- 人SOX7启动子荧光素酶报告质粒构建及HMGA2对其活性影响的研究被引量：1
- 2016年
- 目的研究发现,HMGA2促进肿瘤细胞发生EMT与其下游基因SOX7有关。为进一步验证转录因子HMGA2与其下游基因SOX7之间的调控关系,本研究通过构建人SOX7基因启动子荧光素酶报告质粒,采用荧光素酶报告实验观察HMGA2对SOX7基因启动子荧光素酶活性的影响,为研究HMGA2转录表达的调控机制提供必要的实验基础。方法采用PCR技术扩增人SOX7基因启动子序列(-1 549^+79nt),将SOX7基因启动子插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中构建质粒pGL3-SOX7-promoter;再分别将pGL3-SOX7-promoter、pGL3-basic-SOX7-promoter和对照质粒(pLV-UbC-IRES2-EGFP)、pGL3-SOX7-promoter和HMGA2表达质粒(pLV-UbC-HMGA2-IRES2-EGFP)3组质粒共转染293T细胞,培养48h后,检测3组荧光素酶的表达情况,观察HMGA2对SOX7基因启动子的调控作用。结果通过菌落PCR和核酸测序证实,人SOX7基因启动子荧光素酶报告质粒pGL3-SOX7-promoter构建成功;将pGL3-SOX7-promoter和HMGA2表达质粒(pLV-UbC-HMGA2-IRES2-EGFP)共转染293T细胞48h后,与对照组相比,SOX7基因启动子介导荧光素酶的活性降低约31%,受到明显抑制(P=0.003),提示HMGA2可能调控SOX7基因启动子的活性。结论本研究成功构建了SOX7基因启动子荧光素酶报告质粒,初步验证了SOX7是HMGA2下游的作用靶点。
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- 关键词：HMGA2启动子活性
