罗盘
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医学院生殖与干细胞工程研究所更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠肝脏窦状内皮细胞分离和培养的一种新方法被引量：5
- 2010年
- 目的:建立小鼠肝窦状内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSEC)的分离培养方法,研究其生物学特性。方法:中性蛋白酶消化小鼠肝脏组织,Percoll密度梯度离心分离消化后的细胞悬液,用内皮细胞筛选培养基及酶差异消化法纯化LSEC;免疫细胞化学染色检测LSEC的表面标志,分析LSEC的超微结构,观察DiI荧光标记的乙酰低密度脂蛋白(acetylated-low density lipoprotein,DiI-Ac-LDL)摄取能力,以体外成血管能力分析LSEC的功能。结果:分离纯化后的细胞呈典型鹅卵石样内皮细胞形态,这些细胞表达VIII因子,不表达CD31,CD90和CK19,具有窦状内皮细胞特征性的窗孔结构;能摄取DiI-Ac-LDL,并有一定的成血管能力。结论:建立了一种分离、培养LSEC的方法,为研究LSEC的功能奠定了基础。
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- 关键词：条件培养基窗孔小鼠
- SPARC基因敲除小鼠的繁育及子代基因型的鉴定
- 2010年
- 目的:探讨富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白(SPARC)基因敲除小鼠的繁殖和鉴定方法,为进一步研究SPARC蛋白的功能奠定基础。方法:将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型。提取子鼠鼠尾基因组DNA,用PCR法扩增SPARC和Neo基因片段,通过限制性内切酶酶切反应,证实PCR扩增产物的正确性;应用Westernblot检测SPARC蛋白质的表达,进一步证实PCR鉴定方法的可靠性。结果:SPARC基因杂合子小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,SPARC基因缺失纯合子小鼠有繁殖能力。琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR产物分子量大小与预期的目的基因片段相对分子质量大小一致,酶切和Westernblot结果证实PCR结果可靠。结论:PCR方法能够准确鉴定SPARC基因突变小鼠基因型。
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- 关键词：基因敲除基因型鉴定
