黄美金
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：成都军区昆明总医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PRDM5基因抑制前列腺癌细胞22Rv1生长被引量：2
- 2016年
- 目的探讨PRDM5基因在前列腺癌细胞中的抑癌作用。方法采用聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接等方法,克隆PRDM5基因并插入慢病毒载体中。将携带PRDM5基因的慢病毒质粒(或阴性对照质粒)与慢病毒包装质粒通过脂质体法共转染293T细胞,收集病毒上清,感染人前列腺癌细胞株22Rv1。用蛋白质印迹法检测细胞PRDM5的表达,细胞倍增实验和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆形成能力,软琼脂克隆形成实验检测细胞非锚着依赖性生长能力。结果成功构建PRDM5重组慢病毒载体,并包装获得慢病毒上清。将PRDM5重组慢病毒载体感染22Rv1细胞后,筛选得到稳定表达细胞株,蛋白质印迹法结果显示该细胞株能稳定表达外源性PRDM5蛋白。过表达PRDM5的前列腺癌22Rv1细胞的增殖能力[倍增时间:(52.5±1.4)h vs(44.0±1.3)h]、克隆形成能力[克隆形成数:(1 114±98)/皿vs(1 361±123)/皿]和非锚着依赖性生长能力[克隆形成数:(94.6±8.7)/孔vs(154.0±3.5)/孔]均低于阴性对照组(P<0.05)。结论前列腺癌22Rv1细胞中PRDM5的过表达具有抑制肿瘤细胞增殖、克隆形成和非锚着依赖性生长的能力。
- 王洋夏梓元黄美金任善成朱焱高莉贺湘洁徐光丁桂龄陆斌孙颖浩
- 关键词：前列腺肿瘤细胞增殖克隆形成
- CDHR2基因条件性敲除小鼠模型的构建及鉴定被引量：1
- 2017年
- 目的:构建CDHR2基因条件性敲除小鼠模型,为研究CDHR2基因的生物学功能提供条件。方法:构建CDHR2基因条件打靶载体,电转入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用G418和GANC筛选阳性细胞克隆。胚胎注射阳性ES细胞入小鼠囊胚,获得嵌合体小鼠。嵌合体小鼠与Cre小鼠交配获得条件性敲除小鼠。分别通过PCR方法和免疫组织化学方法对CDHR2的敲除结果进行验证。结果:成功构建打靶载体,并获得6个正确同源重组的ES细胞阳性克隆。阳性ES细胞克隆注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得5只嵌合鼠。嵌合鼠再与Flp小鼠交配,获得6只阳性F1代去Neo小鼠。去Neo小鼠与Cre小鼠杂交,获得CDHR2基因肠道特异性敲除小鼠。免疫组织化学检测表明,阳性小鼠肠道组织中的CDHR2基因被特异性敲除,而肾脏组织CDHR2基因的表达没有受到影响。结论:成功构建CDHR2基因肠道特异性敲除小鼠,为进一步研究CDHR2基因的作用奠定了基础。
- 夏梓元蒋华波王洋黄美金陆斌
- 关键词：基因敲除CRE/LOXP系统
