宋秀梅
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蚊龄对斯氏按蚊感染伯氏疟原虫能力的影响被引量：2
- 2016年
- 目的 研究不同日龄斯氏按蚊（Anopheles stephensi）传播伯氏疟原虫（Plasmodium berghei）能力的变化以及可能机制。 方法 选取4日龄和25日龄雌性斯氏按蚊，用原虫血疟为4%～8%的伯氏疟原虫感染BALB/c小鼠饲喂蚊虫，感染后8 d解剖蚊虫肠道，镜检计数蚊虫肠道中疟原虫卵囊数，比较4日龄和25日龄蚊虫对疟原虫易感性的变化。选取感染前4日龄和25日龄雌性斯氏按蚊，采用LB平板培养法检测其体内可培养共生菌的量，用实时定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）方法检测其体内的共生菌总量。选取感染前4日龄和25日龄雌性斯氏按蚊，采用qPCR检测其体内天蚕抗菌肽1（cecropin，CEC1）、CEC3、防御素（defensin，DEF；gambicin，GAM）、攻击素（attacin，ATT）以及一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）、双氧化酶（dual oxidase，DUOX）和含硫酯蛋白1（thioester protein 1，TEP1）等主要免疫效应因子的表达水平。 结果 感染伯氏疟原虫后8 d，4日龄斯氏按蚊中肠道疟原虫卵囊中位数是139，25日龄按蚊卵囊数中位数是3，4日龄按蚊伯氏疟原虫的感染密度是25日龄的46倍（P〈0.01）。qPCR结果显示，25日龄蚊虫体内共生菌总量为4日龄蚊虫的1.5倍，差异有统计学意义（P〈0.05 ）；LB平板培养法结果显示，25日龄肠道可培养共生菌平均为28 889个菌落形成单位（colony forming units，cfu），是4日龄（3 200 cfu）的9倍，差异有统计学意义（P〈0.01）。25日龄斯氏按蚊体内NOS基因表达量是4日龄的2.4倍（P〈0.01），抗菌肽ATT、DEF、CEC3、CEC1的表达量分别为4日龄的27%、48%、14%、61%，差异均有统计学意义（P〈0.05）；4日龄与25日龄斯氏按蚊体内GAM、DUOX、TEP1的表达量均未发生显著变化。 结论 随斯氏按蚊日龄增加，斯氏按蚊抗菌肽水平发生显著下调，体内共生菌增多，NOS表达量上调，按蚊抵抗疟原虫的能�
- 宋秀梅王敬文
- 关键词：年龄免疫反应共生菌伯氏疟原虫
- 斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白S2调节共生菌稳态的功能分析
- 2023年
- 目的研究斯氏按蚊肽聚糖识别蛋白S2(PGRP‑S2)的功能及其对按蚊体内共生菌稳态的影响。方法将羽化后2~4日龄雌性斯氏按蚊分为对照组(喂食10%蔗糖溶液)、感染血组(叮咬原虫血症为4%~8%的伯氏疟原虫ANKA感染小鼠)和健康血组(叮咬健康小鼠),每组60只,饱血24 h后分离中肠和其余组织,用Trizol法提取RNA,实时荧光定量PCR(RT‑qPCR)检测pgrp⁃s2基因的相对转录水平。将羽化后0~1日龄雌性斯氏按蚊分为对照组(喂食10%蔗糖溶液)与抗生素处理组(喂食含有青霉素、链霉素和庆大霉素的10%蔗糖溶液),每组30只,喂养5 d后分离中肠和其余组织,RT‑qPCR检测pgrp⁃s2基因的相对转录水平。将雌性斯氏按蚊分为pgrp⁃s2敲低组和绿色荧光蛋白基因(gfp)对照组,每组60只,分别注射pgrp⁃s2的双链RNA(dsRNA)和gfp基因dsRNA(69 nl/只),2 d后每组取蚊虫提取RNA,RT‑qPCR检测pgrp⁃s2的相对转录水平,提取DNA并使用16S rRNA特异性引物PCR检测蚊虫体内共生菌总量。分别取30只pgrp⁃s2敲低组和gfp对照组按蚊,用107个/ml摩氏摩根氏菌液浸湿棉球喂养5 d后,提取RNA,RT‑qPCR检测获得共生菌16S rRNA相对总量和摩氏摩根氏菌的相对数量;提取pgrp⁃s2敲低组和gfp对照组按蚊中肠组织RNA,转录组测序后进行聚类分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能注释和富集分析。使用SMART网站预测分析PGRP‑S2氨基酸序列后利用CLC Main Workbench软件进行比对。克隆按蚊pgrp⁃s2基因,利用昆虫杆状病毒表达系统(pFastbacⅠ)在SF9细胞中表达PGRP‑S2重组蛋白,Western blotting检测蛋白表达情况。取10、20、40μg/ml纯化后的PGRP‑S2重组蛋白溶液(以蛋白缓冲液为对照)分别与40μg赖氨酸(Lys)型肽聚糖和二氨基庚氨酸(DAP)型肽聚糖孵育,每间隔12 h测定相对吸光度(A540值)以判定肽聚糖的降解情况,验证PGRP‑S2的酰胺酶活性。结果RT‑qPCR结果显示,吸血后24 h,感染血组�
- 王之谦王敬文宋秀梅
- 关键词：斯氏按蚊共生菌真核表达
