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多层螺旋CT低剂量扫描对肺及气道相关定量评价研究被引量：10: 2012年; 目的探讨多层螺旋CT低剂量扫描检查对肺和气道定量评价的可靠性。方法采用多层螺旋CT机,初诊时对52例患者胸部用250mA常规剂量扫描,复诊时分三组,分别为17例、17例及18例,分别用100mA、50mA和25mA管电流进行胸部低剂量扫描;测量剂量长度乘积(DLP)、平均肺密度、肺容积及体素指数。将68例患者分为四组,每组17例分别采用250mA、100mA、50mA和25mA管电流进行全肺扫描,由3位医师对右肺上叶尖段支气管横断面影像进行评分,并进行比较。结果随着管电流的降低,辐射剂量随之下降,对于平均肺密度和肺容积测量不产生影响,但对于体素指数的测量则产生影响,100mA、50mA、25mA与250mA时相较测得的体素指数均较高,但各组之间呈良好的正相关,r值范围0.938～0.996,均P<0.001;管电流为100mA、50mA时支气管评分与250mA时无差别,再降低则支气管评分出现差别,评分减低,但管电流使用50mA以上时,评分均在3分以上,可以满足对支气管的评价。结论电流下降时,辐射剂量明显减少,低管电流扫描可用于肺测量,但支气管评价时,管电流宜用50mA以上。; 李一鸣马国林万兵伊博琳; 关键词：体层摄影术 X线计算机支气管

慢性粒细胞白血病bcr-abl融合基因克隆与真核细胞表达的研究被引量：7: 2003年; 目的　为研究慢性粒细胞白血病 (CML)的肿瘤基因疫苗 ,克隆和表达CML的bcr abl融合基因片段。方法　根据bcr abl(b3a2 )融合基因序列自行设计一对寡核苷酸引物 ,以CMLK5 6 2细胞株的总RNA为模板 ,通过RT PCR扩增包含bcr abl融合位点周围 4 5 0bp的基因片段 ,并将其克隆进pGEM Teasy载体。经序列测定证实其阅读框架正确后 ,将bcr abl融合基因片段正向插入真核细胞表达载体 pcDNA3 1。以脂质体介导重组质粒pcDNAbcr abl转染中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞 ,用间接免疫荧光法 (IFA)检测基因表达情况。结果　成功构建了包含融合位点基因片段的bcr abl融合基因真核细胞表达载体 pcDNAbcr abl,pcDNAbcr abl转染的CHO细胞的免疫荧光强度高于K5 6 2阳性对照细胞。结论　bcr abl融合基因片段在真核细胞中能高效表达 ,pcDNAbcr abl真核细胞表达载体的构建为进一步研究bcr abl融合基因在CML防治中的作用奠定了基础。; 姜扬文季明春钱莉龚卫娟万兵; 关键词：慢性粒细胞白血病 BCR-ABL融合基因真核细胞肿瘤基因疫苗间接免疫荧光法

双表达外源性4-1BBL/IL-15的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究被引量：1: 2007年; 为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活T细胞、NK细胞的高效途径,研究双表达外源性4-1BBL和IL-15的K562细胞刺激外周血淋巴细胞活化的能力。采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和IL-15基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-IL-15。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、IL-15分子的K562细胞(K562/4-1BBL/IL-15)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/IL15细胞和K562细胞分别用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24 h,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达。对NK细胞不仅同时检测活化性受体NKG2D的表达,还用乳酸脱氢酶释放法观察NK细胞受不同刺激细胞作用后,细胞毒活性的变化。结果显示受K562/4-1BBL/IL15细胞刺激后,T细胞CD69的表达无明显变化。γδT细胞CD69表达增长5倍。NK细胞CD69表达增长6倍,而NKG2D的表达增加1.5倍;NK细胞受K562/4-1BBL/IL15细胞作用72 h后,细胞毒活性明显提高。提示双表达4-1BBL/IL-15的K562细胞能够高效激活γδT细胞及NK细胞,有望用于肿瘤的过继免疫治疗。; 曹正锋万兵王丽珩刘丹龚卫娟季明春; 关键词：4-1BBL IL-15 K562 活化

TNFα-在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机理研究被引量：3: 2007年; 目的研究TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机制。方法建立小鼠叶酸诱导肾病模型,运用抗TNF-α多克隆抗体及对照抗体干预治疗,检测小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平,肾小管上皮细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白的表达水平。结果在CD1小鼠叶酸诱导肾病模型中,尿素氮水平显著升高,肾小管上皮细胞坏死和凋亡增加,小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平显著升高,肾皮质组织中Bcl-xL表达水平显著下降,运用抗TNF-α多克隆抗体干预治疗可保持Bcl-xL在肾组织中的表达水平,减少肾小管上皮细胞凋亡,有效减轻小鼠肾功能损害。结论TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病发病机制中具有重要作用,阻断TNF-α是治疗急性肾衰的一种潜在有效手段。; 万兵季明春龚卫娟张雁云; 关键词：TNF-Α 叶酸肾小管上皮细胞

一种优化的PCR方法——降落PCR扩增目的基因被引量：32: 2002年; 目的 :尝试用一种新的PCR方法———降落PCR扩增目的基因。方法 :在构建人CD137-hIgG1Fc - pCDNA3融合蛋白真核表达载体以及在检测HBV多聚酶YMDD变异的过程中运用降落PCR扩增目的基因。结果 :扩增出的特异性条带与目的基因大小一致。结论 :降落PCR省却了常规PCR中摸索最适退火温度的过程 ,对一些Tm值相近的PCR反应可应用一套温度程序扩增。; 万兵闫杰季明春张利宁申厚凤陈志琳; 关键词：降落PCR 退火温度基因扩增

人巨细胞病毒pp150抗原区的原核表达及初步应用被引量：4: 2004年; To make up an engineered E.coli strain for expression of antigenic determinants of pp150 of human cytomegalovirus,the gene encoding the 420-752 amino acid peptides of pp150 was amplified from human cytomegalovirus AD169 by RT-PCR and cloned into Nde I/BamHⅠ sites in pET30a.The recombinant plasmid was transformed into E.coli BL21(DE3)and a foreign protein about 35 kD were detected by SDS-PAGE and Western blotting assay.The antiserum prepared by using prokaryotic expressed product as antigen turned to be against pp150 specifically and had low neutralization effect to HCMV.; 李国才严华季明春申厚凤陈红菊焦红梅万兵; 关键词：人巨细胞病毒 PP150 抗原原核表达疫苗 HCMV

稳定表达bcr-abl融合基因片段的鼠SP2/0细胞系的建立被引量：5: 2005年; 为了建立稳定表达bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞系,从重组克隆载体pGEMbcr-abl中酶切出bcr-abl融合基因片段,并将其亚克隆进逆转录病毒载体pLXSN中。脂质体介导重组逆转录病毒载体pLXSNbcr-abl转染包装细胞PT67,采用G418筛选后获得稳定产病毒的包装细胞。收集病毒感染NIH/3T3细胞,加G418筛选后进行逆转录病毒滴度的测定,计算病毒效价为2×107CFU/ml。结果表明,收集病毒上清感染SP2/0细胞(H-2d),经G418筛选获得了稳定表达bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞株。经特异性PCR扩增和RT-PCR反应扩增,从基因组整合和基因表达水平证实获得了能稳定表达bcr-abl融合基因片段的鼠SP2/0细胞系。结论:成功建立了表达bcr-abl融合基因的鼠SP2/0细胞系,这一肿瘤细胞模型可作为研究bcr-abl基因疫苗的有效实验工具,为检验bcr-abl基因疫苗激发小鼠CTL应答的研究奠定物质基础。; 姜扬文钱莉刘伟龚卫娟万兵管俊季明春; 关键词：慢性髓性白血病基因疫苗

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万兵