张龄
- 作品数：4 被引量：27H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 仙台病毒黑龙江省地方株的分离与鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的自本省普通级实验动物中分离并鉴定出仙台病毒地方毒株,为建立仙台病毒血清抗体检测方法奠定基础。方法通过鸡胚尿囊腔传代自普通级小鼠肺脏分离病毒,经血凝实验、血凝阻断实验和结构基因序列测定对分离得到的病毒进行鉴定;大量繁殖病毒并通过蔗糖密度梯度离心纯化,免疫动物制备阳性血清,用标准试剂盒检测阳性血清效价。结果自150份小鼠肺脏分离到2株有血凝性的病毒,经形态学、血清学和结构基因序列测定鉴定为仙台病毒,命名为SV-HLJ。SV-HLJ与标准毒株Fushimi核蛋白基因(N)的核苷酸、氨基酸同源性分别为99·6%和99·0%。结论分离并鉴定出了仙台病毒黑龙江省地方毒株,为检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 刘怀然张龄张天聪姜骞李昌文关云涛韩凌霞司昌德管海迪曲连东
- 关键词：仙台病毒
- 仙台病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达被引量：5
- 2006年
- 目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus,SV)核衣壳蛋白。方法根据GenBank上发表的仙台病毒(Sendai Virus,SV)核衣壳蛋白基因序列,设计并合成一对引物,通过RT-PCR扩增出核衣壳蛋白全长cDNA序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,于37℃1mmol/LIPTG条件下诱导表达,大肠杆菌裂解物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约60×103处出现一新蛋白带,与预期目的蛋白分子量相符。结果Western blot检测表明,表达产物能与兔抗SV阳性血清发生特异性反应,出现单一反应带,表明其具有免疫原性。结论为建立以重组NP蛋白为诊断抗原检测SV奠定基础。
- 姜骞刘怀然张龄朱洪伟曲连东
- 关键词：仙台病毒基因克隆基因表达
- 兔出血症病毒VP60蛋白的原核表达及检测方法初步应用被引量：8
- 2006年
- VP60是免出血症病毒（RHDV）的主要结构蛋白，也是免疫原性蛋白，与诱导抗病毒免疫反应直接相关，因而也是检测用首选抗原。本实验在原核系统pPRoEX^TMHTa中表达了VP60基因，经SDS—PAGE电泳中可见表达带。Western blot鉴定结果表明，重组蛋白可被RHD阳性血清特异性识别，具有相应的抗原性。将表达蛋白经SDS—PAGE电泳切胶纯化后免疫BALB／c小鼠，免疫血清经全病毒ELISA检测，效价可达1：3200-1：6400，经琼脂扩散试验检测效价为1：16。重组蛋白纯化、复性后，作为包被抗原初步建立了间接ELISA方法，并检测了48份免血清样品，与全病毒间接ELSIA试剂盒检测结果相同。实验结果表明．用原核系统表达的VP60蛋白．可以作为RHD新型诊断试剂的候选抗原。
- 刘怀然胡迎东陈洪岩张龄李昌文关云涛曲连东
- 关键词：兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因原核表达
- 兔出血症抗体间接ELISA检测试剂盒的研制与初步应用被引量：13
- 2006年
- 目的建立检测兔病毒性出血症（RHD）血清抗体的间接ELISA方法并组装成试剂盒，进行初步应用。方法通过差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯RHDV病毒粒子作为包被抗原，优化反应条件和筛选试剂，建立间接ELISA检测方法，组装试剂盒并对其总体性能进行评价。结果试剂盒敏感性为血凝抑制试验的4～32倍，重复性和特异性良好，保质期为4℃ 3个月。对105份兔血清进行随机检测，与血凝抑制试验的复核率为95％。结论本试剂盒可以在检测和科研中初步应用。
- 刘怀然关云涛李昌文张龄姜骞陈洪岩曲连东
- 关键词：出血病病毒酶联免疫吸附测定试剂盒
