黄建坤
- 作品数：8 被引量：63H指数：4
- 供职机构：厦门大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：福建省重大科技项目福建省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术更多>>
- TFF3作为肿瘤生物标志物的研究被引量：5
- 2015年
- 三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)为三叶因子多肽家族成员之一,与肿瘤的发生发展密切相关,可促进肿瘤的侵袭、转移与血管生成。作为肿瘤生物标志物,TFF3对胃癌诊断具有较高的敏感度和特异性,优于胃蛋白酶原(Pepsinogen,PG)标志物,是胃癌非侵入性筛查潜在的理想标志物,并可应用于胃肠道肿瘤化疗药效与预后的评价,同时,TFF3应用于子宫内膜样腺癌及甲状腺微小浸润性滤泡癌的病理诊断也具有重大临床价值。TFF3作为新型肿瘤生物标志物,在肿瘤分子诊断与靶向、个体化治疗领域倍受临床关注。
- 王琳黄建坤
- 关键词：肿瘤生物标志物
- 丝蛋白纤维生物材料与组织工程被引量：9
- 2004年
- 目的 介绍并综合分析丝蛋白纤维生物材料的研究进展及其在组织工程中的应用。 方法 广泛查阅国外近期关于丝蛋白纤维生物材料的研究文献 ,着重分析丝蛋白纤维生物材料的特性及可能的应用。 结果 丝蛋白纤维不仅与天然胶原一样起支持细胞黏附、分化和生长的作用 ,而且是生物相容性良好的、具有独特机械特性并能在较长时间内缓慢降解的一类新型生物材料。 结论 丝蛋白纤维生物材料可以作为体外细胞培养的合适基质 ,并在组织工程中有广泛的应用前景。
- 黄建坤李敏
- 关键词：丝蛋白纤维生物材料细胞黏附细胞生长
- 人肠三叶因子串联亲和层析表达载体的构建与表达被引量：1
- 2015年
- 背景:人肠三叶因子为新型的生长因子,可促进细胞生长与迁移,并使细胞具有很强抗凋亡能力,在维持胃肠黏膜完整性、黏膜保护与损伤修复发挥着重要作用,与胃肠道等多个肿瘤的发生发展密切相关。人肠三叶因子(三叶因子3)在黏膜修复及作为肿瘤标志物有着广阔的临床应用前景,但其相互作用蛋白及具体分子机制不明确。目的:构建和表达带串联StrepI I和6×His两个蛋白标签的三叶因子3重组蛋白,以进一步利用研究体内蛋白质相互作用的串联亲和层析技术纯化获得三叶因子3相互作用蛋白。方法:化学合成用于串联亲和层析的标签(StrepI I-TEV-6×His)基因序列,并以三叶因子3表达载体为模板,PCR扩增三叶因子3基因序列,通过Xba I位点实现标签与三叶因子3基因序列的融合,并将标签置于三叶因子3蛋白的C端,融合基因通过EcoR I+Hind III酶切,克隆于表达载体pC DNA3.0,构建了三叶因子3串联亲和层析表达载体pT FF3-C-StH。表过载体通过脂质体瞬时转染胃癌细胞AGS,采用Western Blot检测重组蛋白的表达。结果与结论:成功构建了三叶因子3串联亲和层析表达载体pT FF3-C-StH,经酶切和测序鉴定载体构建完全正确。表达载体成功转染胃癌细胞株,并获得重组蛋白的表达,通过Western Blot检测证明表达产物具有很好的抗原性和特异性,为串联亲和层析纯化三叶因子3相互作用蛋白提供重要的实验基础和工具。
- 黄建坤王琳裴一花刘国彦
- 关键词：TFF3标签
- RGD-蜘蛛拖丝蛋白聚合物的生物合成与纯化被引量：25
- 2004年
- 蜘蛛拖丝是自然界性能最好的蛋白质纤维之一 ,其独特的机械性能 ,良好的生物相容性和缓慢的可降解性 ,作为生物材料在组织工程领域有着潜在的应用前景。本文根据蜘蛛拖丝蛋白序列高度重复的特点 ,引入与细胞黏附有关的精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 (RGD)三肽 ,化学合成RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因单体 ,通过头尾相连倍加构建策略 ,首次得到RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因 8聚体和 16聚体。分别将这两种多聚体与原核高效表达载体 pET 30a(+)连接 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) pLysS ,用IPTG诱导表达。SDS PAGE图谱显示表达产物分子量分别为 35KD和 6 0KD ,与理论值基本相吻合 ;蛋白质印迹分析这两种表达产物均显示特异性。文中对表达产物的纯化方法进行了初步的摸索。
- 李敏黄建坤涂桂云黄曦
- 关键词：RGD基因多聚体IPTG纯化
- 蜘蛛拖丝蛋白基因的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：31
- 2002年
- 蜘蛛大壶腹线产生的拖丝是非常优良的纤维蛋白 ,具有独特的强度和弹性。基于拖丝蛋白高度重复序列和部分cDNA序列 ,合成蜘蛛拖丝蛋白基因单体 ,通过头尾相连的构建策略 ,得到拖丝蛋白多聚体 ,与原核高效表达载体pET30a(+)连接 ,转化大肠杆菌BLR(DE3) ,用IPTG诱导表达。表达产物经His .Bind树脂金属螯合亲和层析一步纯化 ,纯度达 90 %以上 ,表达量为 2 0mg L。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为 37kD 。
- 李敏章文贤黄智华黄建坤
- 关键词：蜘蛛大肠杆菌
- RGD-蛛丝蛋白生物合成与丝膜制备
- 该文将蜘蛛丝中最具有特殊力学性能的拖丝作为高性能生物材料的研究对象,利用基因工程方法设计、合成与表达含有细胞粘附位点RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)的重组蜘蛛拖丝蛋白,通过该室建立的蛛丝蛋白基因工程菌高密度发酵和纯化工...
- 黄建坤
- 关键词：RGD生物材料
- 文献传递
- 应用水痘-带状疱疹病毒报告细胞系筛选抗病毒药物的研究被引量：2
- 2011年
- 目的应用构建的水痘．带状疱疹病毒（VZV）报告细胞系MVgG建立一种筛选抗VZV药物的新方法。方法将VZV疫苗株（vOka）的无细胞病毒液（CFV）直接感染MV9G细胞2h后移除（CFV直接感染法），或将感染vOka株的Mewo细胞（含带细胞病毒，CAV）与MV9G细胞共培养48h（CAV共培养法），以激发MV9G细胞表达报告基因萤火虫荧光素酶。在培养基中加入肝素、磷酸甘露糖（M-6-P）、阿昔洛韦（ACV）、白藜芦醇、roscovitine等抗病毒药物，通过比较加药前后MV9G细胞荧光素酶活性变化来分析药物对VzV的作用。结果抗病毒药物各浓度组不同程度地抑制CFV直接感染和／或CAV共培养激发的MV9G细胞荧光素酶活性，荧光素酶活性的降低与平行对照组中病毒蚀斑数的降低一致。抗病毒药物中肝素、M-6-P和roscovitine2．5μmol／L组抑制CFV激发荧光素酶的作用强于抑制CAV激发荧光素酶的作用，而ACV和白藜芦醇抑制CAV激发荧光素酶的作用强于抑制CFV激发荧光素酶的作用。ACV抗药株Kanno和rOkaYSR的CAV与MVgG细胞共培养均激发其强表达荧光素酶，但ACV抑制抗药株激发荧光素酶50％时浓度（IC50）显著高于抑制敏感株pOka和CaGu的IC50。结论CFV直接感染法和CAV共培养法分别有助于筛选针对VZV感染早期和后期的药物，利用MV9G细胞建立的报告细胞法可为抗VzV药物筛选和作用机制研究提供一种简便、快速、敏感和高通量的新方法。
- 李晓霞宋维芳王官清卢珍玲黄建坤王合井上直树
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒白黎芦醇ROSCOVITINE
- 蜘蛛拖丝蛋白基因亚克隆与全序列测序对其结构与功能了解的意义被引量：4
- 2004年
- 目的:了解蜘蛛拖丝蛋白基因的结构,利用基因工程技术制备人工蛛丝纤维,开发具有独特的机械特性和良好生物相容性的新型蜘蛛丝纤维生物材料。方法:通过结合限制性内切酶消化和超声波机械剪切蜘蛛拖丝蛋白全基因克隆ScosDS-1DNA,制备的DNA片段分别与载体pUC19连接,构建了4个拖丝蛋白基因亚克隆文库。筛选、鉴定亚克隆文库的重组子,选取大小合适的重组子进行测序。结果:筛选的重组子数目超过400个,成功完成的测序反应数近500次,总读长已为ScosDS-1全长的5倍。结论:初步进行了ScosDS-1全序列拼接,以进一步了解拖丝蛋白基因的结构与功能,为合理的设计化合成基因,人工仿制蛛丝纤维奠定了基础。
- 黄建坤黄智华李敏
- 关键词：亚克隆基因工程生物材料基因结构
