王培立
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 一株普鲁兰酶产生菌的筛选及其基因克隆和酶学特性研究被引量：3
- 2013年
- 普鲁兰酶作为一种解支酶,能够特异地作用于多糖中的α-1,6糖苷键,将淀粉中高度分支的支链淀粉转变成直链淀粉。本文通过以普鲁兰糖为唯一碳源的功能平板筛选方法,从云南腾冲温泉淤泥中分离到1株产普鲁兰酶的菌株73号,经16S rDNA序列分析,该菌属于厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus sp.)。通过普鲁兰酶的保守区片段扩增及序列比对,最终从该菌中克隆得到普鲁兰酶编码基因pul73,全长2121bp,编码706个氨基酸。将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表达和纯化,获得酶蛋白Pul73最适温度50℃,最适pH6.0,在65℃有较好的热稳定性,保温30min后仍有72%的剩余酶活。50℃时Pul73对普鲁兰糖的Km为1.643mg/mL,其最大反应速度Vmax为1.34U/mg,kcat为535.8/s。
- 王培立初晓宇伍宁丰
- 关键词：普鲁兰酶基因克隆基因表达
- 芽胞杆菌高效分泌表达异源蛋白的研究进展被引量：3
- 2015年
- 外泌蛋白易于分离纯化,有利于以较低的生产成本获得大量的目标蛋白,因此分泌表达是一种理想的外源基因的表达方式。芽胞杆菌由于其具有较好的分泌能力,被认为是一种理想的表达外源基因的宿主。到目前为止已有大量来源于不同生物的外源基因在芽胞杆菌中实现了高效分泌表达。但是芽胞杆菌的分泌表达系统仍然存在很多问题,如对某些目的蛋白的分泌量低等,限制了其作为"细胞工厂"生产目标蛋白的应用。综述了芽胞杆菌的外泌系统,分析了芽胞杆菌分泌蛋白过程中的限制因素,并总结了相关的解决方案。
- 王培立王平田健伍宁丰姚斌
- 关键词：芽胞杆菌分泌表达
