结果表明可以引起接种小鼠强烈的淋巴细胞增殖。构建的重组腺病毒免疫小鼠后可以引起一定的体液免疫和细胞免疫反应,为表达VSV糖蛋白重组腺病毒疫苗的深入研究奠定了基础。
- 薛晓娟金红岩赵玲娜隋修锟Zheney Makay李刚
- 关键词：VSVG蛋白重组腺病毒小鼠
- 利用生物信息软件分析安徽小反刍兽疫病毒的遗传进化关系
- 2014年4月安徽A1地和A2地发生不明羊疫情,根据临床症状和剖检变化怀疑为小反刍兽疫感染。利用特异性引物进行PPRV N基因片段RT-PCR反应,从A2地病羊组织中检测到PPRV核酸。针对样本病原核酸N基因片段进行结果...
- 赵玲娜李刚隋修锟薛晓娟梁琳
- 关键词：小反刍兽疫遗传进化分析
- 文献传递
- 小反刍兽疫病毒H基因过表达对病毒增殖的影响被引量：3
- 2016年
- 为研究小反刍兽疫病毒H基因过表达后对病毒增殖的影响,根据G en Bank中小反刍兽疫病毒疫苗株Nigeria 75/1 H基因序列,设计1对引物扩增H基因全长编码区序列,并将其连接至真核表达载体p EGF P-C 3上,经鉴定正确后转染CHS-20细胞,并通过R T-PCR、荧光观察及W estern-blot分别在m RNA和蛋白水平检测H基因的表达。结果表明,H基因在CHS-20细胞内得到了表达。将p EGFP-C3-PPRV H重组质粒、空载体p EGFP-C3转染CHS-20细胞,待H基因表达后,接种PPRV Nigeria 75/1,病毒增殖一定时间后,以β-actin作为内参基因,采用相对荧光定量RT-PCR法研究病毒增殖量的变化。结果表明,相对于未转染及转染空载体p EGFP-C3的细胞,转染p EGFP-C3-PPRV H重组质粒的细胞PPRV增殖量得到了提高,且差异显著(P<0.05),这说明在CHS-20细胞中过表达PPRV H基因能促进PPRV增殖。
- 赵玲娜金红岩薛晓娟隋修锟ZHENEY Makay梁琳李刚
- 关键词：小反刍兽疫病毒H基因基因过表达病毒增殖
