郑金
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪肺炎支原体P46-P65重组蛋白的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
- 2024年
- 为建立猪肺炎支原体(Mhp)血清学调查及免疫评估方法,本研究利用DNAStar生物学软件对Mhp的P46和P65进行抗原表位分析,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得P46-P65融合基因,构建重组表达质粒pETP46-P65,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的重组P46(aa33~aa419)-P65(aa307~aa627)蛋白(rP46-P65)。以纯化的r P46-P65为包被抗原,经优化各反应条件后建立了检测Mhp抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示所建立的方法与CSFV、FMDV、PEDV、PCV2、PRV、PRRSV和APP等阳性血清均无交叉反应。该方法可检测到最高稀释至6 400倍的Mhp阳性血清,批内和批间变异系数均小于5%。利用IDEXX试剂盒和本研究建立的方法同时检测298份临床血清样品,前者的检测阳性率为62.4%(186/298),后者的检测阳性率为73.8%(220/298),两者检测结果的总符合率为88.6%。IDEXX检测为阳性的血清,采用本研究建立的ELISA方法检测也均为阳性;而部分Mhp阳性猪经IDEXX试剂盒检测为阴性的血清,该ELISA方法检测结果却为阳性,其中79.4%(27/34)检测结果有差异的血清经Mhp颜色变化试验证明均为阳性,表明本研究建立的ELISA方法的敏感性明显高于IDEXX方法。本研究建立的检测猪Mhp抗体的间接ELISA方法与目前广泛使用的方法相比优势明显,为临床血清流行病学调查及血清抗体水平评估提供了可行方法。
- 杨振宇李璇刘一宁谢邵波郑金郑金林美婷刘腾唐红剑余兴龙
- 关键词：猪肺炎支原体间接ELISA
- 猪繁殖与呼吸综合征未免疫猪群的抗体消长规律研究被引量：2
- 2015年
- 为研究未免疫猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的猪场的PRRSV抗体消长规律,试验采集A、B、C三个规模化猪场共147头猪的血液样本,分离血清,用IDEXX试剂盒检测血清中的PRRSV抗体。检测结果表明A、B、C三个猪场的猪群具有相似的PRRSV抗体消长规律,即哺乳仔猪体内存在PRRSV抗体,随着猪周龄的增长,PRRSV抗体水平降低,PRRSV抗体水平下降到最低后,随着PRRSV的感染,机体产生免疫应答,PRRSV抗体水平快速上升。可为猪场制定合理的PRRSV疫苗免疫程序提供指导。
- 郑金黄婕峰朱娜方超葛猛黎满香
- 关键词：PRRSV阳性率
- 湖南省猪源粪肠球菌毒力基因的检测及部分表型的测定被引量：2
- 2014年
- 采用PCR方法对湖南省分离的42株粪肠球菌的8种毒力相关的基因即溶血素基因cylA、明胶酶基因gelE、表面蛋白基因esp、胶原蛋白黏附素基因ace、聚集物质基因asa1、心内膜炎有关的抗原基因efaA以及2个假定毒力相关基因EF3314、EF0591进行了检测,并用平板法测定了这些分离株的溶血性和明胶溶解性。结果显示,24株粪肠球菌分离株普遍存在EF3314基因,检出率为100%;其次是efaA基因,检出率为92.9%;其他毒力基因gelE、ace、asa1、cylA、esp、EF0591的检出率为分别为88.1%、59.5%、52.4%、54.8%、38.1%、4.76%。菌株在绵羊血琼脂平板上以α溶血为主,而在家兔血琼脂平板中以β溶血为主,家兔血琼脂平板溶血的检出率(95.2%)高于绵羊血琼脂平板溶血的检出率(88.1%)。HN45菌株属于cylA基因阳性菌株却表现为不溶血,而19株cylA基因阴性菌株中只有YZ28菌株在家兔血琼脂平板上表现不溶血,HH57菌株在绵羊血琼脂平板上表现不溶血。5株gelE基因阴性分离株只有2株不分解明胶,37株gelE基因阳性分离株中,有32株分解明胶,5株gelE基因阳性菌株不能分解明胶。结果表明,这42株粪肠球菌中每株菌最少携带1个毒力因子基因,有些菌株最多携带7个毒力因子基因;菌株的溶血与明胶溶解的基因型和表现型并非完全一致。
- 崔成郑金王送林田世成黎满香
- 关键词：粪肠球菌毒力基因溶血性
- 猪瘟E^rns蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其抗体间接ELISA方法的建立
- 2020年
- 将人工合成的CSFV E^rns基因插入到pFastBac1获得重组转移载体pFastBac1-E^rns,在DH10Bac大肠杆菌中转座后提取杆粒并转染Sf9细胞,用获得的重组杆状病毒感染High Five细胞表达E^rns蛋白并通过亲和层析进行纯化。以纯化后E^rns蛋白作为诊断抗原,通过摸索抗原包被量和抗体血清稀释倍数等条件,建立检测CSFV E^rns抗体的间接ELISA方法(E^rns-iELISA)。结果显示,E^rns蛋白得到有效表达,相对分子质量约为35000;确定的ELISA抗原包被量为120ng/孔、血清稀释100倍,酶标二抗稀释6000倍,封闭条件为37℃30min,TMB底物作用15min,临界值为0.329。用E^rns-iELISA方法检测92份阴性血清,其特异性为88.04%,与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应;对171份阳性血清的敏感性为92.98%;批内和批间重复的平均变异系数为7.4%和10.74%。结果表明,本试验所建立的E^rns-iELISA方法重复性好,具有较高的检测特异性,且对CSFV疫苗毒和国内流行毒株都具有较高的检测敏感性,具有潜在的开发和应用价值。
- 任杰葛猛李润成郑金凌同黎满香李岱霞张磊余兴龙
- 关键词：猪瘟病毒杆状病毒表达系统抗体间接ELISA
- 减蛋下降综合征病毒重组Knob-S基因在杆状病毒系统中的表达及其免疫原性鉴定被引量：2
- 2015年
- 为以杆状病毒系统在Sf9细胞中表达含减蛋下降综合征病毒(EDSV)重组Knob-S蛋白质来制备亚单位疫苗,采用PCR方法从鸭胚繁殖的EDSV尿囊液中扩增Knob-S基因,并克隆到p Fast Bac1中,经转化DH10Bac获得重组r Bac-Knob-S。将r Bac-Knob-S转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,利用重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白质。重组Knob-S蛋白质经Western blotting和间接免疫荧光试验鉴定均为阳性。将重组Knob-S蛋白质制备成疫苗,按1羽0.3 ml(含50μg的重组病毒)免疫6周龄非免海兰褐雏鸡,在免疫后第2周可检测到血凝抑制抗体效价达8.5 lg2,在第3周达到高峰(9.5 lg2),表明重组Knob-S蛋白质具有较好的免疫原性。
- 郑金陈滔陆吉虎高峰候继波黎满香唐应华
- 关键词：真核表达杆状病毒表达系统
