孟刚
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 人MT1-MMP真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达及意义
- 2009年
- 目的:克隆人膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)基因,构建真核表达载体,并检测其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人正常肝组织中扩增MT1-MMP全长cDNA,将之与pMD18-T载体连接,测序后将该片段亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1中。将构建好的pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体经酶切鉴定后,采用脂质体法转染入HepG2细胞,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株。应用RT-PCR检测转染前后该细胞株MT1-MMP mRNA表达水平。结果:①RT-PCR获得长度约为704 bp的目的片段,与预期片段相符;②将pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定,得到约5400 bp和704 bp两个片段,测序结果证实所插入目的片段与GenBank中MT1-MMP cDNA序列匹配;③重组质粒转染株MT1-MMP mRNA表达水平(1.66±0.43)明显高于空质粒组(1.21±0.25)和对照组(1.19±0.18)(P<0.01)。结论:成功构建pcDNA3.1/MT1-MMP真核表达载体,并在人肝癌细胞株HepG2中稳定表达。
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- 关键词：膜型基质金属蛋白酶1基因转染真核表达
- MT1-MMP对人肝癌细胞浸润能力的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)对人肝癌细胞株浸润能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法将稳定表达MT1-MMP基因转染至HepG2细胞中,应用Western印迹法检测MT1-MMP蛋白表达;明胶酶谱分析法检测MMP-2酶原活性;体外侵袭实验检测细胞株浸润能力。结果重组质粒转染株MT1-MMP蛋白表达水平明显高于空质粒组和未转染组(P<0.01)。明胶酶谱分析实验发现,MT1-MMP组同时检测到72000酶原形式和64000活性形式的MMP-2,另两组只检测到72000酶原形式的MMP-2。体外侵袭实验结果显示,MT1-MMP组细胞穿过基质胶(Matrigel)的细胞数目明显多于其他两组(P<0.01)。结论MT1-MMP能显著增强肝癌细胞株的浸润能力,其机制主要是通过激活MMP-2酶原,降解肿瘤周围的基质成分实现的。
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- 关键词：膜型基质金属蛋白酶-1基质金属蛋白酶-2
- MT1-MMP对人肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)对人肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响。方法将稳定表达MT1-MMP基因转染至HepG2细胞中,应用RT-PCR、Ⅰ型胶原黏附和Matrigel侵袭小室实验,检测细胞MT1-MMP mRNA水平,体外黏附、侵袭和迁移能力的变化。结果重组质粒转染株MT1-MMP mRNA表达水平明显高于空质粒组和对照组(P<0.01)。MT1-MMP明显提高细胞Ⅰ型胶原黏附、迁移和Matrigel侵袭能力(P<0.01)。结论MT1-MMP过表达可促进HepG2细胞体外侵袭和转移,提示其可作为人肝癌抗侵袭治疗的分子靶点。
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- 关键词：膜型基质金属蛋白酶-1肝细胞癌
