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带myc标签的人造血相关PBX相互作用蛋白真核表达载体的构建及其功能研究被引量：1: 2014年; 目的:构建带myc标签的造血相关PBX相互作用蛋白(HPIP)的真核表达载体,获得myc-HPIP融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的pcDNA3.0-HPIP质粒为模板,采用PCR技术扩增HPIP编码序列,将其插入pXJ-40-myc载体,通过Western印迹检测表达情况;将重组质粒与空载体分别转染人肝癌HepG2细胞,通过Western印迹检测其对AKT、ERK信号通路中AKT、ERK磷酸化水平的影响。结果:双酶切和测序结果表明myc-HPIP真核表达质粒构建成功,转染HepG2细胞后表达了myc-HPIP融合蛋白;Western印迹证明myc-HPIP可升高AKT、ERK的磷酸化水平。结论:构建了带myc标签的人HPIP真核表达载体,为进一步研究HPIP在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。; 李玲闫志风蒋昊冯滢滢冀全博黄蓉周丽英王鹏徐小洁叶棋浓; 关键词：真核表达

人CDK7基因真核表达载体的构建与鉴定被引量：1: 2014年; 目的构建带Myc标签的细胞周期蛋白依赖性激酶7(cyclin-dependent kinase 7,CDK7)的真核表达载体,获得其表达产物,并验证该激酶与已知相互作用蛋白P53之间的相互作用。方法应用PCR技术从人乳腺文库中扩增出CDK7全长编码区基因,将其克隆到p XJ-40载体中;继而重组质粒转染人胚肾293T细胞,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达情况;免疫共沉淀检测Myc-CDK7与FLAG-p53的相互作用。结果双酶切和基因测序鉴定显示,Myc-CDK7真核表达质粒克隆构建成功;SDS-PAGE和Western印迹结果表明,Myc-CDK7转染人胚肾293T细胞后成功表达;免疫共沉淀显示,重组Myc-CDK7与已知相互作用蛋白P53在蛋白质水平上具有相互作用,证实其具有生物学活性。结论成功构建Myc-CDK7的真核表达载体,为进一步探讨Myc-CDK7对细胞周期的调控奠定了实验基础。; 冀全博徐小洁张强梁迎春王涛李玲黄蓉周丽英史平安王岩叶棋浓; 关键词：细胞周期蛋白质依赖激酶类真核表达

人自噬相关基因12真核表达载体的构建及表达被引量：2: 2015年; 目的:构建带myc标签的自噬相关基因12(ATG12)的真核表达载体,获得myc-ATG12融合蛋白。方法:以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增人ATG12编码序列,将其插入p XJ-40-myc载体构建重组质粒,转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测表达情况;将重组质粒与ATG3表达质粒共转染293T细胞,免疫共沉淀法检测二者的相互作用。结果:myc-ATG12真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后融合蛋白获得表达,其相对分子质量约17×103,可与Flag-ATG3结合。结论:构建并表达了带myc标签的人ATG12真核表达载体,为进一步研究ATG12在自噬中的功能奠定了基础。; 纪贝贝张鹏徐小洁梁迎春黄蓉范忠义李玲郭靖洪甜叶棋浓杜楠; 关键词：克隆真核表达自噬

人自噬相关基因5真核表达载体的构建及表达鉴定被引量：2: 2015年; 目的:构建带Flag标签的自噬相关基因5(ATG5)的真核表达载体,获得Flag-ATG5融合蛋白。方法:以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增人ATG5编码序列,将其插入pc DNA3-Flag载体,转染人胚肾293T细胞后,Western印迹检测其表达情况;将该重组质粒与ATG12表达质粒共转染293T细胞,通过免疫共沉淀法检测2个蛋白的相互作用。结果:Flag-ATG5真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后融合蛋白获得表达,其相对分子质量约33×103;Flag-ATG5可与Myc-ATG12结合。结论:构建了带Flag标签的人ATG5真核表达载体,为进一步研究ATG5在自噬中的功能奠定了基础。; 纪贝贝赵晖徐小洁梁迎春黄蓉范忠义李玲郭靖洪甜冀全博叶棋浓杜楠; 关键词：克隆真核表达自噬

人细胞周期蛋白H基因的真核表达载体构建和表达及功能检测被引量：1: 2014年; 细胞周期蛋白H（cyclin H）是一种含323个氨基酸,相对分子质量（Mr）为38 000的细胞周期调控蛋白,普遍存在于真核细胞中,可与细胞周期蛋白依赖性激酶7（cyclin-dependent kinase 7,CDK7）共同参与细胞周期和基因转录的合理调控,其复合体可以催化各种CDK分子的活化,从而影响细胞增殖。; 冀全博徐小洁张强王涛冯滢滢李玲黄蓉周丽英叶棋浓王岩; 关键词：真核表达

BRCA1基因真核表达载体的构建及其功能验证: 2014年; 目的构建人乳腺癌易感基因BRCA1的真核表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人BRCA1基因,将其克隆到p XJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后转染到乳腺癌ZR75-1细胞中,通过Western印迹检测其表达情况,并用CCK8法测定细胞生长曲线。结果从人乳腺文库中扩增获得大小为5600 bp的DNA片段,并成功克隆至p XJ-40-myc载体上,经测序与目的序列完全一致;转染乳腺癌ZR75-1细胞后目的基因成功表达;细胞生长曲线结果显示,转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞生长缓慢;划痕实验说明,转染myc-BRCA1的乳腺癌细胞较空载体细胞迁袭缓慢。结论成功构建了带myc标签的人BRCA1真核表达载体,为进一步研究BRCA1在乳腺癌发生发展中的功能奠定了基础。; 李玲梁迎春王涛冀全博周丽英黄蓉郭靖徐小洁叶棋浓; 关键词：克隆真核表达乳腺肿瘤

人自噬相关基因3原核表达及蛋白纯化和鉴定被引量：3: 2015年; 自噬相关基因3（autophagy related gene 3,ATG3）及其对应的蛋白是一种泛素样缀合酶。研究发现,细胞自噬体的形成,离不开2个必需系统的参与：1个是对于ATG12与ATG5两种自噬蛋白结合形成微管相关蛋白-轻链3（microtubule-associated protein light chain 3,LC3）前体的调节系统,此阶段需要El样酶ATG7和E2样酶ATG10共同参与活化,1个是对于自噬体LC3蛋白的脂化系统[1],它们都属于泛素样蛋白结合系统，而ATG3作为泛素样缀合酶，在LC3蛋白的脂化系统中起到重要作用。; 纪贝贝徐小洁张立黄蓉范忠义王涛叶棋浓杜楠; 关键词：原核表达纯化自噬

myc-cyclin B1重组基因的克隆表达和细胞内定位: 2014年; 细胞周期蛋白B1（cyclin B1）是调控细胞由G2期向M期转换的重要因子之一, G2末期cyclin B1的表达达到高峰。激活细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin dependent kinase 2, CDK2）, 形成cyclin B1/CDK2复合物, 进入细胞核, 裂解一系列底物蛋白, 推动细胞从DNA合成期进入有丝分裂。肿瘤细胞的永生化与细胞周期的调控失常有密切关系, 并且发现, 作为一种细胞周期调节因子, cyclin B1与肿瘤有着非常密切的关系, 它是与肿瘤有直接关系的癌基因之一[1-2]。Cyclin B1[3]在许多癌细胞中均存在高表达[4-5], 如在卵巢癌、胃肠癌、宫颈癌和膀胱移行细胞癌中。在细胞周期G2/M起正性调控作用, 启动有丝分裂, cyclin B1高表达使细胞周期紊乱, 促进肿瘤的发生[6-7]。使用抗癌药可以降低cyclin B1表达, 细胞周期阻滞在G2/M期[8]。本实验拟构建cyclin B1的真核表达载体, 并验证其在细胞内的定位情况, 为进一步研究cyclin B1与肿瘤的关系奠定了实验基础。; 周丽英冯滢滢徐小洁梁迎春王涛黄蓉李玲冀全博郑志兵叶棋浓; 关键词：克隆真核表达

人造血相关PBX相互作用蛋白的原核表达及纯化鉴定: 2015年; 目的:构建带His标签的人造血相关PBX相互作用蛋白(HPIP)的原核表达载体,获得His-HPIP融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的pcDNA3.0-HPIP质粒为模板,采用PCR技术扩增HPIP编码序列,将其插入载体p ET-28a(+)中,经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Rossate株进行小量诱导,挑选能诱导出His-HPIP的菌液进行融合蛋白的纯化,采用SDS-PAGE和Western印迹检测融合蛋白的纯化效果,采用GST pull-down技术对蛋白的生物学功能进行初步鉴定。结果:双酶切和测序结果表明His-HPIP原核表达质粒构建成功;His pull-down实验证实His-HPIP蛋白和雌激素受体α存在相互作用,说明生物学活性良好。结论:原核表达并纯化出His-HPIP融合蛋白,为进一步研究HPIP在肿瘤发生发展中的功能奠定了基础。; 纪贝贝赵晖史平安徐小洁黄蓉李玲范忠义郭靖梁迎春吕朝辉叶棋浓杜楠; 关键词：原核表达纯化

人ATG4B的表达及蛋白纯化和鉴定被引量：4: 2015年; 目的构建含His标签的自噬相关蛋白4同源物B(ATG4B)重组质粒以得到His-ATG4B蛋白,初步鉴定其生物学活性。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出ATG4B基因的编码序列,插入p ET-28a(+)载体中得到重组质粒,经酶切鉴定后转化Rossate菌,挑选小量诱导出的His-ATG4B菌液进行His-ATG4B蛋白的纯化,SDS-PAGE和Western blot法检测His-ATG4B蛋白的纯化效果,GST pull-down技术对蛋白生物学功能进行鉴定。结果用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到大小约1100 bp的目的片段,插入p ET-28a(+)载体中构建出His-ATG4B重组质粒,酶切鉴定及测序结果均表明His-ATG4B质粒构建成功;转化Rossate菌并小量诱导,表达鉴定成功后纯化蛋白,得到相对分子质量(Mr)约为47 000的His-ATG4B蛋白,且SDS-PAGE检测蛋白纯化效果较好;GST pull-down实验证实His-ATG4B蛋白可以和LC3B蛋白在体外相互作用,生物学活性良好。结论本实验成功得到His-ATG4B蛋白,为研究ATG4B在自噬中的作用机制奠定实验基础。; 黄蓉徐小洁梁迎春张立王涛周丽英杜楠叶棋浓; 关键词：原核表达纯化自噬

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黄蓉

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