朱华 作品数:9 被引量:101 H指数:5 供职机构: 广西医科大学 更多>> 发文基金: 广西省自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 农业科学 更多>>
实时荧光定量PCR检测三七SS基因表达的初步实践 被引量:5 2008年 运用含有SYBR Green I的Real Time RT-PCR法分析SS基因在一年生三七根、茎、芦头3个部位中转录水平的相对表达差异。统计分析表明SS基因在根中的表达量最高。本研究取得了特异性高、重复性好的结果,标准曲线斜率均在-3.33~-4范围内,扩增效率均在95%~100%之间,熔解曲线分析显示产物特异性的单一峰,为Real Time RT-PCR技术用于三七植物基因的差异表达分析建立了相应的技术平台。 朱华 吴耀生关键词:REAL TIME RT-PCR 乳腺癌相关的新型人雌激受体hERα剪接变体ERα30的克隆及其功能和作用机制的研究 选择性剪接从相同的基因产生许多不同的mRNA(剪接变体),使得有限数量的基因可以编码多种不同的蛋白质。越来越多的证据表明,剪接变体在癌症的发展,临床诊断和治疗中均具有重要作用。从20世纪90年代初到现在,研究者们已经发现... 朱华关键词:乳腺癌 基因克隆 蛋白功能 三七鲨烯合酶基因在三七根、茎、芦头中的转录表达与三萜皂苷合成 被引量:23 2007年 三萜皂苷是三七、人参等重要药用植物的主要有效成分.采用改进的异硫氰酸胍法提取到三七RNA,经RT-PCR克隆技术获得三七三萜合成通路关键酶之一鲨烯合酶(squalene synthase,SS)cDNA,长1270 bp,读码框架编码415个氨基酸.比对分析表明,推衍的三七SS氨基酸序列与人参、积雪草、青蒿、拟南芥和水稻SS的一致性分别为98%、89%、81%、78%和71%.利用实时荧光定量RT-PCR技术对三七根、茎、芦头的SS转录表达研究发现,一年生三七根SS基因转录表达量最高,高于茎和芦头的表达;但总皂苷含量是:芦头>叶>根>茎.可能与SS之后其它三萜合成关键酶的活性差异或/和三萜合成后的定向输送及累积有关. 吴耀生 朱华 李珅 赵瑞强 蓝秀万关键词:鲨烯合酶 三萜皂苷 CDNA克隆 转录 实时荧光定量RT-PCR 三七鲨烯合酶基因的克隆及其功能的初步研究 本文对三七鲨烯合酶基因的克隆及其功能进行了研究。文章对三七SS基因及GAPDH基因进行体外扩增、克隆及序列分析;探索了一种快速测定三七总皂甙含量的方法,并测定一年生三七根、茎、芦头、叶组织中总皂甙的含量;提取各样品总RN... 朱华关键词:基因克隆 鲨烯合酶 文献传递 三七植物GAPDH基因克隆及序列分析 被引量:31 2006年 采用改进的异硫氰酸胍法提取高质量三七总RNA,运用RT-PCR方法克隆了三七GAPDH基因的部分序列,长度为627 bp,编码209个氨基酸,为半定量RT-PCR以及Real-time RT-PCR等技术在三七植物研究中的应用提供了条件.氨基酸序列比对结果表明,该序列与拟南芥、烟草、人参的GAPDH氨基酸序列的同源性分别为91%、93%、95%;核苷酸序列的同源性分别为82%、84%、85%. 朱华 李珅 赵瑞强 吴耀生关键词:克隆 基因芯片技术在药用植物研究中的应用 被引量:10 2005年 基因芯片技术是近年来迅速发展起来的一项生物技术。由于其具有大规模、高通量、平行检测等优势,已在多个领域得到广泛应用。根据新近的研究资料讨论该技术在药用植物中最新的应用情况,包括分离差异表达的基因及发现新基因、功能基因组学的研究、中药的鉴定、转基因药用植物的检测、药用植物作用分子机制及病害的相关研究等内容,并简要介绍其存在的问题及未来应用的展望。 朱华 吴耀生关键词:基因芯片技术 药用植物 中药鉴定 三七法呢基焦磷酸合酶的基因克隆及序列分析 被引量:14 2006年 目的对三七法呢基焦磷酸合酶(FPS)进行基因克隆及序列分析。方法采用cDNA末端快速扩增法,以三七根总RNA为模板扩增出三七FPS基因。结果序列分析表明,所克隆的cDNA序列全长1 409 bp,开放阅读框共编码343个氨基酸残基,推测的氨基酸序列与积雪草、灰白银胶菊、黄花蒿的FPS的氨基酸序列同源性最高,分别达95%、87%、86%。结论首次分离并报道了三七FPS cDNA克隆,为进一步研究三萜皂苷生物合成机制及其在提高植物药用价值方面的应用奠定基础。 陈莉 蓝秀万 李珅 朱华 吴耀生三七总RNA提取方法的对比研究 被引量:23 2005年 比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas'RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性。结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA。RT-PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性。这2种方法具有快速、简单、有效的特点。 陈莉 朱华 李糰 蓝秀万 黄勇奇 吴耀生关键词:总RNA 三七与其它植物FPS序列的比较分析 被引量:1 2007年 三萜皂甙是中药三七(Panax notoginseng)的主要有效成分,为阐明三七三萜皂甙合成途径中法呢基焦磷酸合酶(FPS)的结构特征,采用RT-PCR及3-'RACE和5′-末端分析法,对三七FPS进行克隆,获得三七FPS cDNA全长,已提交GenBank,登录号为DQ059550;结合生物信息数据库及相关分析软件,对三七根FPS进行性质预测,并与GenBank中记载的植物FPS进行比对分析,构建了植物FPS系统进化树,进行聚类关系分析,根据FPS聚类关系将这些植物异戊二烯类物质合成途径的产物分组.结果表明,植物FPS有2个保守核心区,分别为DDIMD和QVQDDYLD;比对分析及构建的系统进化树表明,三七与人参、积雪草的FPS序列一致性分别为99%、95%,其三萜物质结构也相似. 吴耀生 陈莉 蓝秀万 朱华 赵瑞强关键词:异戊二烯 三萜 系统进化树