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CyclinE-CDK2分子活性调节机制被引量：11: 2006年; Cyc linE-CDK2是细胞周期G1/S期的转折中的关键调控因子,其分子活性受各种细胞因子、磷酸化/去磷酸化修饰、泛素介导的蛋白降解途径及细胞周期依赖性蛋白激酶抑制物(cyc lin-dependent k inase in-h ib itor,CK Is)等多种方式构成的精细调控网络调节。其活性失调将导致细胞增殖紊乱甚至肿瘤的发生。认识Cyc linE-CDK2分子活性调节机制有助于理解它在肿瘤形成中的作用。; 陈济宋方洲; 关键词：细胞周期蛋白E

人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立被引量：2: 2007年; 目的:构建人MCHR2真核表达载体,转染HEK293细胞,建立稳定转染细胞系.方法:采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和PCR鉴定后,脂质体转染法转染HEK293细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR,WesternBlot及免疫荧光法检测MCHR2的表达.结果:成功构建了pcDNA3.1-MCHR2真核表达载体并已稳定转入HEK293细胞,建立了稳定转染细胞系,成功地表达目的基因.结论:稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究MCHR2的功能提供了良好的实验基础.; 杨俊霞石华魏丽丽袁成福陈济易发平马永平宋方洲; 关键词：真核表达载体转染基因表达

人白介素24cDNA克隆、突变纠正和原核表达被引量：3: 2007年; 目的获取人白介素24(IL-24)cDNA,构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白GST-IL-24。方法以人外周血单核细胞(PBMC)总RNA为模板,RT-PCR扩增IL-24 cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,测序结果显示在IL-24 cDNA第223位G→A,370位T→C,从而导致其编码蛋白的氨基酸发生改变:A75T,H124Y,通过二次PCR将其纠正,重组载体pGEX-IL-24转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE,Western blot检测显示有融合蛋白GST-IL-24表达。结果通过RT-PCR及二次PCR得到人IL-24 cDNA,构建其原核表达载体,经IPTG诱导在相对分子量约为50 000处有融合蛋白表达。结论IL-24的重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)可以表达GST-IL-24融合蛋白。; 魏丽丽李成华袁成福陈济丁嵩涛刘革力易发平宋方洲; 关键词：白介素24 二次PCR 融合蛋白克隆原核表达

细胞周期素E的干扰RNA对HeLa细胞增殖的抑制作用被引量：7: 2007年; 目的利用RNAi技术下调宫颈癌HeLa细胞中cyclin E mRNA水平，研究对HeLa细胞增殖及周期的影响。方法构建针对cyclin E基因的RNAi真核表达载体，脂质体转染HeLa细胞下调细胞中cyclin E mRNA含量。RT-PCR检测抑制效果；MTr检测细胞生长情况；流式细胞仪分析HeLa细胞周期变化。结果成功构建针对cyclin E基因的RNAi真核表达载体，可以特异下调cyclin E mRNA含量，并抑制细胞恶性增殖。细胞周期分析显示干扰使细胞停留在G0-G。期，S期细胞明显减少。结论RNAi能特异地下调HeLa细胞中cyclin E mRNA含量，抑制宫颈癌细胞恶性增殖，提示cyclin E可能成为宫颈癌基因治疗中的一个新的靶点。; 陈济潘巍巍成海恩魏丽丽袁成福石华易发平马永平宋方洲; 关键词：RNA干扰细胞周期素E HELA细胞细胞周期

人黑色素浓集激素1型受体真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立: 2007年; 目的构建人黑色素浓集激素1型受体(MCHR1)真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、Westernblot及免疫荧光法检测MCHR1的表达。结果成功构建了pcDNA3.1(+)/MCHR1真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR1功能奠定了良好的实验基础。; 袁成福杨俊霞魏丽丽石华陈济易发平马永平宋方洲; 关键词：真核表达载体 CHO细胞转染

Cyclin E基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定被引量：3: 2008年; 根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向(+797^+819)位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59%.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.; 陈济潘巍巍魏丽丽袁成福易发平卜友泉宋方洲; 关键词：RNA干扰细胞周期蛋白E HELA细胞细胞周期

人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立被引量：3: 2007年; 目的构建人MCHR2真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、W estern b lot及免疫荧光法检测MCHR2的表达。结果成功构建了pcDNA3.1(+)/MCHR2真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达目的基因。结论真核表达载体成功构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR2的功能奠定良好的实验基础。; 袁成福杨俊霞魏丽丽石华陈济宋方洲; 关键词：真核表达载体基因表达

MCHR2在CHO细胞中的稳定表达及其信号通路分析被引量：3: 2008年; 目的构建人MCHR2基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并分析MCHR2介导的信号转导通路。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,定向插入到真核表达载体pcDNA3·1(+),经酶切和测序鉴定后,脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,经RT-PCR和Western blot鉴定后,通过测定细胞内cAMP、Ca2+浓度的改变分析MCHR2的信号转导通路。结果成功构建了pcDNA3·1-MCHR2真核表达载体并稳定转入CHO细胞,建立了稳定转染细胞系,成功地表达目的基因,MCH作用于MCHR2后不影响细胞内cAMP生成,可促使细胞内钙库释放Ca2+,进而使胞内Ca2+浓度出现明显而短暂的升高,提示MCHR2的信号转导通路主要是与Gq蛋白偶联。结论人MCHR2的稳定表达和信号转导通路分析为进一步体外研究MCHR2的功能提供了良好的实验基础。; 杨俊霞袁成福石华魏丽丽陈济易发平马永平宋方洲; 关键词：真核表达载体稳定转染基因表达信号转导

人MCHR2基因shRNA真核表达载体构建及鉴定: 2007年; 目的构建针对人黑色素浓集激素受体2(MCHR2)的shRNA真核表达载体,并在人胚肾293(HEK293)细胞中观察其对MCHR2基因表达的影响。方法根据MCHR2基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定。用脂质体将重组质粒转染到HEK293细胞中,观察其在mRNA和蛋白水平对MCHR2的影响。结果通过酶切鉴定和序列测定,成功构建四条表达短发夹RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到HEK293细胞株中。四条shRNA真核表达载体在mRNA水平对MCHR2抑制率分别为54.9%、66.4%、56.9%、45.8%;在蛋白水平对MCHR2抑制率分别为62.0%、81.0%、73.3%、44.2%。结论针对人MCHR2的shRNA真核表达载体成功构建及鉴定为进一步研究MCHR2功能奠定了良好的基础。; 袁成福杨俊霞魏丽丽刘革力石华陈济易发平马永平宋方洲; 关键词：短发夹RNA 真核表达载体细胞转染

RNAi抑制HeLa细胞中细胞周期素E基因表达的研究: 目的及意义：利用RNAAi(RNA interference)技术下调宫颈癌HeLa细胞中CyclinE(细胞周期素蛋白E)基因表达研究对HteLa细胞增殖及周期的影响。为宫颈癌的基因治疗提供实验基础和理论依据。 ...; 陈济; 关键词：RNA干扰细胞周期蛋白E HELA细胞细胞周期基因治疗; 文献传递

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陈济

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