冯亚宁
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库多样性的生物信息学分析
- 2016年
- 【目的】骆驼免疫系统中只存在重链抗体,其可变区VHH片段是最小的天然抗体片段。通过对双峰驼VHH基因进行序列分析,了解双峰驼VHH基因特征,分析VHH文库多样性组成。【方法】采用新疆双峰驼VHH特异引物扩增全部抗体基因片段,连接到M13噬菌粒载体上,与p III蛋白融合表达在噬菌体表面,构建噬菌体展示文库。基因测序和菌落PCR方法,分析文库大小和阳性克隆插入率。NCBI-Ig GBLAST工具对抗体序列进行IMGT编号命名,Web Logo工具分析抗体保守序列分布频率,MEGA6软件对VHH序列进行同源性比对和系统进化树构建。【结果】利用免疫的新疆双峰驼淋巴细胞,构建了库容量为1.4×109的VHH抗体噬菌体展示文库。对91个随机挑选的文库TG1单菌落进行PCR。结果表明该文库VHH阳性插入率为97%,DNA测序表明文库多样性为97.8%。对91个克隆DNA测序结果进一步分析表明,这些基因中除2个为常规VH抗体外,其余均为重链VHH抗体。根据抗体序列中的特征氨基酸分布,将91个抗体序列划分为7个亚群。【结论】构建的新疆双峰驼VHH文库多样性较好,生物信息学分析揭示出文库中多样性克隆的分布和特征,有助于新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库的进一步构建。
- 冯亚宁姜志强马晓玲李江伟
- 关键词：双峰驼单域抗体生物信息学分析
- 抗CD133纳米抗体的分离与鉴定被引量：2
- 2016年
- [目的]获得骆驼来源的与人CD133抗原特异性结合的纳米抗体。[方法]从3峰新疆双峰驼外周血中分离淋巴细胞,采用巢式PCR扩增获得cDNA并构建VHH天然噬菌体展示文库。包被CD133-606于ELISA板,对天然文库进行3轮亲和筛选,菌落PCR和基因测序确定能结合CD133的候选克隆。挑选重复序列VHH克隆构建到pET28a并转BL21用IPTG诱导表达。IMAC方法纯化重组VHH抗体蛋白,Western Blot和ELISA检测与CD133的抗原结合性。[结果]从109淋巴细胞中构建了库容为1.4×109cfu的噬菌体展示文库,Western Blot及ELISA结果显示重复4次核苷酸序列的VHH-13的纳米抗体能与CD133-606有较好的结合活性。[结论]通过对VHH天然展示文库的亲和筛选及鉴定,成功获得了能与人重组CD133胞外区特异结合的纳米抗体。
- 李玲霞翟田甜马晓玲冯亚宁李江伟
- 关键词：CD133ELISA
- 抗CD47胞外区骆驼多克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2015年
- 验证人CD47蛋白能否在新疆双峰驼中产生高滴度抗体;为制备高亲和力的抗CD47纳米抗体提供实验依据。构建CD47胞外区原核表达载体,诱导表达及纯化CD47蛋白,免疫新疆双峰驼。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot分别检测骆驼多克隆抗体的效价及与CD47蛋白特异性结合活性。结果显示,成功构建CD47胞外区原核表达载体,获得纯度大于90%的CD47蛋白,表达纯化的CD47重组蛋白可与抗CD47单抗B6H12.2特异结合;ELISA测定CD47重组蛋白免疫骆驼7次后,抗CD47多克隆抗血清的效价至少达到1∶200 000,免疫印迹检测表明抗CD47骆驼抗血清与CD47重组蛋白、Jurkat和Raji细胞表面表达的CD47均能特异结合。重组人CD47蛋白可以在骆驼体内激发高滴度抗体反应。
- 贾二坷冯亚宁李江伟
- 关键词：CD47多克隆抗体
