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大肠杆菌肠毒素基因突变体在乳酸菌中的表达与免疫学鉴定被引量：1: 2018年; 目的构建表达大肠杆菌肠毒素基因突变体mlt63的乳酸菌工程菌株,为黏膜免疫佐剂研究建立重要基础。方法从前期构建的质粒p BV-mlt63中经PCR扩增mlt63基因,经双酶切将mlt63与质粒载体p NZ8110连接。用连接产物转化大肠杆菌MC1061菌株,从重组菌株中提取p NZ8110-mlt63,用于电转化Lactococcus lactis NZ3900菌株;经质粒双酶切和测序,鉴定重组菌株L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63。采用nisin诱导重组乳酸菌表达m LT63,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 mlt63 PCR扩增产物长度与预期相符;重组菌株鉴定结果显示L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63构建正确;Western blot分析在重组菌株中检出2条mlt63表达的蛋白带,分子量分别为10 k D和40 k D。结论本研究首次将mlt63基因克隆至乳酸乳球菌中,并表达出具有抗原活性的蛋白,鉴于目前亟需安全有效的黏膜免疫佐剂,本研究发现将对该领域研究产生重要影响,对胃肠感染性疾病口服疫苗研究具有促进作用。; 王琛尹光辉尹光辉李健李健张荣光; 关键词：乳酸乳球菌肠毒素基因重组免疫佐剂

食管鳞状细胞癌组织中PLCE1蛋白表达与患者生存的关系被引量：3: 2017年; 目的观察食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中PLCE1蛋白表达变化,探讨其表达与食管癌患者预后的关系。方法收集河南省食管癌重点开放实验室资料库1997年3月至2011年12月手术切除的85例ESCC患者组织标本,对标本进行PLCE1免疫组织化学染色,采用Kaplan-Meier单因素与Cox多元回归进行生存分析。结果 85例ESCC患者中,失访5例,随访率为94.1%(80/85)。80例ESCC标本中PLCE1阳性表达率为77.5%(62/80)。PLCE1阳性表达与ESCC分化程度、浸润深度、淋巴结转移及家族史无显著相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier法生存分析结果显示,PLCE1阳性表达与ESCC患者生存率无显著相关性(P>0.05)。Cox回归分析结果显示,淋巴结转移与ESCC患者的生存时间相关(相对危险度为1.763,95%可信区间:下限为1.008,上限为3.084,P=0.047)。结论 PLCE1蛋白表达参与食管癌变机制,但不能预测ESCC患者预后。; 张惠娟张惠娟赵学科宋昕张朋吕双王琛; 关键词：食管鳞状细胞癌

幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白在乳酸菌中的表达及免疫活性被引量：2: 2017年; 目的构建表达幽门螺杆菌(H.pylori)中性粒细胞激活蛋白A(NapA)的重组乳酸乳球菌菌株,为研究NapA作为疫苗抗原和免疫调节剂的应用效果奠定基础。方法用PCR方法从H.pylori基因组DNA中扩增napA基因,将napA经Nae I和SphⅠ双酶切与表达载体pNZ8110连接,用电穿孔法转入乳酸乳球菌菌株NZ3900中,并通过SDS-PAGE和Western blots分析鉴定napA表达产物。结果扩增的nap A基因长度为435 bp,构建的重组乳酸乳球菌经nisin诱导可表达分子量约为19 kD的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的12.4%,该重组蛋白可被小鼠抗H.pylori血清识别。结论成功构建了表达NapA的重组乳酸乳球菌菌株,该菌株在H.pylori口服疫苗和黏膜免疫调节研究中具有应用潜力。; 彭晓燕张荣光段广才孙楠王琛张凌寒; 关键词：乳酸乳球菌幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白免疫活性免疫调节

幽门螺杆菌金属蛋白酶基因生物信息学分析被引量：5: 2019年; 目的测定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)金属蛋白酶(metalloprotease,Mtp)基因mtp编码区核苷酸序列,采用生物信息学方法分析其编码蛋白(Mtp)的结构特征和生物学功能。方法用PCR方法从Hp MEL-Hp27菌株基因组DNA中扩增mtp基因,并通过基因测序获得mtp基因序列,运用生物信息学软件分析其编码的蛋白Mtp的氨基酸序列、理化性质、跨膜区、信号肽、糖基化和磷酸化位点、空间结构以及抗原表位。结果 MEL-Hp27mtp基因编码区长615bp,编码204个氨基酸;生物信息学分析显示mtp基因在不同菌株间的同源性为91%～98%,其编码的Mtp蛋白为一种性质不稳定、偏碱性、亲水蛋白;该蛋白无跨膜区和信号肽,含有糖基化和磷酸化位点;二级结构中α螺旋占52.45%,延长链占16.67%,β转角占4.41%,无规则卷曲占26.47%;三级结构分析显示Mtp为球形低分子质量蛋白;该蛋白含有M48蛋白家族特征性结构域、B淋巴细胞和CTL淋巴细胞相关抗原表位。结论 Hp Mtp为小分子碱性亲水性蛋白,定位于胞质或胞核,可能参与细胞信号传递、功能调控和Hp感染免疫及其致病过程。; 余飞艳张惠娟张荣光王琛王海燕何梦雅范清堂段广才; 关键词：幽门螺杆菌金属蛋白酶生物信息学磷酸化位点抗原表位

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王琛